目的 探讨阔叶十大功劳(KYSDGL)通过介导免疫细胞干预肝癌的作用机制.方法 通过网络药理学、分子对接和生物信息学等方法探索KYSDGL的活性成分以及靶点,并对肝癌数据集GSE45267、GSE89377进行挖掘,分析出KYSDGL通过介导免疫干预肝癌的作用机制,并加以实验验证.结果 获得7个KYSDGL介导免疫细胞干预肝癌的靶点;分子对接显示其中有6个靶点(PTGS2、FABP5、ADRB2、AGTR1、ESR1、RORA)能与KYSDGL中的成分结合;且与对照组相比,肝癌组基因表达均具有显著差异性,和性别、癌症分期、淋巴结转移状况的临床指标具有很强的相关性;6个关键靶点的10年生存预后分析显示仅有FABP5及ESR1有预后价值;进一步免疫浸润分析结果显示,FABP5的表达水平与免疫细胞浸润有显著相关性;最后通过THPA数据库病理切片验证FABP5蛋白在人癌症组织中高表达,在对照组中低表达,我们通过Western blot实验也验证了与HepG2肝癌细胞组相比,KYSDGL含药血清组的FABP5蛋白表达下调(P＜0.05).结论 KYSDGL可通过抑制FABP5的高表达而调控肿瘤免疫,从而达到干预肝癌的目的.

目的 研究细叶十大功劳Mahonia fortunei茎水提取物脂溶性部位的化学成分.方法 采用硅胶、高效液相色谱等柱色谱方法进行分离纯化,通过化合物的谱学数据鉴定其结构.结果 从细叶十大功劳茎水提取物的醋酸乙酯可溶部位分离出38个化合物,分别鉴定为麦芽酚(1)、3-羟基-4-甲氧基苯乙醇(2)、紫丁香基乙酮(3)、1-羟基-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-丙酮(4)、α-羟基丁香丙酮(5)、紫堇定(6)、浙贝素(7)、香草酸(8)、丁香酸(9)、降氧化北美黄连次碱(10)、(+)-丁香脂素(11)、表丁香脂素(12)、五味子醇甲(13)、新海胆灵A (14)、8-氧化药根碱(15)、8-氧化小檗碱(16)、5-羟基麦芽酚(17)、5-羟基吡啶-2-甲酸甲酯(18)、吐叶醇(19)、2,3-二羟基-1-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-1-丙酮(20)、马齿苋酰胺E (21)、石菖蒲碱A(22)、5-表石菖蒲碱A(23)、5-(甲氧基甲基)-1H-吡咯-2-甲醛(24)、(+)-南烛木树脂酚(25)、(-)-开环异落叶松脂素(26)、刺五加酮(27)、原儿茶酸(28)、腺苷(29)、3,4,5-三甲氧基苯基-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(30)、2-(4-羟基-3-甲氧基苯基)乙基-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(31)、扭旋马先蒿苷B(32)、虎皮楠苷(33)、(+)-丁香脂素-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(34)、表丁香脂素-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(35)、小檗碱(36)、3,4,5-三甲氧基苯基-(6'-O-紫丁香酰基)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(37)、红景天苷(38).结论 化合物3～7、13～15、17～19、21～27、29、31、33和38为首次从该属植物中分离得到,并且首次报道了化合物15的核磁波谱数据.

目的:研究十大功劳叶提取物的抗抑郁作用及其潜在机制.方法:经HPLC-MS/MS手段鉴定分离十大功劳叶提取物主要化学成分.通过小鼠行为绝望实验初步探究十大功劳叶提取物的潜在抗抑郁作用,将小鼠随机分为空白组、氟西汀组(10 mg·kg-1)、十大功劳叶提取物组(10、2.5 g·kg-1),连续灌胃给药12d1,于末次给药lh后,测定小鼠游泳不动时间和悬尾不动时间.进而采用利血平(0.5 mg·kg-1)腹腔注射诱导大鼠抑郁模型探究其抗抑郁作用机制,分组如下,分别为正常组、模型组、氟西汀组(1.8 mg·kg-1)、十大功劳叶提取物组(10、2.5 g·kg-1),每天灌胃给药1次,连续10 d,末次给药l h后,做行为学检查;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的水平;免疫组化法测定大鼠脑组织中IL-6和IL-1β蛋白的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠海马组织中核转录因子-κB(NF-κB)和NOD样受体蛋白3(NLRP3)蛋白的表达.结果:从十大功劳叶提取物中分离鉴定得到7种化学成分,主要为生物碱.小鼠行为绝望实验结果显示,与空白组比较,十大功劳叶提取物高剂量组小鼠游泳不动时间和悬尾不动时间明显缩短(P＜0.05,P＜0.01).大鼠抑郁实验结果显示,与正常组比较,模型组中大鼠上睑下垂现象明显增加(P＜0.05),圈内保留时间显著延长(P＜0.01);大鼠血清中IL-6、TNF-α水平明显升高(P＜0.05);大鼠脑组织中IL-6、IL-1β免疫组织化学染色阳性表达率显著升高(P＜0.01);大鼠海马组织中NF-κB、NLRP3蛋白表达显著升高(P＜0.01).与模型组比较,十大功劳叶提取物高剂量明显缩短大鼠在圈内保留时间(P＜0.05),降低大鼠血清中IL-6、TNF-α水平(P＜0.05,P＜0.01),降低大鼠脑组织中IL-6、IL-1β免疫组织化学染色阳性表达率(P＜0.01);降低大鼠海马组织中NF-KB、NLRP3蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:十大功劳叶提取物具有明显的抗抑郁作用,且能改善利血平诱导的抑郁大鼠炎症反应,其机制可能与抑制NF-KB/NLRP3信号通路有关.

为确定细叶十大功劳(Mahonia fortunei)叶中总生物碱大孔树脂分离纯化的最佳工艺条件及抗氧化活性,该研究通过比较6种大孔吸附树脂对总生物碱的静态吸附和解吸附效果,优选出最佳树脂并考察其动态纯化总生物碱的工艺条件,并采用DPPH法对纯化前后的总生物碱抗氧化性能进行评价.结果表明:(1)AB-8型大孔吸附树脂纯化效果最好,其最佳工艺条件为上样浓度50 mg·mL-1(生药浓度)、上样量26 BV、上样液流速2 BV·h-1;吸附完成后,以3 BV水洗后再以4 BV 50％乙醇洗脱,在此条件下得到的总生物碱含量由13.33％提高到56.64％.(2)各样品对DPPH自由基的清除能力为对照品Vc(IC50=10.39μg·mL-1)>总生物碱纯化品(IC50=39.08μg·mL-1)>总生物碱粗品(IC50=55.28μg·mL-1).综上表明,AB-8型大孔吸附树脂可有效富集细叶十大功劳叶中总生物碱有效部位,细叶十大功劳叶中总生物碱具有一定的抗氧化活性.

目的:探讨阔叶十大功劳[Mahonia bealei(Fort.)Carr.]对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的急性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠道菌群及氧化应激的影响.方法:48只SPF级C57BL/6J小鼠,随机分为:空白组,模型组,阔叶十大功劳低、中、高剂量(2.3、4.6和9.2 g/kg生药)组,美沙拉嗪(0.2 g/kg)组.采用自由饮用2.5％DSS诱导UC小鼠模型,造模当天灌胃给药,连续10 d.苏木精-伊红(hematoxy-lin-eosin,HE)染色观察结肠组织并进行组织病理学评分;16S rRNA基因测序技术分析肠道菌群的变化;生化法检测小鼠肠黏膜中总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)、还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;Western blot法检测结肠组织Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、NAD(P)H醌氧化还原酶1[NAD(P)H-quinone oxidoreductase 1,NQO1]、胞浆和胞核中核因子E2相关因子(nuclear fac-tor E2-related factor 2,Nrf2)蛋白表达.结果:与空白组相比,模型组小鼠结肠黏膜损伤显著(P＜0.05),肠道菌群多样性和丰度降低,结肠抗氧化酶T-SOD、GSH及CAT活性显著降低,MDA含量显著增多(P＜0.01),Keap1蛋白水平显著升高,NQO1和HO-1蛋白水平显著下降(P＜0.01),胞浆Nrf2蛋白水平显著增高,胞核Nrf2蛋白水平也显著增加(P＜0.01).与模型组相比,阔叶十大功劳可修复小鼠结肠黏膜损伤,减少炎症细胞浸润(P＜0.05或P＜0.01),改善肠道菌群多样性及丰度,在门水平上,Firmicutes(厚壁菌门)显著上升,Bacteroidota(拟杆菌门)显著下降(P＜0.05),属水平上4个菌属Muribaculaceae、Odoribacter、Rikenellaceae RC9 gut group(理研菌科RC9肠道群)、Lachnospirace-ae UCG-001(毛螺菌科属UCG-001)可能与阔叶十大功劳对UC小鼠肠道黏膜的保护作用相关,抗氧化酶T-SOD、GSH及CAT活性显著提高(P＜0.05或P＜0.01),MDA含量显著减少(P＜0.05或P＜0.01),高剂量组胞浆Nrf2蛋白水平显著降低(P＜0.01),低高剂量组细胞核Nrf2蛋白水平显著增高(P＜0.05或P＜0.01),低高剂量组可下调Keap1蛋白水平,上调NQO1和HO-1蛋白水平(P＜0.05或P＜0.01).结论:阔叶十大功劳通过改善UC小鼠肠道菌群的多样性和结构,并通过Nrf2信号通路增强抗氧化酶活性,抑制氧化应激反应,从而修复结肠黏膜损伤,为阔叶十大功劳治疗UC提供实验依据.