目的:探讨白藜芦醇对狂犬病病毒的体外抑制作用。方法:以狂犬病病毒动物攻毒标准株CVS-11为模式病毒，针对狂犬病病毒感染周期，建立白藜芦醇处理下的CVS-11和BHK-21细胞组成的感染模型，通过直接免疫荧光、细胞荧光灶转化等方法检测白藜芦醇对狂犬病病毒的抑制作用。结果:在不影响细胞生长的条件下，随着浓度的增加，白藜芦醇可阻滞病毒的吸附、干扰病毒进入细胞并抑制病毒的增殖，抑制率最高可达约95%。另外，白藜芦醇与病毒共孵育的结果显示，40 μmol/L的白藜芦醇可直接杀灭病毒。结论:白藜芦醇具有抑制狂犬病病毒活力的作用，且这种抑制效应具有剂量依赖性。

目的:评估全自动流水线自动检测室内质控（自动质控）的适用性。方法:利用自动质控实施方法评估北京协和医院检验科于2019年1月至2022年7月18个生化项目、5个免疫比浊项目、11个化学发光项目的自动质控稳定性、检测效率和实施成本。具体方法：将生化、免疫比浊以及化学发光项目的质控品存储在流水线冰箱中，由中间体软件控制流水线，按设置时间自动调取质控品上机测定并归档保存。生化项目的质控设置为每日和每周更换质控品2种模式，共同运行3个月，通过比较2种模式质控结果的变异系数（ CV）评估质控品在线存储稳定性。分析自动质控和手动质控结果变异、质控失控率、质控品消耗量、员工工作量、首个样本检测时间和自动质控故障率6个指标，评估自动质控应用效果。 结果:（1）质控品在线存储稳定性：每周更换生化在线质控品模式下，总二氧化碳（TCO 2）高低两水平质控的 CV分别为20.24%和21.82%，大于实验室设定的允许变异；丙氨酸转氨酶（ALT）等其他16个项目变异均小于允许变异。（2）自动和手动质控模式下质控结果变异：每日更换生化在线质控品、每周更换免疫比浊和化学发光在线质控品的模式下，硫酸脱氢表雄酮、雌二醇、卵泡刺激素、促黄体生成素、铁蛋白、叶酸、维生素B 12和睾酮 8个化学发光项目，补体3、C反应蛋白和免疫球蛋白G 3个免疫比浊项目和碱性磷酸酶、葡萄糖、钙、氯、钾、乳酸脱氢酶、钠、尿素、低密度脂蛋白胆固醇和腺苷脱氨酶 10个生化项目的低、高水平质控自动质控检测结果的 CV均低于手动质控结果的 CV。2种质控模式的生化、免疫比浊和化学发光项目的失控率均符合临床常规工作需求。（3）质控品消耗量比较：自动质控与手动质控比较，化学发光质控品每周使用量减少37.5%（由8 ml减至5 ml）；免疫比浊质控品每周使用量减少33.3%（由3 ml减至2 ml）。（4）员工工作量和首个样本进样时间比较：自动质控与手动质控比较，员工每周减少手工操作步骤约156步，每日首个样本检测时间平均提前15 min。自动质控开始运行的前期故障率为54.5%（37/64），后期降至10.2%（13/128）。 结论:通过流水线系统自动检测室内质控结果满足实验室质量指标要求，应用自动质控可提高质控水平，节约成本，减轻工作量、提高工作效率。

目的:了解联合用药治疗儿童周期性呕吐综合征(cyclic vomiting syndrome，CVS)的临床效果，以提高对儿童CVS的治疗水平。方法:选择2012至2019年在首都医科大学附属北京儿童医院消化科诊断CVS的患儿为研究对象。治疗方案为A方案(赛庚啶+多赛平+丙戊酸)，B方案(普萘洛尔+赛庚啶)，C方案(普萘洛尔+阿米替林)，服药时间≥3个月。共对42例患儿的临床资料进行回顾性分析，并对出院后的治疗效果进行随访，电话随访至2020年10月。结果:42例患儿中，男17例，女25例，平均发病年龄(4.65±3.23)岁，诊断时年龄(6.79±3.58)岁。主要伴随临床症状包括腹痛、上消化道出血，42例均为中重度CVS。治疗方案：A方案7例，B方案11例，C方案24例。好转年龄(8.17±4.12)岁，服药疗程(1.37±0.96)年，随访时年龄(10.32±4.03)岁。至随访1年内，治疗有效35例，有效率为83.3%，其中完全无刻板样发作的呕吐23例，治疗无效共7例。三种治疗方案对CVS的治疗效果差异无统计学意义。治疗有效组与治疗无效组相比，个人史中有食管裂孔疝( P＝0.024)、随访时体重( P＝0.042)和服药疗程( P＝0.020)差异有统计学意义。 结论:联合用药方案治疗CVS有效率较高，三种治疗方案对CVS的治疗效果无差异。对于联合用药治疗无效的难治性CVS患儿，需进一步制定个体化的治疗方案。

目的:建立狂犬病病毒CVS-11以肌肉注射或脑内注射方式攻毒的BALB/c小鼠动物模型。方法:将由BSR细胞传代繁殖的滴度为2.7×10 7 FFU/ml的CVS-11毒株进行10 －1～10 －7倍系列稀释，分别以肌肉或脑内注射的方式对4周龄的雌性BALB/c小鼠进行攻毒，观察小鼠发病死亡情况，并对所有攻毒小鼠的脑组织进行直接免疫荧光试验(direct fluorescent assay, DFA)及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测以确定小鼠死因。确定不同攻毒方式下小鼠的半数致死量(median lethal dose，LD 50)，建立小鼠模型。根据已建立的小鼠模型，评估4种国内市售狂犬病疫苗对CVS-11暴露后小鼠的免疫保护效果。 结果:BALB/c小鼠脑内攻毒后于第6～12天开始出现典型的神经症状并死亡，其LD 50为18.3/0.1 ml；肌肉注射攻毒的小鼠在第8～15天出现临床症状并死亡，LD 50为2.7×10 5/0.1 ml。DFA检测结果显示，所有死亡小鼠脑组织印片中均出现特异性黄绿色荧光，RT-PCR检测结果显示所有的扩增产物均出现大小约250 bp的明亮条带。以上结果提示狂犬病病毒感染是小鼠的致死原因。4种不同的市售狂犬病疫苗在无免疫球蛋白应用情况下的保护效果试验显示，接种其中1种疫苗暴露后小鼠的存活率为50%，接种其他3种疫苗小鼠的存活率为30%。以上结果表明，在无狂犬病被动免疫制剂使用的情况下，所选用的4种狂犬病疫苗对经CVS-11暴露后的小鼠提供了部分保护作用。 结论:本研究建立了狂犬病病毒CVS-11不同攻毒方式下的BALB/c小鼠动物模型，为狂犬病及狂犬病疫苗的相关研究提供了一个技术平台。

目的:比较我国现行狂犬病疫苗暴露前免疫程序(0-7-21或28)与WHO新推荐的免疫程序(0-7)在安全性、有效性及保护性方面的差别，为修订《狂犬病预防控制技术指南》相关内容提供实验动物方面的数据支持。方法:按照我国现行的3针法、WHO新推荐的2针法等狂犬病暴露前免疫程序，将小鼠随机分成5组，即0-7-21组(3针组)、0-7组(2针组)、0-14组、0-21组和对照组。观察小鼠生存状态，每间隔5 d称重，比较不同免疫程序的安全性。首次免疫后7、14、21、28和35 d采血，检测抗狂犬病病毒中和抗体(rabies virus neutralizing antibodies，RVNA)，确认其有效性。免疫后35 d以致死剂量的CVS-11狂犬病病毒对各组小鼠攻毒，评价不同免疫程序的保护性。结果:接种疫苗后，各组小鼠体重增长差异无统计学意义。免疫后14 d，各免疫组小鼠RVNA阳转率均为100%，可对小鼠提供完全保护作用。0-7-21 d组和0-7 d组免疫后35 d RVNA水平差异有统计学意义( P<0.05)，其余各时间点差异均无统计学意义( P>0.05)。2针免疫程序组中，除0-7组与0-21组在免疫后21 d、35 d的RVNA水平差异有统计学意义外( P<0.05)，其余各组各时间点的RVNA水平差异均无统计学意义( P>0.05)。在保护性试验中，各免疫组小鼠生存率均为100%。 结论:我国现行的3针法狂犬病疫苗暴露前免疫程序(0-7-21)与WHO新推荐的2针法免疫程序(0-7)在动物实验中具有相似的有效性和保护性，鉴于2针法免疫程序在节约成本的同时具有更好的依从性，建议相关部门尽快开展临床试验以推进该方案的实施。

目的:评价从噬菌体库筛选获得的1株抗狂犬病病毒单克隆抗体的基本特征。方法:从抗狂犬病病毒噬菌体库中筛选获得1个阳性克隆，扩增获得其抗体轻重链可变区，构建全分子抗体的表达质粒后在HEK293 EBNA1细胞中瞬时表达，亲和纯化后对该抗体进行体外抗狂犬病病毒中和活性、中和指数、逃逸株测序、差示扫描荧光法热稳定性分析，并与数据库中街毒株糖蛋白比对关键氨基酸位点。结果:该抗体体外抗狂犬病病毒中和活性为691IU/mg；该抗体对狂犬病病毒CVS-11和CTN株的中和指数分别为8.52和7.05；CVS-11逃逸株糖蛋白测序分析表明，该抗体针对的关键氨基酸主要为N37 K、N194 K和K205 N。与1 338株狂犬病病毒街毒株糖蛋白基因比对表明，37、194和205位上仅有1个街毒株在194位上与突变逃逸株氨基酸类型相同。该抗体Tm值为70.58±0.31 ℃。结论:获得1株高中和指数的全分子人源抗狂犬病病毒中和抗体，该抗体具有较好的热稳定性。

目的:融合穿梭肽和狂犬病单链抗体，优化在大肠杆菌中的表达条件，获得具有中和活性的重组穿梭肽-单链抗体。方法:重新编码SO57抗体序列，在N端融合Arg 12的穿梭肽，构建pET22(b)-rSO57表达载体，在大肠杆菌中重组表达。在菌体生长密度OD 600、诱导时间、诱导温度和诱导剂浓度条件进行优化，获得较高的表达效果。使用固定化金属螯合层析对重组蛋白进行纯化，测定了重组单链抗体的相对亲和力，通过rSO57/CVS-11混合感染细胞和快速荧光灶抑制实验(rapid fluorescent focus inhibition test，RFFIT)，验证重组单链抗体的中和作用。 结果:rSO57构建成功，在 BL21(de3)中诱导表达，最优表达条件为菌体密度OD 600在0.8时，使用0.4 mmol/ml的IPTG诱导，16 ℃下诱导24 h，rSO57以可溶形式表达，表达量占到了菌体可溶性蛋白的19.8%。层析纯化后，获得了纯度为84%的重组rSO57。ELISA实验显示，rSO57的相对亲和力系数Ka＝4.3×10 5。当rSO57与CVS-11混合时，随着稀释的增加，细胞的感染率上升，表明重组抗体具有中和狂犬病病毒的能力。使用RFFIT进行测定，50 μg的rSO57相当于2.17IU的狂犬病中和血清。 结论:本实验重组表达了融合穿梭肽的重组单链抗体rSO57，且可以中和狂犬病病毒，以期制备可以用于狂犬病治疗的特异性和靶向性的抗病毒药物载体。

Background::We have recently developed a new Coronary Artery Tree description and Lesion EvaluaTion (CatLet) angiographic scoring system. Our preliminary studies have demonstrated its superiority over the the Synergy between percutaneous coronary intervention (PCI) with Taxus and Cardiac Surgery (SYNTAX) score with respect to outcome predictions for acute myocardial infarction (AMI) patients. The current study hypothesized that the residual CatLet (rCatLet) score predicts clinical outcomes for AMI patients and that a combination with the three clinical variables (CVs)—age, creatinine, and ejection fraction, will enhance its predicting values.Methods::The rCatLet score was calculated retrospectively in 308 consecutively enrolled patients with AMI. Primary endpoint, major adverse cardiac or cerebrovascular events (MACCE) including all-cause mortality, non-fatal AMI, transient ischemic attack/stroke, and ischemia-driven repeat revascularization, was stratified according to rCatLet score tertiles: rCatLet_low ≤3, rCatLet_mid 4-11, and rCatLet_top ≥12, respectively. Cross-validation confirmed a reasonably good agreement between the observed and predicted risks.Results::Of 308 patients analyzed, the rates of MACCE, all-cause death, and cardiac death were 20.8%, 18.2%, and 15.3%, respectively. Kaplan-Meier curves for all endpoints showed increasing outcome events with the increasing tertiles of the rCatLet score, with P values <0.001 on trend test. For MACCE, all-cause death, and cardiac death, the area under the curves (AUCs) of the rCatLet score were 0.70 (95% confidence intervals [CI]: 0.63-0.78), 0.69 (95% CI: 0.61-0.77), and 0.71 (95% CI: 0.63-0.79), respectively; the AUCs of the CVs-adjusted rCatLet score models were 0.83 (95% CI: 0.78-0.89), 0.87 (95% CI: 0.82-0.92), and 0.89 (95% CI: 0.84-0.94), respectively. The performance of CVs-adjusted rCatLet score was significantly better than the stand-alone rCatLet score in terms of outcome predictions. Conclusion::The rCatLet score has a predicting value for clinical outcomes for AMI patients and the incorporation of the three CVs into the rCatLet score will enhance its predicting ability.Trial Registration::http://www.chictr.org.cn, ChiCTR-POC-17013536.

目的 制备狂犬病病毒(rabies virus,RV)基质蛋白(M)鼠源和兔源多克隆抗体,并比较其反应原性.方法 以RV CVS-11毒株感染细胞后的cDNA为模板构建原核表达载体pET-28a-M,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达M蛋白,经镍柱亲和层析、透析复性后,免疫雌性BALB/c小鼠和雌性新西兰大白兔,取全血,分离血清,ELISA法检测鼠源和兔源多克隆抗体效价,Western blot法、间接免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)、免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)法检测鼠源和兔源多克隆抗体反应原性.结果 质粒pET-28a-M经测序鉴定证明构建正确;制备的鼠源和兔源多克隆抗体效价分别为1∶100和1∶256 000,与不同RV毒株均具有反应原性.结论 成功制备了 M蛋白鼠源和兔源多克隆抗体,为探讨M蛋白与宿主蛋白相互作用的关系以及研究RV的致病机制提供了重要的生物学工具.

目的 建立一种检测猪血清中弓形虫循环抗原(circulating antigen,CAg)的双抗体夹心ELISA法.方法 利用抗弓形虫表面抗原3(surface antigen 3,SAG3)的单克隆抗体Anti-A-SAG3-7作为捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗弓形虫SAG3的单克隆抗体Anti-A-SAG3-23作为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,并对方法的捕获抗体(1∶400～1∶6400倍比稀释)、检测抗体(1∶400～1∶12800倍比稀释)、血清稀释度(1∶10～1∶80倍比稀释)及封闭液的种类(5％脱脂奶粉、10％胎牛血清、5％ BSA、1％ BSA)进行优化,同时验证该方法的敏感性、特异性及精密性.采用优化后的方法对广东和吉林地区的各94份猪血清样本进行检测.结果 双抗体夹心ELISA法的最佳检测条件为:捕获抗体Anti-A-SAG3-7及检测抗体HRP-Anti-A-SAG3-23稀释度均为1∶3200,封闭液为1％ BSA,血清稀释度为1∶80.该方法检测两份猪囊虫阳性血清无交叉反应,灵敏度达1∶640,批内及批间的变异系数(CV)均＜11％.广东和吉林地区各94份样品的阳性率分别为20.2％(19/94)和11.7％(11/94).结论 该方法具有良好的特异性、敏感性及精密性,可用于猪弓形虫CAg的检测.