目的 建立基于焦磷酸测序技术的维生素 K环氧化物还原酶复合物亚单位1(V KORC1)和细胞色素P4502C9(CYP2C9)基因分型的方法,用于检测华法林药物代谢酶相关基因多态性.方法 收集50份健康人外周血样本,提取全血基因组 DNA.针对 VKORC1 -1639G > A、CYP2C9430C > T 和 CYP2C91075A>C 3个单核苷酸多态性(SNP)位点,分别设计一套带生物素标记的扩增引物和测序引物.样本经PCR扩增后进行焦磷酸测序,结合信号峰型分析每个样本基因型,以Sanger测序法为对照,比较两种方法检测基因型结果的一致性.结果 根据待测位点出峰的碱基和峰高,可以清晰判断3个SN P位点的基因型,50份样本中,VKORC1 -1639G>A基因型AA和AG分别有41例和9例,各占82% 和12%;CYP2C9基因型 *1/*1和*1/*3分别有45例和5例,各占90% 和10%,未检出等位基因CYP2C9*2.焦磷酸测序技术与Sanger测序法所检测的基因型结果一致.结论 焦磷酸测序技术在SNP基因分型中具有操作简便、耗时短、成本低和结果准确可靠等优点,该检测方法可快速对CYP2C9和VKORC1的SNP位点进行分型.

华法林是最常应用的口服抗凝药物之一.许多研究已证实华法林维持剂量的个体差异与基因型密切相关,尤其是细胞色素P450 2C9 (CYP2C9)和维生素K环氧化物还原酶复合物1(VKORC1)的基因型对华法林的影响受到广泛认同;尽管还有其他很多基因型被报道与华法林剂量有关,但其具体影响结论不一.研究发现纳入基因信息和临床数据的剂量计算公式可预测华法林的维持剂量,由于目前已开展的临床试验结果不一,其实用性亦受到质疑.下一步研究需要更大样本量及多中心的研究,以期进一步阐释遗传与非遗传因素对华法林剂量的影响,同时对已构建的模型进行验证或构建新模型,提高对华法林个体差异的解释百分比.

1例脑梗死合并感染、房颤等疾病的老年患者入院后给予抗血小板、护胃及改善循环等一系列治疗,在应用华法林进行抗凝治疗后,凝血功能异常,并出现大便带血.临床药师对患者进行药学监护,建议暂停使用华法林,立即给予维生素K纠正凝血功能.同时考虑到遗传因素对华法林剂量的影响,建议进行华法林用药相关基因检测(维生素K环氧化物还原酶复合物1基因VKORC1和细胞色素P450家族中CYP2C9).该患者实际服药剂量小于基因检测报告的推荐剂量,但仍出现出血情况,可能与患者并用多种药物等因素有关.临床药师全面分析后,对医护人员进行安全用药知识宣讲,对患者及家属进行用药教育,提高患者依从性,避免服药差错,降低抗凝治疗的不良反应发生率.

目的 探讨不同家栖鼠VKORC1基因片段大小是否存在差异,分析不同家栖鼠VKORC1基因启动子及第二外显子序列是否存在差异及与抗药性的关联.方法 对捕自南通市3个区的家栖鼠提取尾组织DNA,采用sanger测序法对VKORC1基冈启动子及第二外显子进行序列分析,通过SPSS 16.0软件进行x2检验.结果 黄胸鼠与褐家鼠的VKORC1基因片段大小存在差异.黄胸鼠VKORC1基因启动子序列共存在6处缺失突变和16个单核苷酸多态性(SNPs).黄胸鼠第二外显子第90位氨基酸存在一个错义突变,3只抗药鼠均发生该错义突变,6只敏感鼠有3只发生了该错义突变.结论 本研究发现VKORC1基因第二外显子第90位氨基酸的错义突变可能与鼠抗药性密切相关,有望为探讨家栖鼠发生抗药的分子机制奠定一定的基础.

基于VKORC1-1639 G/A及CYP2C9 * 3的基因多态性初步探讨华法林的使用,收集2016年10月2018年2月至该院进行华法林用药指导相关基因检测的100例患者,记录患者基本信息(身高、体重等).采用数字荧光分子杂交(DFMH1)检测VKORC1-1639 G/A,CYP2C9*3的基因型分布,并结合患者年龄、身高、体重等,根据国际华法林药物基因组学联合会(IWPC)公式计算患者华法林初始剂量.VKORC1-1639 G/A AA、AG、GG基因型实际频率分别为84％,15％,1％;等位基因频率A(91.5％),G(8.5％).CYP2C9*3 AA型、AC型、CC型实际频数分别为91％,9％,0％;等位基因频率A(95.5％),C(4.5％).不同VKORC1-1639 G/A、CYP2C9基因型华法林用量不同,VKORC1-1639 G/A AA型并CYP2C9* 1/*1型和VKORC1-1639 G/A AG型并CYP2C9*1/*1型患者华法林剂量均高于VKORC1-1639 G/A AA型并CYP2C9*1/*3型患者;VKORC1-1639 G/A AG型并CYP2C9* 1/*1型患者华法林用量高于VKORC1-1639 G/A AA型并CYP2C9* 1/*1型患者,3组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).华法林代谢相关基因的基因多态性为VKORC1-1639 G/A AA及CYP2C9* 1/*1型占多数,表明VKORC1-1639 G/A基因突变率高,CYP2C9*3基因突变率低,且其多态性影响个体间华法林的使用剂量,但不同性别个体间华法林初始剂量大致为3 mg/d.

目的 调查维生素K环氧化物还原酶复合物亚基1 (VKORC1) 、细胞色素P450 (CYP) 2C9和CYP2C19的等位基因分布, 不同等位基因变异的贡献和可能的基因-基因相互作用对华法林治疗的影响.方法 共纳入492名患者, 并对VKORC1、CYP2C9和CYP2C19的单核苷酸多态性进行基因分型.结果 CYP2C9*1等位基因与CYP2C19*2和CYP2C19*17 (D'=1) 完全连锁不平衡.表达为VKORC1 GA、VKORC1 AA、CYP2C9*2和CYP2C9*3的等位基因变异患者需要比表达为VKORC1 GG或CYP2C9*1的野生型患者更低的华法林剂量.华法林稳定剂量和INR> 5事件的CYP2C19等位基因各种变异之间差异无统计学意义.表达为CYP2C19*2/*2、CYP2C19*2/*17和CYP2C19*17/*17基因型患者倾向于比CYP2C19*1/*1基因型患者需要更高的华法林剂量.逐步回归分析显示, 年龄和性别是华法林剂量的显著影响因素.在单变量一般线性模型分析中检测到CYP2C9和VKORC1对华法林剂量和INR> 5事件没有统计学意义上的相互作用.结论 VKORC1和CYP2C9的基因多态变体独立影响华法林剂量, 而CYP2C19不影响华法林治疗.

华法林是一种广泛使用的口服抗凝血药物,是一种双香豆素衍生物,其主要用于血栓栓塞性疾病的预防和治疗,不同患者对华法林的反应有很大差别,要想达到同样的抗凝效果,大剂量患者与小剂量患者可差10倍以上[1];华法林的治疗安全范围较窄,当国际标准化比值(INR)<2,血栓栓塞的风险明显上升,但当INR>3,出血的风险又大大增加[2-4];且华法林药物起效缓慢,失效同样缓慢,因此必须频繁监测INR,以调整药物剂量,所以患者依从性较差(尤其是在偏远、贫困地区),存在极大的栓塞和出血风险.华法林抗凝血效果(增强或减弱)受许多因素的影响,包括遗传、疾病、药物以及食物等,其中遗传因素是最主要的因素,细胞色素P450酶2C9基因(cytochrome P-4502C9,CYP2C)和维生素K环氧化物还原酶复合物亚单位1 基因(VKORC1)是影响华法林剂量及抗凝效果最重要的基因 [2].国际华法林药物遗传学协会(The International Warfarin Pharmacogenetics Consortium,IWPC)联合9个国家的21个研究小组,提供了5000多例接受华法林治疗的患者(这其中有1200多例亚洲人)的临床和基因数据,并在此基础上建立了华法林剂量预测模型,该模型是目前为止规模最大的模型,并得到广泛地认可[3].

目的 测定广东省江门市新会区黄毛鼠对第一代抗凝血杀鼠剂的抗性发生状况,阐明维生素K环氧化物还原酶复合物亚单位1(VKORC1)基因变异与抗药性之间的关系.方法 采用致死期食毒法(LFP)检测黄毛鼠的抗性;提取鼠基因组DNA,克隆VKORC1基因,筛选突变和多态性位点,并分析VKORC1基因突变与抗性的相关性.结果 广东省江门市新会区黄毛鼠对第一代抗凝血杀鼠剂的抗性发生率为27.03％,已形成抗性种群;VKORC1基因全长为2 166 bp,共检测到12个变异位点,其中1个为插入缺失位点,外显子1和外显子3各存在1个变异位点,内含子1和内含子2分别存在6和4个变异位点,外显子1的突变导致VKORC1第58位氨基酸变异(Arg58Gly),外显子3的突变为同义突变(Cys96Cys),相关性分析显示,黄毛鼠的抗药性与VKORC1基因中单核苷酸多态性位点的相关性无统计学意义(P＞0.05).结论 VKORC1基因第58位氨基酸突变并不是导致黄毛鼠抗药性的主要原因,黄毛鼠抗性的遗传机制可能与其他因素有关.

目的 探讨细胞色素P450(CYP)2C9与维生素K环氧化物还原酶复合物1(VKORC1)基因多态性对高龄非瓣膜性心房颤动病人华法林维持剂量的影响.方法 选取40例≥80岁非瓣膜性心房颤动病人为研究对象,记录病人的性别、年龄及华法林稳定给药剂量.采用数字荧光分子杂交测序技术检测病人的CYP2C9及VKORC1基因型,根据国际华法林药物基因组联合会(IWPC)公式计算出病人的华法林服用理论剂量.结果 男性病人与女性病人的华法林日均剂量差异无统计学意义[(2.16±0.75)mg比(2.00±0.47)mg,P>0.05].CYP2C9-1075 A/C基因型中,AA型33例,CA型7例;AA型病人的华法林理论剂量明显高于CA型病人(P<0.01);但两者的实际用量差异无统计学意义(P=0.601).VKORC1-1639 A/G基因型中,AA型33例,GA型7例;GA型病人的华法林理论剂量和实际用量均明显高于AA型病人(P<0.05).CYP2C9-1075 AA+VKORC1-1639 GA基因型病人的华法林实际用量明显高于CYP2C9-1075 CA+VKORC1-1639 AA基因型病人(P<0.05),但其他组合基因型的华法林实际用量差异均无统计学意义(P>0.05).结论 VKORC1基因多态性是影响高龄老人华法林维持剂量的重要遗传因素,可根据病人基因型的不同合理分配华法林剂量.

目的 基于VKORC1-1639 G/A及CYP2C9*3的基因多态性初步探讨华法林的使用剂量.方法 收集2016年10月-2018年2月进行华法林用药指导相关基因检测的100例患者,记录患者基本信息(身高、体质量等).采用数字荧光分子杂交检测VKORC1-1639 G/A,CYP2C9*3的基因型分布,并结合患者年龄、身高、体质量等,根据国际华法林药物基因组学联合会(IWPC)公式计算患者华法林理论剂量.结果 VKORC1-1639 G/A AA、AG、GG基因型实际频率分别为84％,15％,1％;等位基因A,G频率分别为91.5％,8.5％.CYP2C9*3 AA型、AC型、CC型实际频数分别为91％,9％,0％;等位基因A,C频率分别为95.5％,4.5％.不同VKORC1-1639 G/A、CYP2C9*3基因型华法林理论用量不同,VKORC1-1639 G/A AA型并CYP2C9*3 AA型和VKORC1-1639 G/A AG型并CYP2C9*3 AA型患者华法林剂量均高于VKORC1-1639 G/A AA型并CYP2C9*3 AC型患者;VKORC1-1639 G/A AG型并CYP2C9*3 AA型患者华法林用量高于VKORC1-1639 G/A AA型并CYP2C9*3 AA型患者,3组间两两比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 华法林代谢相关基因的基因多态性为VKORC1-1639 G/A AA及CYP2C9*3 AA型占多数,表明VKORC1-1639 G/A基因突变率高,CYP2C9*3基因突变率较低,且两者多态性影响个体间华法林的理论剂量.