目的:探讨shRNA靶向沉默精氨酸琥珀酸合成酶(ASS1)基因后对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响.方法:应用RT-PCR及Western blot检测5种肝癌细胞系中ASS1的表达情况;将shRNA-ASS1转染入SMMC-7721细胞(shRNA-ASS1组),同时设空白对照组和阴性对照组,观察转染后细胞的生长变化,运用Western blot鉴定其对ASS1基因的沉默效果;采用CCK-8法检测各组转染3d后的细胞增殖情况;流式细胞术检测各组转染24 h后细胞凋亡的情况.结果:ASSl mRNA和蛋白在Changliver、SMMC-7721、QGY-7703、HepG2和HepG3B细胞中的表达差异有统计学意义(FmRNA=1 129.140,F蛋白=1 114.240,P均＜0.001),ASS1在SMMC-7721和HepG3B肝癌细胞系中呈高表达.CCK-8实验显示,与阴性对照组及空白对照组相比,shRNA-ASS1组细胞增殖率降低(F=7.176,P=0.007).细胞凋亡实验显示,shRNA-ASS1组细胞凋亡率高于阴性对照组和空白对照组(F=88.120,P＜0.001).结论:沉默ASS1基因可抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡.

目的 探讨脐血单个核细胞甲基丙二酸单酰CoA变位酶基因(MUT)、精氨酸琥珀酸合成酶基因(ASSI)突变与新生儿遗传性代谢病易感性的关系.方法 选取2014年5月～2019年6月在本院妇产科分娩的16743例新生儿,均采集脐带血行单个核细胞MUT、ASS1基因检测,且行遗传性代谢病筛查,根据筛查、确诊结果将所有新生儿分为遗传性代谢病组(疾病组)与无遗传性代谢病组(对照组).对比2组MUT、ASS1基因突变情况,并采用Logistic回归分析法分析脐血单个核细胞MUT、ASS1基因突变与新生儿遗传性代谢病易感性的关系.结果 6743例新生儿中共检测出有28例伴有MUT基因突变,有24例伴有ASS1基因突变;16743例新生儿最终确诊为45例发生遗传性代谢病,发生率为0.27％,其中有22例伴有MUT基因突变,有17例伴有ASS1基因突变;疾病组早产、过期产、足月产、低出生体重、巨大儿、正常体重的占比与对照组对应各指标占比差异无统计学意义(P＞0.05),疾病组MUT基因突变、ASS1基因突变、有家族史占比均明显高于对照组各对应指标占比(P＜0.05),且经多因素Logistic回归分析显示,MUT基因突变、ASS1基因突变、家族史均是新生儿遗传性代谢病易感性的风险因素(0R=3.889、3.501、2.986,P＜0.05).结论 脐血单个核细胞MUT基因突变、ASS1基因突变均可增加新生儿遗传性代谢病发病风险,临床中可在孕期通过检测MUT、ASS1基因情况而加强产前筛查,以减少缺陷患儿的出生.

目的 探讨siRNA干扰自噬相关基因7(Atg7)后,对ECA109细胞放疗敏感性的影响以及对精氨酸循环相关通路的调控.方法 食管癌ECA109细胞分为Ctrl组、siRNA组、Ctrl+R8Gy组(8Gy放射剂量处理的转染Atg7-Ctrl的ECA109细胞)和siRNA+R8Gy组(8Gy放射剂量处理的转染Atg7-siRNA的ECA109细胞);采用Western blotting法分别检测各组细胞Atg7、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、精氨酸琥珀酸合成酶1(ASS1)和精氨酸琥珀酸裂解酶(ASL)蛋白的表达.CCK8实验检测精氨酸对ECA109细胞的影响,绘制不同浓度(0、8、16、32、64、128 mmol/L)精氨酸处理下的细胞存活曲线,并计算其IC50和IC10,将IC10作为后续实验的作用浓度.采用精氨酸和siRNA分别处理细胞,对细胞进行8Gy照射,24 h后通过计算细胞数量评估细胞的死亡率.结果 无论放疗前后,siRNA干扰均可使细胞的Atg7蛋白下调(P<0.01).与Ctrl组相比,Ctrl+R8Gy组自噬相关蛋白Beclin-1和LC3Ⅱ上调(P<0.01);与Ctrl+R8Gy组相比,siRNA+R8Gy组自噬相关蛋白Beclin-1和LC3Ⅱ下调(P<0.01).与Ctrl+R8Gy组相比,siRNA+R8Gy组精氨酸循环相关通路蛋白ASS1和ASL上调(P<0.01).精氨酸对ECA109细胞具有增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖性.放疗后24 h,细胞死亡量分析显示,siRNA干扰可以提高细胞死亡率(F=73.59,P<0.001),添加精氨酸可以提高细胞死亡率(F=158.72,P<0.001),siRNA和精氨酸同时作用时细胞死亡率最高(F=7.88,P=0.02).结论 放疗可以诱导ECA109细胞发生自噬,Atg7敲低可以拮抗放疗诱导的自噬,提高放疗诱导的ECA109细胞死亡率,增加ECA109细胞对放疗的敏感性.Atg7敲低可以调控ECA109细胞放疗后精氨酸循环相关通路蛋白,提高精氨酸浓度增加ECA109细胞的放射敏感性.

大黄酸是从大黄、芦荟、何首乌等中提取的一种蒽醌类化合物,本研究通过蛋白质芯片技术筛选大黄酸潜在作用靶点,并探究其抑制结直肠癌的潜在机制.采用集落形成实验和划痕实验分别检测大黄酸对人HCT116细胞系增殖和迁移能力影响;利用蛋白质芯片技术筛选大黄酸靶向蛋白,对大黄酸特异性结合蛋白进行KEGG和蛋白互作分析;利用qRT-PCR和Western blot技术检测大黄酸对HCT116细胞中B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白(BCL-2-associated X protein,BAX)、B 淋巴细胞瘤-2 基因(B-cell lymphoma-2,BCL-2)和精氨基琥珀酸合成酶 1(argininosuccinate synthetase 1,ASS1)表达水平影响;并通过氧化偶氮甲烷与葡聚糖硫酸钠(azoxymethane and dextran sodium sulfate,AOM/DSS)联合诱导的结直肠癌模型小鼠验证大黄酸的体内抗肿瘤效果,实验动物操作均按照动物福利和华南农业大学实验动物伦理委员会标准执行,并得到伦理委员会的批准.结果表明,大黄酸特异性结合蛋白主要参与氨基酸合成代谢,尤其是精氨酸合成代谢信号通路;并以浓度依赖性抑制HCT116细胞增殖和迁移.大黄酸作用HCT116细胞24h后,显著增强BAX和ASS1表达,以及细胞一氧化氮水平;在结直肠癌小鼠模型中,大黄酸显著缓解AOM/DSS诱导的体重下降,降低便隐血评分,增强结肠肿瘤组织中BAX和ASS1的表达,并提高血清中精氨酸和一氧化氮含量;IHC和HE染色表明,大黄酸减轻AOM/DSS诱导的结直肠癌小鼠结肠组织中Ki67表达及巨噬细胞浸润,延缓肿瘤形成.综上,大黄酸可通过精氨酸关键限速酶ASS1,调节精氨酸和NO代谢,从而发挥抗肿瘤活性.

目的 探讨脐血单个核细胞甲基丙二酸单酰CoA变位酶基因(MUT)、精氨酸琥珀酸合成酶基因(ASS1)基因突变与新生儿遗传性代谢病易感性的关系.方法 选取2015年5月一2020年6月在宁夏回族自治区妇幼保健院妇产科分娩的16 743例新生儿为研究对象,所有研究对象均采集脐带血行单个核细胞MUT、ASS1基因检测,且行遗传性代谢病筛查,根据筛查、确诊结果将所有新生儿分为遗传性代谢病组(疾病组)和无遗传性代谢病组(对照组).比较两组研究对象MUT、ASS1基因突变情况,并采用logistic回归分析法分析脐血单个核细胞MUT、ASS1基因突变与新生儿遗传性代谢病易感性的关系.结果 16 743例新生儿中共检测出28例伴有MUT基因突变,24例伴有ASS1基因突变;16 743例新生儿最终确诊为45例发生遗传性代谢病,发生率为0.27％,其中有22例伴有MUT基因突变,有17例伴有ASS1基因突变.疾病组分娩周期(早产、过期产及足月产)、出生体质量(低出生体质量、巨大儿及正常体质量)占比与对照组比较,差异均无统计学意义(均P＞O.05),疾病组MUT基因突变、ASS1基因突变及有家族史占比均明显高于对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).多因素logistic回归分析结果显示,MUT基因突变、ASS1基因突变及家族史均是新生儿遗传性代谢病易感性的风险因素(Waldx2=26.460、21.221及14.632,OR=3.889、3.501及2.986,均P＜0.05).结论 脐血单个核细胞MUT基因突变和ASS1基因突变均可增加新生儿遗传性代谢病发病风险,临床中可在孕期通过检测MUT、ASS1基因情况而加强产前筛查,以减少缺陷患儿的出生.