X-连锁低磷血症是最常见的遗传性低磷血症，致病基因是位于X染色体上与内肽酶同源的磷酸盐调节基因(PHEX基因)，呈显性遗传。PHEX基因的缺陷使血成纤维细胞生长因子(FGF)23水平上调，继而近端肾小管上皮细胞的膜结合钠-磷协同转运体NaPi-Ⅱa和NaPi-Ⅱc发生降解以及1α-羟化酶表达被抑制、24-羟化酶活性被增强，最终导致临床表现为肾磷酸盐丢失、维生素D代谢及骨矿化异常的佝偻病/骨软化症。诊断该病有赖于临床症状、影像学检查及实验室结果的综合判断，确诊该病后应尽早且终身予以磷酸盐合剂及骨化三醇替代治疗，必要时加用重组人生长激素改善身高，新药抗FGF23单克隆抗体Burosumab的出现具有较好的应用前景与研究价值。

目的:探讨微小RNA(miRNA)-6516-5p在肾癌细胞系中的表达及调控肾癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法:用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾癌细胞系和正常近端肾小管上皮细胞系中miR-6516-5p的表达。用脂质体法分别将miR-6516-5p模拟物和无意义序列(NC)瞬时转染至miR-6516-5p表达最低的肾癌细胞，即miR-6516-5p组和NC组。qRT-PCR检测转染细胞miR-6516-5p的表达。CCK-8法和Transwell迁移实验检测转染细胞的增殖和迁移。生物信息学软件和双荧光素酶基因报告实验分别预测和验证miR-6516-5p对靶基因的调控。qRT-PCR和Western blotting法分别检测转染细胞中靶基因的表达。计量资料以均数±标准差( ± s)表示，两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:miR-6516-5p在肾癌细胞系中的表达均明显低于正常近端肾小管上皮细胞( P<0.01)，786-O细胞中miR-6516-5p的表达最低( F＝27.69， P<0.01)。NC组和miR-6516-5p组786-O细胞中miR-6516-5p的表达分别为1.01±0.08和9.91±1.16，与NC组比较，miR-6516-5p组786-O细胞中miR-6516-5p表达明显增加( t＝7.63， P<0.01)。上调miR-6516-5p能显著抑制786-O细胞的增殖( P<0.05)。NC组和miR-6516-5p组细胞迁移数分别为(85.65±8.77)个和(28.05±6.20)个，过表达miR-6516-5p可抑制786-O细胞的迁移( t＝5.36， P<0.01)。miR-6516-5p的靶基因可能是鸟氨酸脱羧酶1( ODC1)，miR-6516-5p能显著抑制野生型ODC1-3′UTR的荧光素酶活性( t＝9.83， P<0.01)。上调miR-6516-5p可降低786-O细胞中ODC1 mRNA和蛋白的表达( P<0.01)。 结论:miR-6516-5p在肾癌细胞系中表达降低，miR-6516-5p通过靶向ODC1抑制肾癌786-O细胞的增殖和迁移，miR-6516-5p可能成为肾癌潜在的分子靶点。

目的:初步探讨沉默信息调节因子3（silent information regulator 3，SIRT3）在高糖诱导的肾小管上皮细胞铁死亡中的作用，以期为糖尿病肾脏疾病患者肾小管损伤提供新的理论依据和治疗思路。方法:通过“Tabula-muris”单细胞转录组数据库分析肾组织各细胞亚群 SIRT3基因的表达。体外培养人永生化肾小管上皮细胞（HK-2细胞）进行以下分组：（1）对照组、甘露醇组及高糖组。（2）对照组、阴性对照组、过表达 SIRT3组、高糖组及过表达 SIRT3+高糖组。（3）对照组、阴性对照组、敲低 SIRT3组、高糖组及敲低 SIRT3+高糖组。（4）对照组、Erastin干预组及过表达 SIRT3+Erastin干预组。正常葡萄糖5.5 mmol/L，高糖30 mmol/L，甘露醇24.5 mmol/L，Erastin 10 μmol/L，干预时间为48 h。细胞增殖与毒性检测试剂盒实验检测细胞活力。实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测SIRT3、肾损伤分子1及铁死亡相关蛋白酰基辅酶A合成酶长链家族成员4（acyl-CoA synthetase long chain family member 4，ACSL4）、谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase 4，GPX4）mRNA和蛋白水平的表达。通过检测丙二醛、谷胱甘肽、铁含量评估细胞铁死亡程度。DCFH-DA法检测细胞内活性氧水平。JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位改变。 结果:（1）单细胞转录组数据库分析结果显示， SIRT3基因在肾组织近端肾小管上皮细胞亚群中表达最高。（2）与对照组比较，高糖组HK-2细胞肾损伤分子1、ACSL4表达均较高，SIRT3、GPX4表达及细胞活力均较低（均 P<0.05），甘露醇组与对照组上述指标的差异均无统计学意义（均 P>0.05）。（3）与高糖组比较，过表达 SIRT3+高糖组HK-2细胞活力、GPX4表达及细胞内谷胱甘肽均较高，ACSL4表达、细胞内铁、丙二醛及活性氧均较低，线粒体膜电位部分恢复（均 P<0.05）；与高糖组比较，敲低 SIRT3+高糖组HK-2细胞活力、GPX4表达均较低，ACSL4表达较高（均 P<0.05），细胞内铁、丙二醛、谷胱甘肽的差异均无统计学意义（均 P>0.05）。（4）与对照组比较，Erastin干预组HK-2细胞ACSL4表达较高，GPX4表达较低（均 P<0.05）；与Erastin干预组比较，过表达 SIRT3+Erastin干预组ACSL4表达较低，GPX4表达较高（均 P<0.05）。 结论:高糖可诱导HK-2细胞SIRT3表达下调、线粒体膜电位降低以及氧化应激和铁死亡增加，过表达 SIRT3可能通过减少氧化应激及缓解线粒体功能障碍减轻高糖诱导的HK-2细胞铁死亡。

目的:探讨高糖环境下卡格列净通过抑制lncRNA CO9缓解肾小管上皮细胞凋亡的作用及其机制。 方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞系（HK-2），将其分为正常葡萄糖（NG）组、高渗（HO）组、高糖（HG）组、高糖+二甲基亚砜组（DMSO组）、高糖+卡格列净组（CANA组）、高糖+阴性对照小干扰RNA组（si-NC组）、高糖+lncRNA CO9小干扰RNA组（si-CO9组）、高糖+空载质粒组（PEX-NC组）、高糖+lncRNA CO9过表达质粒组（PEX-CO9组）、高糖+卡格列净+lncRNA CO9过表达质粒组（CANA+PEX-CO9组）。采用细胞计数试剂-8（CCK-8）法与四唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖率；Western blotting检测凋亡相关蛋白［B细胞淋巴瘤 2相关X蛋白（Bax）、B细胞淋巴瘤 2（Bcl-2）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、活化型Caspase-3］与核因子（NF）-κB p50亚基及其前体p105蛋白的相对表达量，计算Bax/Bcl2蛋白相对表达量比值；流式细胞术检测细胞凋亡率；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测lncRNA CO9与 NF-κB1 mRNA的相对表达量。采用荧光原位杂交检测lncRNA CO9亚细胞定位，基因本体论（GO）、京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析预测其功能。收集临床正常对照组（NC组，5例）与糖尿病肾脏病组患者（DKD组，5例）肾脏样本，检测其近端肾小管上皮细胞lncRNA CO9的表达。两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:与NG组相比，HG组细胞增殖率降低，Bax/Bcl2蛋白相对表达量比值、Caspase-3与活化型Caspase-3蛋白相对表达量、细胞凋亡率、lncRNA CO9均显著上调；而与HG组相比，CANA组细胞凋亡率下降，lncRNA CO9表达下调（ P<0.05）。lncRNA CO9定位于细胞质。GO与KEGG分析显示，lncRNA CO9与细胞凋亡通路相关。在DKD组肾脏组织近端肾小管上皮细胞lncRNA CO9表达较NC组上调（ P<0.05）。相较于HG组，si-CO9组凋亡蛋白相对表达量、凋亡率及 NF-κB1 mRNA、NF-κB p50亚基及其前体p105蛋白相对表达量下降，PEX-CO9组则增高（ P<0.05）。与CANA组相比，CANA+PEX-CO9组的凋亡蛋白相对表达量、凋亡率与 NF-κB1 mRNA、NF-κB p50亚基及其前体p105蛋白相对表达量上升（ P<0.05）。 结论:卡格列净可通过抑制lncRNA CO9的表达缓解高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡。

目的:寻找脓毒症相关性急性肾损伤（AKI）的关键基因，为脓毒症相关性AKI的治疗提供理论和实验依据。方法:①生物信息学分析：对基因表达数据库（GEO）中GSE30718和GSE53773数据集进行生物信息学分析，这两个数据集记录了肾移植手术前后对移植肾进行规律性肾活检的基因芯片数据，一部分患者在肾移植后发生了AKI。对两个数据集中AKI相关基因表达差异进行分析，找到在两个数据集中差异一致且受试者工作特征曲线下面积（AUC）较高的基因作为目的基因，进行后续细胞验证实验。②细胞验证实验：体外培养人近端肾小管上皮细胞株HK2，使用10 mg/L脂多糖（LPS）孵育6 h制备LPS-HK2细胞模型（LPS模型组），并设空白对照组；使用小干扰RNA（siRNA）技术对LPS-HK2细胞中通过生物信息学分析得出的目的基因进行敲减（基因敲减组），并设置基因阴性对照组。采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测HK2细胞中目的基因的表达；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养液中炎症因子水平；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测细胞中凋亡关键蛋白的表达。结果:①生物信息学分析结果：两个数据集间有325个基因呈现相同的表达趋势，其中144个显著下调，181个显著上调，而分泌性白细胞蛋白酶抑制因子（SLPI）在两个数据集中表达差异的统计学意义均较大；进一步受试者工作特征曲线（ROC曲线）分析证实，GSE30718和GSE53773数据集中SLPI表达量对AKI的诊断效能均较大，AUC分别为0.83和0.92。故选择SLPI作为目的基因进行后续细胞验证实验。②细胞验证实验结果：RT-qPCR结果显示，LPS模型组细胞中SLPI表达较空白对照组显著升高（2 -ΔΔCT：1.80±0.14比1.00±0.11， P<0.01），变化趋势与生物信息学分析结果相符。进一步敲减SLPI基因分析显示，基因敲减组LPS-HK2细胞培养液中炎症因子水平较阴性对照组显著上调〔白细胞介素-6（IL-6，ng/L）：509.58±27.08比253.87±75.83，IL-1β（ng/L）：490.99±49.52比239.67±26.97，肿瘤坏死因子-α（TNF-α，ng/L）：755.22±48.66比502.06±10.92，均 P<0.01〕，说明SLPI可抑制LPS诱导的HK2细胞炎症反应；基因敲减组LPS-HK2细胞凋亡关键蛋白Bax、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）表达均较阴性对照组显著升高〔Bax蛋白（Bax/GAPDH）：1.38±0.12比1.00±0.10，caspase-3蛋白（caspase-3/GAPDH）：1.44±0.15比1.00±0.11，均 P<0.05〕，而Bcl-2表达显著降低（Bcl-2/GAPDH：0.83±0.08比1.00±0.05， P<0.05），说明SLPI可抑制细胞在炎症反应中的凋亡。 结论:SLPI能抑制LPS诱导的HK2细胞炎症反应和凋亡，可能参与肾小管细胞在脓毒症反应中的保护机制，成为脓毒症相关性AKI治疗的潜在靶点。

目的:探究核受体亚家族4 A组成员1（nuclear receptor subfamily 4 group A member 1， NR4A1）在缓解顺铂对近端肾小管上皮细胞毒性的作用及其分子机制。 方法:通过“Tabula-muris”单细胞转录组测序数据库分析肾脏组织各细胞亚群 NR4A1基因的表达。在近端肾小管上皮细胞HK-2细胞系及原代细胞中，通过慢病毒感染以过表达 NR4A1基因。采用细胞增殖与毒性检测试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）检测顺铂的细胞毒性。细胞用碘化丙啶（propidium iodide，PI）单染后通过流式细胞仪检测细胞的死亡比例。通过实时荧光定量PCR和Western印迹法检测细胞中 NR4A1和核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2， NRF2）基因的表达。通过检测丙二醛（malondialdehyde，MDA）和氧化型谷胱甘肽（oxidized glutathione，GSSG）以及脂质活性氧（reactive oxygen species，ROS）的含量分析细胞铁死亡程度。 结果:单细胞转录组数据分析的结果表明 NR4A1基因表达在肾脏组织的近端肾小管上皮细胞亚群中最低。50 μmol/L和100 μmol/L顺铂能够显著诱导近端肾小管上皮细胞MDA、GSSG和脂质ROS含量的上升（均 P<0.01），且顺铂浓度越高诱导MDA、GSSG和脂质ROS增加越多。相比对照HK-2细胞，过表达 NR4A1的HK-2细胞脂质ROS含量及铁离子含量显著较低（均 P<0.01），过表达 NR4A1抑制了顺铂对近端肾小管上皮细胞的毒性及其诱导的铁死亡。分子机制研究发现，在近端肾小管上皮细胞中，过表达 NR4A1上调了抗铁死亡基因 NRF2的表达（ P<0.01）。进一步单细胞转录组数据分析的结果表明，与 NR4A1在肾脏组织细胞亚群的表达状态相似， NRF2表达在近端肾小管上皮细胞中也最低。 结论:顺铂能够诱导近端肾小管上皮细胞发生铁死亡，且浓度越高越明显。 NR4A1通过上调近端肾小管上皮细胞 NRF2的表达抑制顺铂诱导的细胞铁死亡，从而缓解顺铂对细胞的毒性。

目的:探讨 miR-520c-3p对糖尿病肾脏病患者近端肾小管上皮细胞焦亡的影响及其分子机制。 方法:收集2019年6月至2020年12月在郑州大学第一附属医院就诊的糖尿病肾脏病患者（DKD组，4例）和糖耐量正常肾脏肿瘤手术者（正常对照组，4例）的肾脏组织。HE染色、过碘酸-希夫染色（PAS）和透射电镜观察肾脏组织病理学变化。取生长状态良好的人近端肾小管上皮（HK-2）细胞传代至培养板内，并分成如下8组：正常葡萄糖组（NG，5.6 mmol/L葡萄糖）、高糖组（HG，30.0 mmol/L葡萄糖）、抑制物组（正常葡萄糖+转染 miR-520c-3p抑制物）、抑制物对照组（正常葡萄糖+转染 miR-520c-3p抑制物阴性对照物）、模拟物组（高糖+转染 miR-520c-3p模拟物）、模拟物对照组（高糖+转染 miR-520c-3p模拟物阴性对照物）、模拟物+TXNIP共转染组（高糖+共转染 miR-520c-3p模拟物+TXNIP）、共转染阴性对照组（高糖+共转染 miR-520c-3p模拟物+TXNIP阴性对照物）。活细胞动态实时监测细胞活性，碘化丙啶（PI）染色检测细胞焦亡情况；免疫荧光染色、荧光原位杂交、实时定量PCR和Western blotting法检测 miR-520c-3p、硫氧还蛋白相互作用蛋白（TXNIP）和细胞焦亡分子NOD样受体蛋白3（NLRP3）、活化半胱氨酸蛋白酶-1（cl-caspase-1）、消皮素D（GSDMD）的mRNA和蛋白表达水平；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞上清液白细胞介素-1β（IL-1β）含量；双荧光素酶报告基因实验明确 miR-520c-3p和 TXNIP之间的相互作用。两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:与对照组相比，DKD组肾脏组织肾小管炎性细胞增多，伴随 miR-520c-3p表达水平下降， TXNIP表达升高（均 P<0.05）；肾小管特异性标志物水通道蛋白1（AQP1）与NLRP3和GSDMD焦亡蛋白共定位均增加。在HK-2细胞中，与NG组相比，HG组焦亡细胞增多，伴随 miR-520c-3p表达水平下降，TXNIP、NLRP3、cl-caspase-1、GSDMD的蛋白水平和细胞上清液IL-1β浓度升高（均 P<0.05）；与模拟物对照组相比，模拟物组中 miR-520c-3p表达量更高， TXNIP mRNA表达量更低，TXNIP、NLRP3、cl-caspase-1、GSDMD的蛋白水平和IL-1β浓度更低（均 P<0.01），TXNIP和NLRP3共表达定位减少（ P<0.05）；与抑制物对照组相比，抑制物组中 miR-520c-3p表达量更低， TXNIP mRNA表达量更高，TXNIP、NLRP3、cl-caspase-1、GSDMD的蛋白水平和IL-1β浓度更高（均 P<0.01）。与共转染阴性对照组相比，模拟物+TXNIP共转染组的TXNIP和NLRP3共表达定位增加，TXNIP、NLRP3、cl-caspase-1、GSDMD的蛋白水平更高（ P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验表明， TXNIP是 miR-520c-3p直接作用靶点， miR-520c-3p通过靶向调节TXNIP表达，抑制高糖诱导的细胞焦亡。 结论:miR-520c-3p通过抑制TXNIP/NLRP3途径减轻高糖诱导的近端肾小管上皮细胞焦亡。

目的:报道一例罕见的阵发性睡眠性血红蛋白尿（paroxysmal nocturnal hemoglobinuria，PNH）并发慢性肾小管间质肾病病例。结合文献复习，探讨疾病临床、影像学及病理改变特征和诊疗思路。方法:收集和报道患者临床资料、磁共振成像（MRI）及肾脏病理检查结果、治疗措施和效果。通过系统回顾相关文献，总结和探讨PNH并发慢性肾小管间质肾病的临床表现特征及其发病机制。结果:患者被诊断PNH 30余年，外周血PNH克隆阳性，尿比重1.012，尿pH值6.0~7.0，尿蛋白（+），尿糖（3+），尿红细胞（2+），血肌酐259 μmol/L，血乳酸脱氢酶800 U/L。MRI示T1及T2加权像双侧肾皮质信号降低。肾脏病理检查示慢性小管间质病变，普鲁士蓝染色及电镜检查示近端肾小管上皮细胞内有大量含铁血黄素沉积。经小剂量泼尼松控制溶血发作及对症治疗，患者肾功能长期稳定。结论:PNH合并慢性肾小管间质肾病起病隐匿且易被忽视。MRI和肾组织病理检查有助于明确诊断。早期确诊、早期干预有利于改善患者预后。

目的:探讨脂肪量和肥胖相关蛋白(FTO)在人近端肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤(IRI)中的作用。方法:以HK-2细胞作为研究对象，用抗霉素A、A23187、2-脱氧葡萄糖构建HK-2细胞IRI模型。将细胞分为对照组及缺血再灌注组(I/R组)。实时荧光PCR(qPCR)法及Western blot法分别检测2组细胞FTO、B细胞淋巴瘤/白血病2相关X基因(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)、剪切型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved Caspase-3)的mRNA及蛋白表达水平。流式细胞术检测细胞凋亡。比色法检测mRNA N 6-甲基腺苷(m 6A)甲基化水平。 结果:1．与对照组比较，I/R组细胞FTO mRNA(0.15±0.05比1.00±0.23)、Bcl-2 mRNA(0.14±0.07比1.02±0.25)相对表达量降低，Bax(3.10±0.35比1.00±0.13)、cleaved Caspase-3 mRNA(4.21±0.56比1.00±0.09)相对表达量增高，差异均有统计学意义( t＝6.28、5.84、-9.83、-9.84，均 P<0.01)。2.与对照组比较，I/R组FTO蛋白(0.69±0.14比1.37±0.02)、Bcl-2蛋白(0.50±0.12比1.25±0.21)降低，Bax蛋白(1.04±0.08比0.57±0.06)、cleaved Caspase-3蛋白(0.99±0.05比0.36±0.07)相关表达量增高，差异均有统计学意义( t＝8.10、5.49、-8.22、-12.09，均 P<0.05)。3.与对照组比较，I/R组HK-2细胞凋亡率[(61.70±1.01)%比(0.16±0.10)%]增高，差异有统计学意义( t＝63.80， P<0.01)。4.与对照组比较，I/R组总mRNA m 6A水平在总RNA中的百分比[(3.13±0.21)%比(1.10±0.26)%]增高，差异有统计学意义( t＝-10.61， P<0.01)。 结论:FTO介导的RNA m 6A修饰可能通过调控HK-2细胞凋亡影响肾脏IRI。

目的:观察微小RNA(miR)-7850在肾癌组织中的表达，探讨miR-7850对肾癌细胞增殖和迁移的影响以及对丝氨酸蛋白酶抑制剂因子B3(SERPINB3)基因表达的调控作用。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾癌组织和肾癌细胞系中miR-7850的表达。选择miR-7850表达最低的肾癌细胞系，采用Lipofectamine 2000转染试剂分别将阴性对照序列(miR-NC)和miR-7850模拟物转入肾癌细胞，定义为miR-NC组和miR-7850组。qRT-PCR检测转染后肾癌细胞内miR-7850的表达。采用CCK-8法和Transwell实验检测转染后细胞增殖和迁移能力。采用生物信息学技术预测和双荧光素酶报告基因实验验证miR-7850的靶基因。qRT-PCR和Western blot检测转染后肾癌细胞内SERPINB3的表达。结果:与癌旁组织(5.95±0.44)相比，miR-7850在肾癌组织(1.19±0.33)的表达较低( P<0.01)。与永生化近端肾小管上皮细胞(1.01±0.07)相比，miR-7850在肾癌细胞系的表达较低( P<0.05)，在A498细胞中(0.13±0.01)表达最低( P<0.01)。miR-7850组细胞内miR-7850的表达(7.46±0.93)较miR-NC组(1.01±0.08)明显增加( P<0.01)，表明转染成功。与miR-NC组相比，miR-7850组细胞增殖能力明显降低( P<0.05)。miR-NC组和miR-7850组迁移细胞数量分别为(139.50±12.31)个和(75.09±16.05)个，miR-7850组细胞迁移能力明显下降( P<0.01)。生物信息学技术显示miR-7850的靶基因是SERPINB3。双荧光素酶报告基因实验证实miR-7850可靶向结合SERPINB3基因( P<0.05)。qRT-PCR和Western blot检测显示，与miR-NC组相比，miR-7850组细胞中SERPINB3的表达明显降低( P<0.05)，CDK4、Cyclin D1、Snail、Vimentin蛋白表达均降低( P<0.05)。 结论:miR-7850在肾癌组织和细胞系中低表达，miR-7850可抑制肾癌A498细胞的增殖和迁移能力，可能与其抑制SERPINB3基因的表达有关。