目的:探讨慢性肾衰竭（chronic renal failure，CRF）幼鼠胫骨生长板软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路对生长板发育的影响。方法:雄性4周龄SD幼鼠40只，被随机分为对照组（蒸馏水灌胃， n=20）和CRF组（腺嘌呤150 mg·kg -1·d -1灌胃， n=20），连续灌胃6周后处死全部幼鼠，比较两组幼鼠胫骨长度。micro-CT扫描仪测量胫骨近端生长板宽度，组织切片番红固绿染色检测胫骨生长板宽度。提取幼鼠胫骨生长板软骨细胞进行体外培养至第3代，免疫组织化学染色法检测软骨细胞Ⅱ型胶原（Collagen Ⅱ）、基质金属蛋白酶13（matrix metalloproteinase-13，MMP-13）及β联蛋白（β-catenin）的表达。Western印迹法检测软骨细胞CollagenⅡ、MMP-13、β-catenin蛋白表达水平。 结果:与对照组相比，CRF组幼鼠胫骨长度较短[（27.32±5.81）mm比（35.43±3.61）mm， t=5.226， P<0.001]，生长板宽度较窄[（0.72±0.22）mm比（1.13±0.27）mm， t=5.096， P<0.001]。软骨组织番红固绿染色结果显示，CRF组幼鼠生长板相对宽度较对照组窄（ t=6.744， P<0.001）。免疫组化及Western印迹结果示，与对照组比较，CRF组软骨细胞CollagenⅡ蛋白表达减少（ t=8.212， P<0.001），MMP-13（ t=13.091， P<0.001）和β-catenin（ t=7.534， P<0.001）蛋白表达增多。 结论:CRF幼鼠胫骨生长板软骨细胞Wnt/β-catenin通路相关蛋白呈高表达状态，是软骨细胞加速退变分化、生长板出现闭合趋势的原因之一。

目的 观察肾衰Ⅱ号方颗粒对原发性肾小球肾炎(PGN)引起的慢性肾脏病(CKD)3～4期脾肾气虚证患者的临床疗效及肾脏微循环(RMC)的影响.方法 采用随机、双盲的临床试验设计,将70例CKD 3～4期患者分为治疗组和对照组各35例.对照组予CKD一体化治疗联合安慰剂颗粒,治疗组予CKD一体化治疗联合肾衰Ⅱ号方颗粒.观察2组临床疗效,比较2组治疗前后中医症状总分、肾功能指标、RMC指标.监测2组安全性指标.结果 治疗组总有效率为82.86%(29/35),对照组为54.29%(19/35),2组比较差异有统计学意义(P<0.05).与本组治疗前比较,2组治疗后各项中医症状评分均降低(P<0.05,P<0.01);2组治疗后比较,治疗组5项脾肾气虚证症状评分及总分均低于对照组(P<0.05).与本组治疗前比较,治疗组治疗后肾皮质、肾髓质血流均值均升高(P<0.05,P<0.01);2组治疗后比较,治疗组肾皮质、肾髓质血流均值均高于对照组(P<0.05,P<0.01).与本组治疗前比较,治疗组治疗后血清一氧化氮(NO)含量升高(P<0.01),内皮素-1(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)含量下降(P<0.01);2组治疗后比较,治疗组NO含量高于对照组(P<0.05),ET-1、VEGF含量低于对照组(P<0.01).与本组治疗前比较,治疗组治疗后血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白定量(24 hUP)下降,估算肾小球滤过率(eGFR)上升(P<0.05,P<0.01);2组治疗后比较,治疗组SCr、BUN、24 hUP低于对照组,eGFR高于对照组(P<0.01).与本组治疗前比较及治疗后组间比较,2组血清尿酸比较差异无统计学意义(P>0.05).2组安全性指标无异常变化(P>0.05).结论 肾衰Ⅱ号方颗粒联合西医一体化治疗可有效改善CKD 3～4期脾肾气虚证患者临床症状及肾功能相关指标,增加肾血流量、改善RMC障碍,提高临床疗效.

目的 观察肾衰Ⅱ号方颗粒联合西医一体化方案治疗原发性慢性肾脏病(CKD)3～4期脾肾气虚证、湿浊瘀阻证患者临床疗效及对血清自噬相关蛋白的影响.方法 采用随机数字表法将88例患者分为治疗组、对照组各44例.2组均予西医一体化方案治疗,治疗组在此基础上予肾衰Ⅱ号方颗粒,对照组予肾衰Ⅱ号方免煎安慰剂,每次1袋,每日2次,口服.2组均连续治疗24周.观察2组临床疗效,比较2组治疗前后中医症状评分、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、血钙(Ca2+)、血磷(P3-)、甲状旁腺激素(PTH)、24 h尿蛋白定量(24 UPro)水平;ELISA法检测2组治疗前后血清自噬相关蛋白Beclin-1、Atg7、LC3-Ⅱ水平;监测2组安全性指标.结果 治疗过程中治疗组、对照组各脱落4例.治疗组总有效率为55%(22/40),对照组为30%(12/40),治疗组疗效优于对照组(P<0.01).与本组治疗前比较,治疗组治疗后各项中医症状评分降低(P<0.01),Scr、BUN、UA、P3-、PTH和24 UPro水平下降(P<0.05,P<0.01),肾小球滤过率(eGFR)上升(P<0.01),对照组治疗后Scr上升(P<0.05),eGFR下降(P<0.01);2组治疗后比较,治疗组各项中医症状评分、Scr、BUN、UA、P3-、PTH和24 UPro水平低于对照组(P<0.01,P<0.05),eGFR高于对照组(P<0.01).与本组治疗前比较,治疗组治疗后血清Beclin-1、Atg7、LC3-Ⅱ水平上升(P<0.01,P<0.05),对照组治疗后血清Beclin-1水平下降(P<0.01);2组治疗后比较,治疗组上述指标改善均优于对照组(P<0.01,P<0.05).相关性分析显示,Beclin-1、Atg7、LC3-Ⅱ与Scr、BUN呈负相关(P<0.05),与eGFR呈正相关(P<0.05).2组治疗过程中均未见明显不良反应.结论 肾衰Ⅱ号方颗粒联合西医一体化方案治疗原发性CKD 3～4期脾肾气虚证、湿浊瘀阻证患者疗效显著,可有效减轻临床症状,改善肾功能,延缓CKD进展,其作用机制可能与改善肾脏自噬水平有关.

目的 运用"均匀设计法"从"肾衰Ⅱ号方"中筛选抗肾纤维化中药有效单体组方(淫羊藿苷合迷迭香酸配伍,简称IR方),并进行验证.方法 采用5/6(Ablation and infarction,A/I)慢性肾衰大鼠模型,将肾衰Ⅱ号方中已知的5种抗肾纤维化有效单体(淫羊藿苷、迷迭香酸、阿魏酸、苦杏仁苷、大黄素)作为研究对象,按照均匀设计法"5因素8水平"分组,共设8种配比组方.造模后4周,组1～组8给予相应配比的组方药液,假手术组和模型组给予生理盐水,连续干预8周.末次给药后,检测各组大鼠血清肌酐(Serum creatinine,Scr)水平,苏木素-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)和马松(Masson)染色观察肾组织病理形态,Western Blot法检测纤维化标志蛋白Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ,Col-Ⅰ)、纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)、结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)表达.以各药物组大鼠Scr为筛选指标,通过多元逐步回归分析筛选中药单体成分组方并确定特定配比.再用5/6(A/I)大鼠模型,以氯沙坦钾、母方"肾衰Ⅱ号方"和淫羊藿苷(20 mg·kg-1·d-1)作为对照,有效成分组方(淫羊藿苷20 mg·kg-1·d-1+迷迭香酸2.1 mg·kg-1· d-1)作为实验药物,连续干预8周.通过各组大鼠Scr、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、病理染色(HE和Masson)和FN、Col-Ⅰ蛋白表达比较各组大鼠肾功能和肾纤维化程度.体外构建转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导肾小管细胞(NRK-52E)损伤和肾成纤维细胞(NRK-49F)活化模型,以有效成分组方和相应单一成分作为干预药物,Western Blot法检测FN、Col-Ⅰ、CTGF蛋白表达.结果 筛选实验结果提示,组1～组8均可不同程度降低5/6(A/I)大鼠Scr水平,结合病理染色和Western Blot分析,组8效果最优.经过多元逐步回归分析,得到方程为:(y)=88.381-0.539X1-0.473X2+0.01X1X2(X1淫羊藿苷,X2迷迭香酸),提示淫羊藿苷和迷迭香酸配伍为最佳,量比为9.6∶1.验证实验结果提示,IR方可以明显改善5/6(A/I)大鼠肾功能,减轻肾小管间质损伤和纤维化,抑制FN和Col-Ⅰ蛋白表达,其表现的肾保护效应与肾衰Ⅱ号方相当,并优于西药对照.体外实验发现,IR方可以明显抑制TGF-β1刺激的NRK-52E细胞和NRK-49F细胞FN、Col-Ⅰ、CTGF蛋白表达,并优于淫羊藿苷或迷迭香酸单独干预.结论 基于均匀设计法筛选的有效单体IR方具有改善慢性肾衰大鼠肾功能和抗肾纤维化的效应.

目的:观察益气养血祛瘀泄浊法对5/6(A/I)慢性肾衰竭(CRF)模型大鼠蛋白尿及残余肾功能的保护作用.方法:采用经典的5/6 (A/I)肾切除CRF模型法制作CRF动物模型,随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、西药组(氯沙坦钾C组)、中药组(肾衰Ⅱ号方D组),给予相应干预措施,疗程60d.于治疗前后分别检测24 h尿蛋白定量(24 h Up)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、收缩压(SMP)、舒张压(DMP)等指标,计算内生肌酐清除率(Ccr).结果:造模后,与A组相比,B组、C组、D组24hUp升高;Scr、BUN、UA、SMP、DMP升高(P＜0.05),Ccr、Hb、RBC降低(P＜0.05),表示造模成功.干预后,D组大鼠精神状态、毛发色泽、活动度等明显优于其他几组;与B组比较,C组、D组24hUp降低(P＜0.05);两组Scr、BUN降低(P＜0.05),Ccr升高(P＜0.05);C组UA显著降低(P＜0.01),D组Hb、RBC水平升高.结论:肾衰Ⅱ号方可保护残余肾功能,降低血清肌酐、尿素氮、尿酸水平,提高肌酐清除率,改善贫血,延缓肾衰竭;在降低尿蛋白排泄方面与西药组疗效相当,但肾衰Ⅱ号方在改善大鼠精神、活动状态等生活质量方面优于西药组.

目的 观察肾衰Ⅱ号方对慢性肾功能衰竭大鼠肾组织NF-κB/TNF-α信号通路表达的影响,探讨其改善慢性肾功能衰竭微炎症状态、延缓慢性肾脏病进展的作用机制.方法 采用5/6(ablation/infarction,A/I)肾切除法制作慢性肾功能衰竭动物模型.实验大鼠随机分为模型组、西药对照组、肾衰Ⅱ号方组,每组14只,另设假手术组14只,各给药组给予相应药物.测定大鼠血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、内生肌酐清除率(CCr),采用Western blot测定磷酸化核因子-κB(p-NF-κB)p65、NF-κB p65、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达,RT-PCR测定TNF-αmRNA表达.结果与假手术组比较,模型组SCr、BUN水平明显升高,CCr明显降低(P<0.01),左肾质量/体质量明显增加(P<0.05),肾脏皮质、髓质p-NF-κB p65、NF-κB p65及TNF-α表达均明显升高(P<0.01);与模型组比较,肾衰Ⅱ号方组、西药对照组SCr、BUN水平明显降低(P<0.05,P<0.01),CCr明显升高(P<0.01),左肾质量/体质量明显降低(P<0.05),肾衰Ⅱ号方组在改善肾功能方面优于西药对照组(P<0.05);肾衰Ⅱ号方组、西药对照组肾脏皮质、髓质p-NF-κB p65、NF-κB p65及TNF-α表达均明显降低(P<0.01),肾衰Ⅱ号方组下调NF-κB/TNF-α信号通路表达作用优于西药对照组(P<0.01).结论 肾衰Ⅱ号方可能通过下调NF-κB/TNF-α信号通路的表达,改善慢性肾功能衰竭微炎症状态,减轻肾间质纤维化,达到延缓肾功能减退的作用.

目的 观察肾衰Ⅱ号方联合西药对原发性慢性肾脏病 (CKD) 3、4期脾肾气虚、湿浊瘀阻型患者的疗效.方法 原发性CKD 3、4期脾肾气虚、湿浊瘀阻型患者88例随机分为治疗组和对照组各44例.两组患者均给予西医基础治疗, 治疗组加用肾衰Ⅱ号方, 对照组加用尿毒清颗粒, 治疗6个月.治疗前后检测血肌酐 (SCr) 、血尿素氮 (BUN) 、血尿酸 (UA) 、24小时尿蛋白定量 (24h Upro) 、血红蛋白 (Hb), 肾脏超声造影检测右肾髓质、皮质到达时间 (AT) 、达峰时间 (PT) 、峰值强度 (PI), 上升支斜率 (A) 、曲线下面积 (AUC), 观察中医临床症状, 治疗后评价中医症状疗效和临床疗效.结果 治疗组临床疗效总有效率为82.92％, 高于对照组的60.00％ (P＜0.05).治疗组气短懒言、食少纳呆、脘腹胀满、肢体麻木、口中黏腻、倦怠乏力、腰膝酸软、恶心呕吐、腰痛、面色晦暗总有效率高于对照组 (P＜0.05或P＜0.01).与本组治疗前比较, 治疗组治疗2、4、6个月SCr、BUN、UA、24h UPro均明显下降, 2、4、6个月GFR及治疗4、6个月Hb均明显升高 (P＜0.05或P＜0.01);对照组治疗6个月SCr、24h UPro均明显下降, 治疗4、6个月GFR均明显升高 (P＜0.05或P＜0.01), 且治疗组治疗6个月BUN明显低于对照组, Hb明显高于对照组 (P＜0.05).与治疗前比较, 治疗组治疗后皮质和髓质肾血流灌注定量参数AT、PT、A、AUC降低, PI升高 (P＜0.01), 对照组髓质PT、AUC降低 (P＜0.05);且治疗组治疗后皮质AT、PT、A, 髓质AT、PT小于对照组 (P＜0.05或P＜0.01).结论 肾衰Ⅱ号方联合西药治疗原发性CKD 3、4期脾肾气虚、湿浊瘀阻型患者临床疗效确切, 能改善中医症状, 减轻24小时蛋白尿定量, 改善贫血, 增加肾血流量.

目的:观察慢性肾衰患者虚兼湿浊证的舌象特征.方法:应用中医舌、面诊检测仪(型号:DKF-Ⅱ)采集慢性肾衰患者的舌诊信息,分析并比较慢性肾衰患者虚兼湿浊证与其余各组舌象客观化参数的差异.结果:(1)舌苔参数:慢性肾衰患者虚兼湿浊证与正常组比较,苔色R值、B值明显降低(P＜0.05);与纯虚证组比较,苔色R值、G值和B值都明显升高(P＜0.05).(2)舌体参数:慢性肾衰患者虚兼湿浊证与正常组比较,舌色R值、G值明显升高(P＜0.05),与虚兼其他证组(湿热、瘀血)比较,舌色G值明显升高(P＜0.05).结论:中医舌、面诊检测仪可以客观地描述慢性肾衰患者虚兼湿浊证的舌诊特征,舌诊客观化参数可作为临床判别慢性肾衰虚兼湿浊证的中医诊断参考依据之一.

目的 通过病例回顾性分析,观察肾宁Ⅱ号方治疗慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD) 2～5期对近、远期肾功能影响.方法 共198例患者纳入观察,治疗组124例(肾宁Ⅱ号方加基础治疗),对照组74例(基础治疗).观察治疗2周时2组患者肾功能、血尿酸及肝功能等实验室指标的变化,其中82例患者(治疗组59例、对照组23例)继续治疗并随访3个月,通过血肌酐倒数(1/Scr)随时间(月)直线回归斜率b值观察远期肾功能的变化趋势,并从理论上预测3年内进入终末期肾衰(end-stage renal failure,ESRD)患者的例数.结果 近期疗效,治疗组总有效率优于对照组(66.94％ vs 51.35％,P＜0.05),CKD 5期及非糖尿病肾病(non-diabetic kidney disease,NDKD)患者治疗组疗效优于对照组(67.44％ vs 39.13％,71.43％ vs 53.49％,P＜0.05).远期疗效,治疗组b值＞对照组,b值正值数＞对照组,预测治疗后3年内进入ESRD患者例数低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在常规治疗基础上,应用肾宁Ⅱ号方治疗CKD 2～5期患者有助于改善NDKD患者近期肾功能,并能够延缓肾功能不全病情进展.

目的 观察肾衰Ⅱ号方对5/6(ablation/infarction,A/I)肾切除慢性肾衰竭(CRF)大鼠残余肾组织凋亡相关蛋白表达的影响.方法 SD雄性大鼠采用5/6(A/I)肾切除术制备CRF大鼠模型,随机分为模型组、肾衰Ⅱ号方组、西药组,每组15只,另取15只大鼠作为假手术组.各组给予相应干预,60 d后Western blot检测凋亡相关蛋白p53、Bax、Cleaved-parp的表达,免疫组化检测p53、Bax蛋白的表达,透射电镜观察肾组织超微结构.结果 与假手术组比较,模型组大鼠肾皮质和肾髓质p53、Bax、Cleaved-parp蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,各给药组大鼠肾皮质和肾髓质p53、Bax、Cleaved-parp蛋白表达明显降低(P<0.05).免疫组化结果显示,p53、Bax蛋白表达主要位于肾小管,模型组大鼠炎性细胞浸润明显,蛋白表达较假手术组明显升高,各给药组较模型组炎性细胞浸润减轻,p53和Bax蛋白表达降低.透射电镜结果显示,假手术组大鼠肾皮质和肾髓质未见细胞凋亡,超微结构正常,模型组大鼠核固缩,细胞凋亡出现,超微结构紊乱,各给药组较模型组超微结构改善,少见细胞凋亡发生.结论 肾衰Ⅱ号方可抑制5/6(A/I)肾切除CRF大鼠细胞凋亡,其作用机制可能与下调p53、Bax、Cleaved-parp蛋白表达相关.