目的:了解我国是否存在耐药及耐消毒剂鼠疫菌株，为鼠疫临床治疗提供准确信息。方法:收集我国1943 - 2016年分离自10处鼠疫自然疫源地的2 753株鼠疫菌，根据美国国立生物信息中心（NCBI）公布的耐氨基糖苷类链霉素基因strA、strB，耐β-内酰胺类抗菌药物基因TEM、SHV、CTX-M，耐磺胺类药物基因sul1、sul2、sul3，耐消毒剂基因qacE△1-sul1的序列信息，分别针对每个基因设计1对引物。提取2 753株鼠疫菌基因组DNA，采用PCR法对所有DNA样本进行上述9个目的基因扩增。结果:PCR检测阴性对照和阳性对照成立，2 753株鼠疫菌DNA样本均未见耐氨基糖苷类链霉素基因strA、strB，耐β-内酰胺类抗菌药物基因TEM、SHV、CTX-M，耐磺胺类药物基因sul1、sul2、sul3及耐消毒剂基因qacE△1-sul1对应的目的条带。结论:我国鼠疫菌尚未检测到上述耐药及耐消毒剂基因，但鼠疫菌耐药性的监测工作仍需持续开展。

目的 研究临床分离喹诺酮耐药大肠埃希菌表型特征及分子机制.方法 通过药敏试验从临床分离大肠埃希菌中筛选喹诺酮耐药株,经多位点序列分型(MLST),采用 PCR 检测和测序分析喹诺酮耐药决定区(QRDR)、质粒介导的喹诺酮耐药基因(PMQR).结果 所收集 53 株大肠埃希菌对左氧氟沙星呈中介耐药或耐药,在 21个MLST分型中以ST53、ST43为主.QRDR测序显示,与敏感菌株相比,以基因 GyrA的 S83L和 D87N、基因 ParC的S80I突变为主,分别占 94.33%、79.25%、79.25%,ST53和 ST43均存在此 3个点突变.32.08%菌株检出PMQR基因,包括aac(6)-Ib-cr、qnrB和qnrS,62.26%菌株检出消毒剂耐药基因 qacE△1.结论 喹诺酮耐药大肠埃希菌的耐药机制主要与 QRDR区域点突变有关,同时也应对质粒介导的耐药基因水平传递加强监测.

目的 了解耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(CRPA)临床分离菌株的流行特征,检测、分析耐消毒剂基因携带情况及菌株同源性.方法 回顾性分析该院2020-2022年临床分离得到的252株CRPA的临床分布特点、耐药趋势.并随机选取其中30株菌株,采用聚合酶链反应检测耐消毒剂基因qacEΔ1-sul1及ace Ⅰ的表达情况;采用肠杆菌科基因间重复序列-聚合酶链反应检测菌株同源性.结果 CRPA的标本来源主要为痰液(63.49％)、肺泡灌洗液(17.06％);来自综合重症监护病房(ICU)和其他ICU占比为40.87％,来自非ICU的占比为59.13％,非ICU病区主要分布在康复医学科(14.68％)和呼吸科(12.70％).除头孢吡肟、头孢他啶/阿维巴坦、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、多黏菌素外,CRPA对其他临床常用抗菌药物的耐药率均在30.00％以上.CRPA在ICU及非ICU病区的耐药率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).30株临床分离的CRPA qacEΔ1-sul1和ace Ⅰ基因检出率分别为16.67％、26.67％.同源性分析结果显示A型和B型为主要流行株.结论 CRPA对常用抗菌药物普遍耐药,应加强对CRPA菌株的耐药性监测,根据药敏试验结果合理选择抗菌药物,减少耐药株的产生.CRPA中qacEΔ1-sul1和aceⅠ两种耐消毒剂基因均有检出,但检出率均较低,实际工作中应加强对各病区的消毒效果监测.CRPA中存在A、B两种优势型别的克隆流行,应作为铜绿假单胞菌院内感染防控的重点.

目的 研究不同来源的金黄色葡萄球菌对消毒剂抗性及筛选相关基因.方法 采用基因检测技术和定量杀菌试验方法,检测不同来源金黄色葡萄球菌对常见消毒剂抗性及相关基因.结果 在常温下75%乙醇、2000 mg/L季铵盐、5000 mg/L聚六亚甲基双胍分别作用1 min,对悬液内不同来源金黄色葡萄球菌的平均杀灭对数值均>5.00.有效氯1000 mg/L的含氯消毒剂对悬液内4株临床分离株(编号Y7、Y19、Y24、Y13)作用3 min,平均杀灭对数值均>5.00.3000 mg/L三氯羟基二苯醚对4株临床分离株(编号Y7、Y19、Y24、Y13)作用3 min,平均杀灭对数值均<5.00.3株医院感染临床分离株(编号Y7、Y19、Y24)检出耐药基因ermA、TetM、mecA、acc-aph和耐消毒剂基因qacA.结论 食源性和医院感染金黄色葡萄球菌对低效消毒剂抗性存在差异,部分医院感染临床分离株检出耐药基因和耐消毒剂基因.

目的 探讨武汉地区临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)中耐消毒剂基因的携带状况及耐消毒剂基因携带菌株的同源性,为有效预防和控制CRKP传播提供理论依据.方法 收集2018-2019年武汉市3所三级医院临床住院患者分离的非重复性CRKP菌株,采用最低抑菌浓度测定方法对药敏结果进行复核,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测耐消毒剂基因qacEΔ1、cepA,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对同时携带qacEΔ1和cepA基因的CRKP菌株进行同源性分析.结果 共收集62株CRKP,77.42％来源于重症监护病房(ICU),40.32％来自痰标本.所有CRKP均为多重耐药菌,对厄他培南、阿莫西林/克拉维酸、头孢唑林、头孢他啶、头孢曲松5种抗生素的耐药率均为100％,对临床其他常见抗菌药物也呈现高度耐药.耐消毒剂基因检出率为95.16％(59/62),其中 qacEΔ1、cepA 基因检出率分别为 64.52％(40/62)、91.94％(57/62),38 株(61.29％)同时检出qacEΔ1和cepA.PFGE结果显示,38株CRKP可分为A～K共11个型别,以E型为主,占42.11％(16株).结论 武汉地区CRKP菌株耐药形势严峻,广泛携带耐消毒剂基因,存在不同医院、不同科室间的克隆传播,应加强流行病学监控,合理使用消毒剂.

目的 调查西安交通大学第一附属医院感染科医护人员鼻腔内金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的定植率,并对分离菌株进行分子表征.方法 2022年1-6月纳入86名医护人员进行横断面研究,采集医护人员鼻拭子后进行金黄色葡萄球菌的培养、鉴定,以微量肉汤稀释法和纸片扩散法测定菌株对抗菌药物、氯己定及莫匹罗星的敏 感性.以PCR技术检测耐消毒剂基因(qacAB、smr、lmrS、mepA和sepA)、毒力基因(pvl、fnbA/fnbB、sea、seb、sec、sed、tst、eta、etb).对菌株进行SCCmec分型和多位点序列分型.对于莫匹罗星耐药的菌株,通过PCR扩增和测序鉴别菌株有无ileS基因突变或携带耐药基因(mupA和mupB).结果 共检出金黄色葡萄球菌37株,定植率为43.02％(37/86),其中13株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA).菌株对利福平(2.70％,1/37)、氯霉素(8.11％,3/37)、四环素(8.11％,3/37)、庆大霉素(10.81％,4/37)、环丙沙星(10.81％,4/37)具有较低的耐药率.共17株被鉴定为多重耐药菌.MRSA菌株中共鉴定出4个SCCmec型别,其中Ⅱ型最常见(53.85％,7/13),其次为Ⅳ型(30.77％,4/13).MRSA菌株中最普遍的是ST59型(46.15％,6/13),甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(methicillin-susceptible Staphylo-coccus aureus,MSSA)菌株中ST5型(41.67％,10/24)最常见.sea基因是阳性率最高(56.76％,21/37)的毒力基因.所检出的37株金黄色葡萄球菌均携带sepA和mepA基因.1株金黄色葡萄球菌对氯己定不敏感,2株存在错义突变V588F(G1762T)并表现出莫匹罗星低水平耐药,1株携带mupA基因的菌株对莫匹罗星高度耐药.结论 所调查医院的感染科医护人员鼻腔金黄色葡萄球菌定植率较高,存在院内感染的风险,应加强监测和去定植治疗以降低感染风险.

目的 了解江苏省苏州地区儿童铜绿假单胞菌感染的临床分布特征、耐药趋势、耐消毒剂基因携带情况,以期为儿童铜绿假单胞菌感染的防护与治疗提供理论依据.方法 回顾性分析2016-2021年苏州大学附属儿童医院分离得到的853株铜绿假单胞菌的临床分布特点、耐药趋势,并随机选取其中101株菌株,采用聚合酶链式反应法检测9种耐消毒基因(qacE△1-sul1、qacE、qacE△1、qacG、sugE(p)、suigE?、emrE、ydgE、ydgF)的表达情况.结果 铜绿假单胞菌主要来源于呼吸道标本(47.83％)、脓液(28.60％)、尿液(11.72％);主要来源科室是重症监护室(21.45％)、普外科(15.71％)、呼吸科(12.31％);患者年龄以1个月～1岁和大于6岁为主(分别是34.31％和25.38％).铜绿假单胞菌的耐药率排名前三依次为亚胺培南(11.25％),氨曲南(9.26％),美罗培南(8.02％).在853株铜绿假单胞菌中,耐药菌株主要来自于重症监护室(58/183)、血液科(33/91)、新生儿科(31/96),多重耐药菌株有57株,检出率为6.68％.对碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌菌株有98株(11.49％),2016-2021年检出率分别为22.06％、8.40％、3.60％、5.67％、9.85％、17.20％.9种耐消毒基因中ydgF携带率高达98.02％,sagE?携带率有94.06％,qacE携带率为0.结论 铜绿假单胞菌对部分药物产生较高的耐药性,应注意合理用药.有2种耐消毒基因携带率超过90％,应加强消毒剂耐药机制研究,合理使用消毒剂.

目的 探讨福氏志贺菌的耐药性及其获得性耐药相关基因和可移动遗传元件的携带状况,并分析两者的相关性.方法 选取并复苏2010至2014年上海市各区县疾病预防与控制中心上送的139株福氏志贺菌,采用K-B法测定菌株对13种抗生素的敏感性,同时用PCR检测17种β-内酰胺类药物耐药基因、季铵盐消毒剂与磺胺耐药重叠基因、甲氧苄啶-磺胺甲68970唑耐药基因、氨基糖苷类修饰酶耐药基因及7种可移动遗传标记,用指标聚类分析法分析获得性耐药基因和可移动元件遗传标记存在状况的相关性.结果 139株福氏志贺菌共检测到ISEcp1、intI1和trbC 3种可移动遗传元件的遗传标记;CTX-M、OXA和TEM 3种β-内酰胺类药物耐药相关基因;ant(3")-I和aac(6′)-Ib2种氨基糖苷类修饰酶基因;1种季铵盐消毒剂与磺胺耐药重叠基因qacEΔ1-sull和1种甲氧苄啶-磺胺甲68970唑相关基因dfrA1.指标聚类分析显示,OXA、ant(3")-I和drfA1这3个基因高度相关,并同时被Ⅰ类整合子intI1介导;TEM、qacEΔl-sull和aac(6′)-Ib这3个基因高度相关,并同时被另一个移动元件即接合性质粒trbC介导.结论 多种可移动遗传元件介导的获得性耐药基因水平转移可能在很大程度上导致了志贺菌耐药株的不断蔓延.

目的 调查西藏自治区鼠疫自然疫源地是否存在耐药及耐消毒剂的鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)菌株,为鼠疫的临床治疗提供准确信息.方法 根据美国国立生物技术信息中心公布的耐氨基糖苷类链霉素StrA和StrB基因,耐β-内酰胺类抗菌药物TEM、SHV和CTX-M基因,耐磺胺类药物Sul1、Sul2和Sul3基因序列,耐消毒剂耐药QacEdeltal-sul1基因,分别在每个基因上设计1对引物,逐一对分离自西藏自治区鼠疫自然疫源地的鼠疫菌DNA进行PCR检测.结果 阴性对照和阳性对照成立,355株鼠疫菌的PCR检测结果均为阴性,未发现耐链霉素、耐磺胺类药物及耐β-内酰胺类抗菌药物和耐消毒剂菌株.结论 西藏自治区鼠疫自然疫源地鼠疫菌尚未出现耐药及耐消毒剂菌株.

目的 调查分离白烧伤患者的40株铜绿假单胞菌获得性耐药基因和菌株间的亲缘性. 方法 选择笔者单位烧伤科2014年1月-2015年12月自烧伤患者分离出的40株铜绿假单胞菌,每年20株.采用K-B纸片扩散法检测分离出的菌株对头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星、左氧氟沙星等9种抗菌药物的敏感性.采用PCR法检测9种β内酰胺类抗菌药物获得性耐药基因、外膜孔蛋白oprD2基因、12种氨基糖苷类抗菌药物获得性耐药基因、6种消毒剂获得性耐药基因与可移动遗传元件遗传标记基因,选取阳性表达基因进行DNA测序及比对.对40株铜绿假单胞菌的28种获得性耐药基因序列进行非加权组平均法聚类分析. 结果 40株铜绿假单胞菌对上述9种抗菌药物均耐药.40株铜绿假单胞菌共检出blaTEM、blaCARB2种β内酰胺类抗菌药物获得性耐药基因,aac (6')-Ⅰb、aac(6')-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ、rmtB 5种氨基糖苷类抗菌药物获得性耐药基因,qacE△1-sul1、merA、intⅠ13种消毒剂获得性耐药基因及可移动遗传元件遗传标记基因,并均存在外膜孔蛋白oprD2基因缺失.40株铜绿假单胞菌聚集特征明显,共有7种基因模式和3个克隆株.2～4、6～9、11、14、17 ～39号菌株携带的耐药基因序列相似,亲缘性高;12、13号菌株携带的耐药基因序列相似,亲缘性高;10、16号菌株携带的耐药基因序列相似,亲缘性高. 结论 blaTEM、bla CARB、aac(6')-Ⅰb、aac(6')-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ、rmtB、qacE△1-sul1、merA、intⅠ1在烧伤患者铜绿假单胞菌菌株中流行且均存在oprD2基因缺失,可能是导致铜绿假单胞菌对β内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药物均耐药的重要原因,耐药表型与基因型相符率高.烧伤患者检出铜绿假单胞菌耐药基因相似,菌株间亲缘性高.