目的 基于NF-κB信号通路探讨阔叶十大功劳对溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠炎症反应的影响.方法 小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组和阔叶十大功劳低、中、高剂量组.除正常组外,其余各组均自由饮用2.5％葡聚糖硫酸钠(DSS)建立UC小鼠模型,每天记录小鼠体质量变化与DAI评分.给药结束后,记录结肠长度,HE染色观察结肠组织病理形态,ELISA法检测结肠组织TNF-α、IL-10、IL-1β和IL-6水平,Western blot法检测结肠组织ZO-1、Occludin、Claudin-1和NF-κB蛋白表达.结果 与模型组比较,阔叶十大功劳组小鼠体质量、结肠长度增加(P＜0.05,P＜0.01),DAI和结肠组织病理评分降低(P＜0.05,P＜0.01),结肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平和胞核NF-κB 蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01),IL-10 水平和 ZO-1、Occludin、Claudin-1、胞浆 NF-κB 蛋白表达升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 阔叶十大功劳可改善由DSS诱发的UC小鼠结肠组织炎症反应,其机制可能与调控NF-κB信号通路有关.

目的 探讨阔叶十大功劳(KYSDGL)通过介导免疫细胞干预肝癌的作用机制.方法 通过网络药理学、分子对接和生物信息学等方法探索KYSDGL的活性成分以及靶点,并对肝癌数据集GSE45267、GSE89377进行挖掘,分析出KYSDGL通过介导免疫干预肝癌的作用机制,并加以实验验证.结果 获得7个KYSDGL介导免疫细胞干预肝癌的靶点;分子对接显示其中有6个靶点(PTGS2、FABP5、ADRB2、AGTR1、ESR1、RORA)能与KYSDGL中的成分结合;且与对照组相比,肝癌组基因表达均具有显著差异性,和性别、癌症分期、淋巴结转移状况的临床指标具有很强的相关性;6个关键靶点的10年生存预后分析显示仅有FABP5及ESR1有预后价值;进一步免疫浸润分析结果显示,FABP5的表达水平与免疫细胞浸润有显著相关性;最后通过THPA数据库病理切片验证FABP5蛋白在人癌症组织中高表达,在对照组中低表达,我们通过Western blot实验也验证了与HepG2肝癌细胞组相比,KYSDGL含药血清组的FABP5蛋白表达下调(P＜0.05).结论 KYSDGL可通过抑制FABP5的高表达而调控肿瘤免疫,从而达到干预肝癌的目的.

目的 优选阔叶十大功劳叶的小檗碱提取工艺.方法 对阔叶十大功劳叶中小檗碱采用超声醇提,利用星点-响应面设计,以盐酸小檗碱含量为评价指标,选取料液比、乙醇浓度、超声时间3个因素进行中心组合设计,通过星点-响应面设计来筛选阔叶十大功劳叶中小檗碱的最优提取工艺.结果 阔叶十大功劳叶中小檗碱最优工艺为:液料比13∶1;乙醇浓度54％;超声时间35 min,提取2次,经3次验证试验,最佳工艺提取的功劳叶中小檗碱为0.683％(RSD=0.85％,n=3),与预测值0.691％比较,偏差为1.16％.结论 星点设计-响应面法优化功劳叶中小檗碱的提取工艺,方法简单合理,且具有良好的预测性.

目的:基于ITS2序列对十大功劳属植物进行分子鉴定,并确定其亲缘关系.方法:收集十大功劳属植物29份及外类群植物4份,对ITS2区段进行PCR扩增和测序,使用Mega 6.0软件进行序列变异分析,利用ITS2 data-base 在线工具预测ITS2序列二级结构,并采用NJ邻接法构建系统进化树.结果:十大功劳属植物ITS2序列长度均为223 bp,平均GC含量52.5％～55.2％.保守位点共203个,变异位点共20个,种间遗传距离大于种内遗传距离.依据ITS2序列二级结构,可直观地将小果十大功劳、阔叶十大功劳和十大功劳与该属其他植物明显区分.基于ITS2序列的NJ进化树基本可以阐述十大功劳属植物的种间关系.小果十大功劳和十大功劳聚为一支,它们的亲缘关系较为接近.宜章十大功劳以87％的支持率与外类群小檗属植物聚为一支,阔叶十大功劳与绿药淫羊藿聚为一支,说明十大功劳属与小檗属和淫羊藿属的关系也很近.结论:ITS2序列在十大功劳属植物的物种真实性鉴定方面具有良好的应用价值.

目的:探讨阔叶十大功劳[Mahonia bealei(Fort.)Carr.]对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的急性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠道菌群及氧化应激的影响.方法:48只SPF级C57BL/6J小鼠,随机分为:空白组,模型组,阔叶十大功劳低、中、高剂量(2.3、4.6和9.2 g/kg生药)组,美沙拉嗪(0.2 g/kg)组.采用自由饮用2.5％DSS诱导UC小鼠模型,造模当天灌胃给药,连续10 d.苏木精-伊红(hematoxy-lin-eosin,HE)染色观察结肠组织并进行组织病理学评分;16S rRNA基因测序技术分析肠道菌群的变化;生化法检测小鼠肠黏膜中总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)、还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;Western blot法检测结肠组织Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、NAD(P)H醌氧化还原酶1[NAD(P)H-quinone oxidoreductase 1,NQO1]、胞浆和胞核中核因子E2相关因子(nuclear fac-tor E2-related factor 2,Nrf2)蛋白表达.结果:与空白组相比,模型组小鼠结肠黏膜损伤显著(P＜0.05),肠道菌群多样性和丰度降低,结肠抗氧化酶T-SOD、GSH及CAT活性显著降低,MDA含量显著增多(P＜0.01),Keap1蛋白水平显著升高,NQO1和HO-1蛋白水平显著下降(P＜0.01),胞浆Nrf2蛋白水平显著增高,胞核Nrf2蛋白水平也显著增加(P＜0.01).与模型组相比,阔叶十大功劳可修复小鼠结肠黏膜损伤,减少炎症细胞浸润(P＜0.05或P＜0.01),改善肠道菌群多样性及丰度,在门水平上,Firmicutes(厚壁菌门)显著上升,Bacteroidota(拟杆菌门)显著下降(P＜0.05),属水平上4个菌属Muribaculaceae、Odoribacter、Rikenellaceae RC9 gut group(理研菌科RC9肠道群)、Lachnospirace-ae UCG-001(毛螺菌科属UCG-001)可能与阔叶十大功劳对UC小鼠肠道黏膜的保护作用相关,抗氧化酶T-SOD、GSH及CAT活性显著提高(P＜0.05或P＜0.01),MDA含量显著减少(P＜0.05或P＜0.01),高剂量组胞浆Nrf2蛋白水平显著降低(P＜0.01),低高剂量组细胞核Nrf2蛋白水平显著增高(P＜0.05或P＜0.01),低高剂量组可下调Keap1蛋白水平,上调NQO1和HO-1蛋白水平(P＜0.05或P＜0.01).结论:阔叶十大功劳通过改善UC小鼠肠道菌群的多样性和结构,并通过Nrf2信号通路增强抗氧化酶活性,抑制氧化应激反应,从而修复结肠黏膜损伤,为阔叶十大功劳治疗UC提供实验依据.