目的:探讨 miR-520c-3p对糖尿病肾脏病患者近端肾小管上皮细胞焦亡的影响及其分子机制。 方法:收集2019年6月至2020年12月在郑州大学第一附属医院就诊的糖尿病肾脏病患者（DKD组，4例）和糖耐量正常肾脏肿瘤手术者（正常对照组，4例）的肾脏组织。HE染色、过碘酸-希夫染色（PAS）和透射电镜观察肾脏组织病理学变化。取生长状态良好的人近端肾小管上皮（HK-2）细胞传代至培养板内，并分成如下8组：正常葡萄糖组（NG，5.6 mmol/L葡萄糖）、高糖组（HG，30.0 mmol/L葡萄糖）、抑制物组（正常葡萄糖+转染 miR-520c-3p抑制物）、抑制物对照组（正常葡萄糖+转染 miR-520c-3p抑制物阴性对照物）、模拟物组（高糖+转染 miR-520c-3p模拟物）、模拟物对照组（高糖+转染 miR-520c-3p模拟物阴性对照物）、模拟物+TXNIP共转染组（高糖+共转染 miR-520c-3p模拟物+TXNIP）、共转染阴性对照组（高糖+共转染 miR-520c-3p模拟物+TXNIP阴性对照物）。活细胞动态实时监测细胞活性，碘化丙啶（PI）染色检测细胞焦亡情况；免疫荧光染色、荧光原位杂交、实时定量PCR和Western blotting法检测 miR-520c-3p、硫氧还蛋白相互作用蛋白（TXNIP）和细胞焦亡分子NOD样受体蛋白3（NLRP3）、活化半胱氨酸蛋白酶-1（cl-caspase-1）、消皮素D（GSDMD）的mRNA和蛋白表达水平；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞上清液白细胞介素-1β（IL-1β）含量；双荧光素酶报告基因实验明确 miR-520c-3p和 TXNIP之间的相互作用。两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:与对照组相比，DKD组肾脏组织肾小管炎性细胞增多，伴随 miR-520c-3p表达水平下降， TXNIP表达升高（均 P<0.05）；肾小管特异性标志物水通道蛋白1（AQP1）与NLRP3和GSDMD焦亡蛋白共定位均增加。在HK-2细胞中，与NG组相比，HG组焦亡细胞增多，伴随 miR-520c-3p表达水平下降，TXNIP、NLRP3、cl-caspase-1、GSDMD的蛋白水平和细胞上清液IL-1β浓度升高（均 P<0.05）；与模拟物对照组相比，模拟物组中 miR-520c-3p表达量更高， TXNIP mRNA表达量更低，TXNIP、NLRP3、cl-caspase-1、GSDMD的蛋白水平和IL-1β浓度更低（均 P<0.01），TXNIP和NLRP3共表达定位减少（ P<0.05）；与抑制物对照组相比，抑制物组中 miR-520c-3p表达量更低， TXNIP mRNA表达量更高，TXNIP、NLRP3、cl-caspase-1、GSDMD的蛋白水平和IL-1β浓度更高（均 P<0.01）。与共转染阴性对照组相比，模拟物+TXNIP共转染组的TXNIP和NLRP3共表达定位增加，TXNIP、NLRP3、cl-caspase-1、GSDMD的蛋白水平更高（ P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验表明， TXNIP是 miR-520c-3p直接作用靶点， miR-520c-3p通过靶向调节TXNIP表达，抑制高糖诱导的细胞焦亡。 结论:miR-520c-3p通过抑制TXNIP/NLRP3途径减轻高糖诱导的近端肾小管上皮细胞焦亡。

目的 探讨长链非编码RNA-gm33782(LncRNA-gm33782)在急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)肾小管损伤中的功能以及异鼠李素改善肾小管炎性细胞凋亡的作用机制.方法 将 48 只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、治疗组(AKI 模型构建后灌胃给予 30 mg/kg 异鼠李素)、空载质粒电转染组、LncRNA-gm33782 敲低组、LncRNA-gm33782 过表达组、LncRNA-gm33782 敲低组+模型组、LncRNA-gm33782 过表达+治疗组 8 组,通过腹腔一次性注射 20 mg/kg顺铂诱导小鼠AKI,原位电转染技术用于介导肾LncRNA-gm33782 的敲低和过表达.采用Chirp实验捕获AKI肾LncRNA-gm33782 结合蛋白进行质谱分析,挖掘LncRNA-gm33782 直接作用靶蛋白;通过观察电转染敲低LncRNA-gm33782 和异鼠李素(isorhamnetin,ISO)治疗干预后小鼠肾功能、病理结构改变、肾炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)表达,评价LncRNA-gm33782 在AKI中的作用;NF-κB被作为介导炎症的关键信号通路,Bax、Bcl-2蛋白表达量以及流式凋亡检测结果被用于评价异鼠李素对AKI肾小管炎性细胞凋亡的治疗作用.结果 AKI小鼠肾表现出严重的肾小管损伤以及巨噬细胞浸润和炎症,异鼠李素的治疗干预和LncRNA-gm33782 电转染敲低均能够减轻AKI肾损伤.LncRNA-gm33782 主要表达于AKI损伤的肾小管细胞,质谱检测发现补体因子-H(complement factor-H,CFH)与其有直接结合关系.体外过表达LncRNA-gm33782 后,CFH表达量随即升高,而异鼠李素对AKI细胞炎性凋亡的治疗作用受到抑制.结论 异鼠李素是通过抑制LncRNA-gm33782 对CFH的调控作用减轻AKI肾小管细胞炎性凋亡.