目的:研究内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site，IRES)序列连接"抗原-佐剂"的单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2, HSV-2)DNA疫苗对免疫小鼠的保护作用。方法:利用IRES重组构建HSV-2包膜糖蛋白D(glycoprotein D，gD)和CCL28佐剂双表达DNA疫苗pgD-IRES-CCL28和pCCL28-IRES-gD，经测序验证，肌肉注射免疫BALB/c小鼠2次后，定期收集小鼠的血清和阴道灌洗液样品，分离免疫后的脾细胞、肠系膜淋巴结细胞和直肠黏膜组织。通过终点ELISA法检测免疫后小鼠的抗原特异性抗体滴度，采用体外中和试验检测免疫后及攻毒后血清和阴道灌洗液中的中和抗体滴度，采用脾细胞和肠系膜淋巴结细胞趋化试验和直肠组织的免疫组织化学染色检测组织和器官内的CCL28响应性免疫细胞变化。对免疫后小鼠进行阴道攻毒试验，采用荧光定量PCR、称量体重及观察疾病严重程度的方法评估各组小鼠抵抗病毒感染的能力。通过与1∶1混合的单独表达gD和CCL28的DNA疫苗(pgD+pCCL28)的免疫保护效果比较，分析IRES双表达DNA疫苗诱导的小鼠体液免疫和细胞免疫应答水平，以及免疫保护效果。结果:pCCL28-IRES-gD免疫小鼠后可产生与pgD+pCCL28组相似的血清IgG滴度、阴道灌洗液IgA抗体滴度，以及较高的抗体中和能力、直肠黏膜IgA+浆细胞和黏膜组织内CCL28响应性免疫细胞，攻毒后血清中和抗体出现较晚，但小鼠未出现体重减轻、疾病症状和死亡。但pgD+pcDNA3.1和pgD-IRES-CCL28对小鼠的免疫保护无效。结论:pCCL28-IRES-gD双表达DNA疫苗可诱导小鼠产生较强的黏膜免疫应答，有较强的免疫保护作用。

患者女，38岁，因周身红斑、丘疹、斑丘疹、脱屑伴瘙痒9 d于2021年3月26日就诊。患者9 d前注射2019新型冠状病毒灭活疫苗（生产企业：北京生物制品研究所有限责任公司；批号202012332）第2剂（第1剂接种时间2021年3月1日，两剂间隔15 d）10 h后于左上臂注射部位出现红斑、丘疹、斑丘疹，伴瘙痒。曾予盐酸西替利嗪片、盐酸司他斯汀片口服，复方甘草酸单铵S静脉滴注，疗效欠佳，皮疹逐渐增多，蔓延至躯干及四肢。发病以来无发热，无咽痛、四肢乏力、关节肌肉疼痛等不适。既往体健，24 d前（发病前15 d）曾接种同批号新型冠状病毒灭活疫苗第1剂，当时无不适，周身无皮疹。起病前无感染史，无特殊用药史。否认药物、食物及其他过敏史。个人史、月经生育史及家族史无特殊。体检：各系统检查未见明显异常。皮肤科检查：左上臂伸侧注射疫苗部位可见一约8.0 cm × 5.0 cm淡红色斑片，形状不规则，上覆细小糠秕样鳞屑（图1A）；躯干及四肢近端散在分布红斑、丘疹、斑丘疹，呈圆形、椭圆形及不规则形，皮疹长轴与皮纹大致一致，上覆细小糠秕样鳞屑，皮疹分布相对对称（图1B、1C）。皮肤镜下为红色背景，皮疹中央呈褐色外观，白色鳞屑呈边缘分布（领圈样，图2A），皮损表面可见非特异性分布的点状血管及线状血管（图2B）。辅助检查：新型冠状病毒核酸检测为阴性，血尿便常规、肝肾功能、心肌酶（乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶）、血脂（总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇）、心电图、肺部CT均无明显异常。

疫苗的免疫途径在很大程度上决定了疫苗诱导的免疫应答特征。本文对经黏膜免疫和肌肉注射免疫的脊髓灰质炎病毒、伤寒沙门菌、流感病毒和新型冠状病毒疫苗诱导的免疫应答及保护效果进行综述，以分析不同免疫途径诱导的免疫应答特征差异，为传染病疫苗研发和疫苗接种策略制定提供理论参考。

目的:构建新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)和甲型流感病毒双价DNA疫苗，并在小鼠模型中评价其免疫原性。方法:将SARS-CoV-2 Beta突变株S1蛋白编码序列和甲型流感病毒Cambodia (H3N2)株HA蛋白编码序列进行密码子优化合成，采用Over-lapping PCR方法，将两个编码基因通过自裂解2A肽(self-cleaving 2A peptides)序列连接成S1-2A-HA片段，构建能同时表达S1蛋白和HA蛋白的双价DNA疫苗，命名为pVRC-S1-2A-HA，间接免疫荧光和Western blot验证S1蛋白和HA蛋白的表达。将DNA疫苗以肌肉注射加电转途径(IM＋EP)免疫BALB/c小鼠，间接ELISA、假病毒中和试验和血凝抑制试验检测小鼠体液免疫应答，IFN-γ ELISPOT、胞内细胞因子染色(intracellular cytokine staining，ICS)和CBA法检测小鼠细胞免疫应答。结果:双价DNA疫苗pVRC-S1-2A-HA可以同时表达S1蛋白和HA蛋白，初次免疫后能够显著诱导小鼠产生针对S1蛋白的特异性细胞免疫和针对HA蛋白的特异性IgG结合抗体；加强免疫后特异性免疫应答都显著增强，针对S1蛋白的特异性IgG结合抗体几何平均滴度(geometric mean titer，GMT)提高至3 251，细胞免疫提高至1 238 SFC/10 6个细胞，针对HA蛋白的特异性IgG结合抗体GMT达到45 407。ICS法检测到疫苗加强免疫可诱导小鼠CD4 ＋和CD8 ＋T细胞产生IL-2、IFN-γ、TNF-α；CBA结果显示单针免疫后小鼠脾细胞分泌多种细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ)。 结论:本研究成功构建能同时表达SARS-CoV-2 S1蛋白和甲型流感病毒H3N2亚型HA蛋白的双价DNA疫苗，该疫苗可诱导产生针对S1蛋白和HA蛋白的特异性体液免疫和细胞免疫应答，具有较好的研发与应用前景。

目的:探讨新疆野生荒漠肉苁蓉粗多糖（WCDCP）对卵清白蛋白（OVA）诱导小鼠免疫应答的影响。方法:将42只ICR小鼠按随机数字表法分为7组（每组6只）：9 g/L NaCl组（空白对照组）、WCDCP组（400 μg WCDCP）、OVA组（10 μg OVA）、低剂量WCDCP/OVA组（100 μg WCDCP+10 μg OVA）、中剂量WCDCP/OVA组（400 μg WCDCP+10 μg OVA）、高剂量WCDCP /OVA组（800 μg WCDCP+10 μg OVA）、铝佐剂/OVA组（阳性对照组，200 μg铝佐剂+10 μg OVA）。采用两点注射于小鼠后腿肌内进行免疫，共免疫2次，初次免疫后间隔2周加强免疫1次。分别于初次免疫后7、14、21、28 d称量小鼠体质量，观察小鼠体质量和生长状态变化，并采用间接酶联免疫吸附测定法检测小鼠血清IgG抗体及抗体分型水平。初次免疫后21 d，采用噻唑蓝法检测小鼠脾脏淋巴细胞增殖水平，流式细胞术检测小鼠脾脏和淋巴结中的T细胞亚群比例。结果:初次免疫后7 d，高剂量WCDCP/OVA组的血清IgG抗体水平（0.597 6±0.110 7）明显高于OVA组（0.254 4±0.074 8）（ P<0.05）。初次免疫后28 d，高剂量WCDCP/OVA组的血清IgG、IgG1和IgG2a抗体水平均高于OVA组（0.972 3±0.243 8比0.389 2±0.077 4，1.156 0±0.088 4比0.612 6±0.059 7，1.648 0±0.103 9比0.557 2±0.181 5），差异均具有统计学意义（ P<0.05， P<0.001， P<0.001）。高剂量WCDCP对刀豆蛋白A和脂多糖诱导的脾脏细胞增殖均具有明显的促进作用（ P<0.001， P<0.05）。高剂量WCDCP/OVA组小鼠脾脏中的CD3 +CD8 + T和CD3 +CD4 + T细胞比例明显高于OVA组[（10.83±0.44）%比（6.76 ± 0.58）%，（28.17 ± 1.67）%比（19.17±2.73）%]，差异均具有统计学意义（ P<0.01， P<0.05）。WCDCP对小鼠体质量（均 P>0.05）和生长无影响。 结论:WCDCP可增强OVA抗原的体液免疫反应和细胞免疫反应，且对小鼠生长无不良反应，是一种安全有效的候选疫苗佐剂。

目的:基于脂质多聚复合物(lipopolyplex, LPP)递送平台和保守抗原开发的新型流感病毒mRNA疫苗在小鼠体内的免疫原性评价。方法:将4个拷贝的甲型流感病毒基质蛋白2胞外域(extracellular domain of matrix 2 protein，M2e)与核蛋白(nucleoprotein，NP)编码基因按照真核密码子优化，串联构建融合抗原并体外转录为4M2eNP-mRNA，利用LPP技术平台制备甲型流感病毒mRNA疫苗(LPP-4M2eNP)。转染真核细胞后通过免疫荧光体外验证NP和M2e表达；BALB/c小鼠经肌肉注射10 μg、30 μg mRNA疫苗，间隔4周加强免疫一次，酶联免疫法检测免疫后血清抗体滴度，免疫斑点法检测细胞免疫应答。结果:间接免疫荧光检测表明4M2eNP-mRNA转染真核细胞后NP和M2e正确表达。单针免疫可明显诱导抗原(NP和M2e)特异性细胞免疫应答，加强免疫后在小鼠中诱发了抗原特异性体液免疫应答呈Th1型偏向；NP细胞免疫应答显著提高，但M2e细胞免疫应答强度无明显改变。结论:本研究制备的LPP-4M2eNP疫苗在小鼠中单针免疫即可诱导较强的细胞免疫应答，加强免疫后可诱导明显的体液和细胞免疫应答，表明该疫苗具有较好的研发和应用前景。

目的:分析三个部位接种无细胞百白破b型流感嗜血杆菌联合疫苗（DTaP-Hib）不良反应发生情况。方法:选取2015年5月至2019年4月北京市朝阳区所有接种门诊自愿接种DTaP-Hib疫苗的婴幼儿为研究对象，共12 241名。DTaP-Hib疫苗推荐免疫接种程序为3、4、5月龄进行基础免疫，18~24月龄加强免疫。将研究对象按照接种部位分为3组，分别为股外侧肌组、上臂三角肌组和臀部肌肉组，收集研究对象每剂次疫苗接种后30 min、7 d内的不良反应情况，比较不同部位不良反应发生率。结果:股外侧肌、上臂三角肌和臀部肌肉组分别为3 461、2 659和6 121名；共接种35 027剂次，股外侧肌、上臂三角肌和臀部肌肉组分别接种11 129、7 957和15 941剂次；共观察到不良反应2 489例次，总不良反应发生率为7.11%，其中上臂三角肌组总不良反应发生率为9.69%（771例次），高于臀部肌肉组（7.60%，1 211例次）和股外侧肌组（4.56%，507例次）（ P<0.001）。上臂三角肌组轻度、中度和严重的不良反应发生率均高于其他两组，发生率分别为4.85%（386例次）、3.77%（300例次）和1.07%（85例次），组间差异有统计学意义（ P值均<0.001）。基础免疫3剂次和加强免疫第4剂次在不同部位的总不良反应趋势一致，发生率由高到低依次为上臂三角肌注射、臀部肌肉注射和股外侧肌注射，组间差异有统计学意义（ P值均<0.001）。 结论:研究对象3个部位接种DTaP-Hib不良反应发生率均较低，均具有较好的安全性，其中股外侧肌组不良反应发生率最低，建议推荐为DTaP-Hib疫苗的优先接种部位。

目的:比较肠炎沙门菌制备的菌影(SE-ghost)通过肌肉注射(肌注)和口服不同免疫途径接种雌性BALB/c小鼠诱导体液和细胞免疫应答的功效。方法:用SE-ghost接种BALB/c小鼠，间接ELISA检测小鼠血清中IgG抗体水平和阴道灌洗液IgA抗体水平；流式细胞仪检测小鼠脾脏CD3 ＋CD4 ＋T、CD3 ＋CD8 ＋T细胞百分比变化和脾脏内细胞因子IL-4、IFN-γ分泌；三次免疫后所有小鼠口服半数致死量肠炎沙门菌进行强毒攻击。用SE-ghost刺激小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs)，流式细胞仪检测表面分子抗体APC-CD11c、FITC- MHC ClassⅡ、PE-CD40、FITC- CD86、PE-CD80表达量；双抗体夹心ELISA测定BMDCs上清液IL-1β、IL-6、IL-10和IL-12p70的产量。 结果:与PBS组相比，SE-ghost(口服)和SE-ghost(肌注)免疫组小鼠体内肠炎沙门菌特异性抗体IgG和IgA水平明显增高；脾脏CD3 ＋CD4 ＋T细胞百分比上调、高分泌细胞因子IL-4 、IFN-γ。肌肉注射SE-ghost比口服可诱导更强的体液和细胞免疫应答。致病菌肠炎沙门菌强毒攻击后，SE-ghost(口服)和SE-ghost(肌注)免疫组生存率高达80%。与对照组相比，BMDCs经SE-ghost刺激后高表达表面成熟分子抗体CD86、CD80、CD40、MHCⅡ，高分泌细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12p70。 结论:通过肌肉注射SE-ghost进行免疫，可在小鼠中引发更强大的抗原特异性免疫应答，以防止沙门菌感染。SE-ghost是一种有用的沙门菌候选疫苗。

目的:通过比较简单混合和融合重组的单纯疱疹病毒2型糖蛋白D(herpes simplex virus type 2 glycoprotein D，HSV-2 gD)联合分子佐剂CCL19的DNA疫苗对免疫小鼠的免疫应答及免疫保护效果的差异，揭示融合重组疫苗的保护作用。方法:利用基因重组技术构建HSV-2 gD和CCL19单独表达及融合表达的DNA疫苗，经测序、Western blot和ELISA验证后，肌肉注射免疫BALB/c小鼠两次，免疫后定期收集血清和阴道灌洗液，分离免疫后的脾细胞、肠系膜淋巴结细胞及直肠组织。通过终点法ELISA、体外中和试验、免疫组织化学染色、趋化试验、阴道攻毒试验、荧光定量PCR、称量体重及观察疾病严重程度，比较两种形式的疫苗免疫后小鼠的体液免疫、细胞免疫应答和免疫保护作用的差异。结果:融合重组的pgD-IZ-CCL19质粒可在体外正常表达gD蛋白和CCL19蛋白，但pCCL19-IZ-gD质粒的CCL19蛋白表达量比pgD-IZ-CCL19少。免疫pgD-IZ-CCL19的小鼠能产生比pgD+pCCL19组更高水平的血清IgG抗体、阴道灌洗液IgA抗体( P<0.01)和中和能力。与其他组比较，pgD-IZ-CCL19组小鼠免疫后直肠黏膜、脾脏和肠系膜淋巴结均招募了较多的淋巴细胞，攻毒后该组小鼠未出现体重减少和疾病症状，阴道黏膜HSV-2检出率最低，小鼠死亡率也最低，而pCCL19-IZ-gD组的免疫保护无效。 结论:pgD-IZ-CCL19融合重组的DNA疫苗能诱导小鼠产生较强的免疫应答和免疫保护作用，免疫保护效果优于简单混合DNA疫苗。

目的:建立狂犬病病毒CVS-11以肌肉注射或脑内注射方式攻毒的BALB/c小鼠动物模型。方法:将由BSR细胞传代繁殖的滴度为2.7×10 7 FFU/ml的CVS-11毒株进行10 －1～10 －7倍系列稀释，分别以肌肉或脑内注射的方式对4周龄的雌性BALB/c小鼠进行攻毒，观察小鼠发病死亡情况，并对所有攻毒小鼠的脑组织进行直接免疫荧光试验(direct fluorescent assay, DFA)及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测以确定小鼠死因。确定不同攻毒方式下小鼠的半数致死量(median lethal dose，LD 50)，建立小鼠模型。根据已建立的小鼠模型，评估4种国内市售狂犬病疫苗对CVS-11暴露后小鼠的免疫保护效果。 结果:BALB/c小鼠脑内攻毒后于第6～12天开始出现典型的神经症状并死亡，其LD 50为18.3/0.1 ml；肌肉注射攻毒的小鼠在第8～15天出现临床症状并死亡，LD 50为2.7×10 5/0.1 ml。DFA检测结果显示，所有死亡小鼠脑组织印片中均出现特异性黄绿色荧光，RT-PCR检测结果显示所有的扩增产物均出现大小约250 bp的明亮条带。以上结果提示狂犬病病毒感染是小鼠的致死原因。4种不同的市售狂犬病疫苗在无免疫球蛋白应用情况下的保护效果试验显示，接种其中1种疫苗暴露后小鼠的存活率为50%，接种其他3种疫苗小鼠的存活率为30%。以上结果表明，在无狂犬病被动免疫制剂使用的情况下，所选用的4种狂犬病疫苗对经CVS-11暴露后的小鼠提供了部分保护作用。 结论:本研究建立了狂犬病病毒CVS-11不同攻毒方式下的BALB/c小鼠动物模型，为狂犬病及狂犬病疫苗的相关研究提供了一个技术平台。