目的:探讨低物质的量浓度过氧化氢预处理对小鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）氧化应激性凋亡的作用及其机制。方法:采用实验研究方法。通过全骨髓培养法从2只2周龄雄性BALB/c小鼠中分离培养BMSC，鉴定后取第3~7代对数生长期细胞进行实验。将细胞按随机数字表法（分组方法下同）分为用相应终物质的量浓度过氧化氢处理的0 μmol/L过氧化氢组（即不加入过氧化氢，下同）、25 μmol/L过氧化氢组、50 μmol/L过氧化氢组、100 μmol/L过氧化氢组、150 μmol/L过氧化氢组、200 μmol/L过氧化氢组、250 μmol/L过氧化氢组、300 μmol/L过氧化氢组，培养24 h后，用流式细胞术检测细胞凋亡率（样本数为4）。将细胞分为用相应终物质的量浓度过氧化氢处理的0 μmol/L过氧化氢组、25 μmol/L过氧化氢组、50 μmol/L过氧化氢组、100 μmol/L过氧化氢组，培养24 h后，用蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白表达，计算Bcl-2/Bax比值（样本数为3）。将细胞分为用相应终物质的量浓度过氧化氢处理的0 μmol/L过氧化氢组、25 μmol/L过氧化氢组、50 μmol/L过氧化氢组、100 μmol/L过氧化氢组、200 μmol/L过氧化氢组、300 μmol/L过氧化氢组，培养24 h后，用蛋白质印迹法检测糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）及磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）的蛋白表达（样本数为3）。将细胞分为用相应终物质的量浓度过氧化氢处理的0 μmol/L过氧化氢组、50 μmol/L过氧化氢组、300 μmol/L过氧化氢组，以及预先加入50 μmol/L过氧化氢刺激12 h再加入300 μmol/L过氧化氢的过氧化氢预处理组，培养24 h后，用倒置荧光显微镜（非荧光条件）和免疫荧光法观察细胞形态和生长情况，用流式细胞术检测细胞凋亡率，用蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax、胱天蛋白酶3（caspase-3）、caspase-9、剪切型caspase-3、剪切型caspase-9、GSK-3β及p-GSK-3β蛋白表达，计算Bcl-2/Bax比值，样本数均为3。对数据进行单因素方差分析、Bonferroni检验。结果:培养24 h后，与0 μmol/L过氧化氢组比较，25 μmol/L过氧化氢组、50 μmol/L过氧化氢组、100 μmol/L过氧化氢组细胞的凋亡率均无明显变化（ P>0.05），150 μmol/L过氧化氢组、200 μmol/L过氧化氢组、250 μmol/L过氧化氢组、300 μmol/L过氧化氢组细胞凋亡率均明显上升（ P<0.01）。培养24 h后，与0 μmol/L过氧化氢组比较，25 μmol/L过氧化氢组、50 μmol/L过氧化氢组细胞Bcl-2/Bax比值均明显增加（ P<0.05或 P<0.01），100 μmol/L过氧化氢组细胞Bcl-2/Bax比值显著减少（ P<0.05）。培养24 h后，与0 μmol/L过氧化氢组比较，25 μmol/L过氧化氢组、50 μmol/L过氧化氢组细胞GSK-3β蛋白表达均无明显变化（ P>0.05），p-GSK-3β蛋白表达均显著增加（ P<0.01）；100 μmol/L过氧化氢组细胞GSK-3β、p-GSK-3β蛋白表达均无明显变化（ P>0.05）；200 μmol/L过氧化氢组、300 μmol/L过氧化氢组细胞GSK-3β蛋白表达均明显增加（ P<0.05），p-GSK-3β蛋白表达均显著减少（ P<0.05）。培养24 h后，0 μmol/L过氧化氢组与50 μmol/L过氧化氢组细胞形态及生长情况相近，均正常，与之相比，300 μmol/L过氧化氢组细胞变小、变圆，细胞突起变短或消失，细胞核出现空化，细胞脱落明显增多；过氧化氢预处理组大部分细胞形态正常，细胞脱落少于300 μmol/L过氧化氢组，细胞核形态正常。培养24 h后，4组间细胞caspase-9蛋白表达相近（ P>0.05）。与0 μmol/L过氧化氢组比较，50 μmol/L过氧化氢组细胞凋亡率以及剪切型caspase-9、caspase-3、剪切型caspase-3的蛋白表达均无明显变化（ P>0.05），Bcl-2/Bax比值明显增加（ P<0.05）；300 μmol/L过氧化氢组细胞凋亡率显著升高（ P<0.01），剪切型caspase-9、caspase-3、剪切型caspase-3蛋白表达均明显增加（ P<0.01），Bcl-2/Bax比值明显减少（ P<0.05）。与300 μmol/L过氧化氢组比较，过氧化氢预处理组细胞凋亡率显著下降（ P<0.01），剪切型caspase-9、caspase-3、剪切型caspase-3的蛋白表达均明显减少（ P<0.05或 P<0.01），Bcl-2/Bax比值显著增加（ P<0.01）。培养24 h后，0 μmol/L过氧化氢组、50 μmol/L过氧化氢组、300 μmol/L 过氧化氢组、过氧化氢预处理组细胞GSK-3β、p-GSK-3β蛋白表达分别为1.09±0.14、0.62±0.17、1.35±0.21、0.74±0.34，0.68±0.03、0.85±0.08、0.38±0.10、0.54±0.09。与0 μmol/L过氧化氢组比较，50 μmol/L过氧化氢组细胞p-GSK-3β蛋白表达明显增加（ P<0.05）；300 μmol/L过氧化氢组细胞GSK-3β蛋白表达明显增加（ P<0.05），p-GSK-3β蛋白表达明显减少（ P<0.01）。与300 μmol/L过氧化氢组比较，过氧化氢预处理组细胞GSK-3β蛋白表达明显减少（ P<0.01），p-GSK-3β蛋白表达明显增加（ P<0.01）。 结论:50 μmol/L可能是过氧化氢预处理小鼠BMSC的最佳物质的量浓度，50 μmol/L过氧化氢预处理通过抑制GSK-3β活性对抗线粒体途经的氧化应激性凋亡。

目的 观察重组人红细胞生成素(rHuEPO)对戊四氮(PTZ)点燃的癫痫持续状态(SE)的SD大鼠海马神经元的影响,应用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002,观察X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的变化情况,进一步探讨rHuEPO作用的可能机制.方法 采用PTZ点燃大鼠SE模型,将大鼠随机分为正常对照组(生理盐,NS)、PTZ组(PTZ+NS)、rHuEPO组(PTZ+rHuEPO)、LY294002组(PTZ+LY294002+rHuEPO)、二甲基亚砜(DMSO)对照组(PTZ+DMSO+rHuEPO),检测大鼠行为学和脑电图(EEG)的改变及苏木精-伊红染色观察海马病理学的改变;免疫组织化学法观察磷酸化蛋白激酶B(p-PKB/p-Akt)、X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达;反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠海马XIAPmRNA的表达,Western blot方法检测各组大鼠海马Akt、p-Akt、XIAP蛋白的表达.结果 PTZ点燃大鼠SE后下调了p-Akt、XIAP的表达;rHuEPO可以增加p-Akt、XIAP的表达,发挥神经保护作用;加入PI3K抑制剂LY294002,海马p-Akt、XIAP蛋白、XIAPmRNA的表达较rHuEPO组减少,减弱了rHuEPO的保护作用.结论 从正反两个方面佐证了PI3K/Akt信号通路是rHuEPO发挥神经保护作用的通路之一,其作用机制可能是rHuEPO活化PI3K/Akt通路后,对线粒体凋亡途径的相关调控因子XIAP的表达进行了调控,进而介导线粒体凋亡途经,发挥抗凋亡、促存活的神经保护作用.

背景 七氟醚作为一种常用的吸人性麻醉药,被广泛应用于全身麻醉.近年来,许多研究表明,七氟醚后处理可以保护脑组织对抗脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤,其作用机制是多方面的,主要包括增强脑的抗缺血能力,减少脑梗死体积和脑水肿程度,减轻脑细胞氧化应激、炎症反应,抑制脑细胞的凋亡.其中,抑制脑细胞的凋亡扮演了重要的角色.目的 就七氟醚后处理脑保护作用相关的细胞凋亡信号转导通路进行综述. 内容 重点阐述七氟醚后处理的脑保护作用及其对细胞凋亡的线粒体途经和内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)途经信号转导通路的调控. 趋向 更好地了解七氟醚后处理脑保护作用的分子机制,从而为临床脑I/R患者的早期治疗提供指导.

目的 探讨晶状体后囊膜混浊(posterior capsular opacification,PCO)过程中转化生长因子-β2(transforming growth factor β2,TGF-β2)诱导晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)凋亡的机制.方法 用不同浓度TGF-β2(0、0.1、1、10 μg/L)处理HLEC后,Western blot检测TGF-β2诱导的线粒体途径依赖的细胞凋亡相关蛋白表达;流式细胞仪检测5 μg/L TGF-β2诱导细胞凋亡的具体形式,以及5μg/L TGF β2处理细胞36 h对细胞周期的影响.结果 TGF-β2可明显增加Caspase3的表达(P＜0.001),促凋亡蛋白Bax与抑凋亡蛋白Bcl-2的表达比例失调(P＜0.001)并呈浓度依赖性,激活内源性线粒体途径的Bax/Bcl 2 caspase3通路的凋亡.5μg/L的TGF-β2可以诱导HLEC发生凋亡(P＜0.05),处理细胞36h后可导致G1/S周期阻滞.结论 PCO过程中伴随TGF-β2诱导的线粒体途经的细胞凋亡,可能参与了PCO的形成过程,将为PCO发病机理及药物开发提供新思路.

目的 研究石榴汁含样血清对肝癌细胞JHH-7凋亡与迁移的影响,并探讨其可能的机制.方法 雄性SD大鼠随机分为石榴汁组(灌胃石榴汁20 mL/(kg·bw))和空白组(灌胃等量生理盐水),连续灌胃7 d,2次/d.末次灌胃后腹主动脉采血,离心获得含样和空白血清,分别干预肝癌细胞JHH-7,并以胎牛血清作为对照.MTT法检测细胞活性,计算细胞存活率;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞的凋亡情况,Western blot检测线粒体凋亡途径相关蛋白Bcl-2、Bax、p53、Caspase-3、Cytochrome-c(Cyt-C)和 Caspase-9以及迁移相关蛋白 MMP2、MMP9和 TIMP2的表达;划痕实验检测细胞的迁移能力.结果 与空白血清相比,含样血清可抑制JHH-7细胞的增殖,具有时间依赖性,且空白血清和含样血清对人正常肝细胞L02未表现出抑制作用;与空白血清相比,含样血清干预JHH-7细胞后,细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),激活了 Bcl-2家族蛋白,进一步导致线粒体损伤,诱发了线粒体途径诱导的细胞凋亡,相关蛋白p53、Caspase-3、Cyt-C和Caspase-9表达上调,Bcl-2的表达下调,Bax/Bcl-2比值增加(P＜0.05);与空白血清相比,含样血清抑制了 JHH-7细胞的迁移,且相关蛋白MMP2和MMP9的表达下调,TIMP2的表达上调,TIMP2/MMP2比值增加(P＜0.05).结论 石榴汁含样血清通过线粒体途经诱导肝癌细胞JHH-7的凋亡,并且通过调节MMP2/TIMP2和MMP9表达的平衡抑制JHH-7的迁移,从而发挥抗肝癌作用.

目的 探讨序列相似性家族134成员B(FAM134B)介导的内质网自噬在内质网应激(ERS)诱导的肝细胞凋亡中的作用及分子机制.方法 采用(0、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0)mmo1/L的二硫苏糖醇(DTT)处理BRL-3A大鼠肝细胞48 h,实时无标记细胞动态分析(RTCA)检测肝细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测ERS及内质网自噬相关蛋白、内质网-线粒体接触位点相关蛋白及线粒体凋亡途经相关蛋白表达的影响.内质网及溶酶体的荧光探针检测DTT处理细胞后二者的荧光共定位;线粒体钙离子荧光探针罗丹明2乙酰氧基甲酯(Rhod-2 AM)检测DTT对线粒体中钙离子水平的影响.结果 DTT可显著抑制肝细胞的增殖并促进细胞凋亡.DTT处理肝细胞后ERS及内质网自噬相关蛋白、内质网-线粒体接触位点相关蛋白及线粒体凋亡途经相关蛋白的表达均显著上调.DTT处理细胞后内质网和溶酶体的荧光共定位显著减弱,同时,线粒体内钙离子荧光强度明显增强.结论 DTT通过抑制FAM134B介导的内质网自噬,进而增加线粒体内Ca2+的水平,促进肝细胞凋亡.