目的:评价肿瘤坏死因子-α诱导蛋白家族8-样蛋白2(TIPE2)在脓毒症小鼠急性肺损伤内源性保护机制中的作用及其与髓样细胞表达触发受体-1(TREM-1)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号通路的关系。方法:雄性野生型小鼠和TIPE2基因敲除小鼠各20只，分别采用随机数字表法分为野生型假手术组(WT-sham组)、野生型急性肺损伤组(WT-ALI组)、TIPE2基因敲除型假手术组(KO-sham组)及TIPE2基因敲除急性肺损伤组(KO-ALI组)，每组10只。采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症小鼠急性肺损伤模型。术后24 h时腹主动脉釆血样后处死小鼠取肺组织，光镜下观察肺组织病理学结果并行肺损伤评分，确定湿重/干重(W/D)比值，检测髓过氧化物酶(MPO)活性，采用Western blot法检测TIPE2、TREM-1、NLRP3、caspase-1和GSDMD的表达，采用ELISA法检测血清IL-1β和IL-18的浓度。结果:与WT-sham组比较，WT-ALI组和KO-ALI组肺损伤评分、W/D比值、MPO活性、肺组织TREM-1、NLRP3、caspase-1、GSDMD表达水平及血清IL-1β和IL-18浓度升高，TIPE2表达下调( P<0.05)；与WT-ALI组比较，KO-ALI组肺损伤评分、W/D比值、MPO活性、TREM-1、NLRP3、caspase-1、GSDMD表达水平及血清IL-1β和IL-18的浓度升高，TIPE2表达下调( P<0.05)。 结论:TIPE2参与了脓毒症小鼠急性肺损伤的内源性保护机制，与抑制TREM-1/NLRP3炎症小体信号通路激活有关。

目的:评价肿瘤坏死因子α诱导蛋白家族8样蛋白2(TIPE2)在小鼠脓毒症心肌损伤中的作用及其与丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)/糖原合酶激酶3β(GSK-3β)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的关系。方法:选择16只雄性野生型C57BL/6N小鼠和16只雄性TIPE2基因敲除C57BL/6N小鼠，6~8周龄，体质量20~25 g，按照随机数字表法分为野生型假手术组(WT-Sham组)、野生型CLP组(WT-CLP组)、TIPE2基因敲除型假手术组(WT-Sham组)和TIPE2基因敲除CLP组(KO-CLP组)，每组8只。采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症小鼠急性心肌损伤模型。术后24 h时采集下腔静脉血标本，采用ELISA法检测血清心肌cTnI浓度，然后处死小鼠，取心肌组织，HE染色观察病理学结果，采用q-PCR法检测TNF-α、IL-1β及IL-6的mRNA表达，Western blot法检测TIPE2、磷酸化AKT(p-AKT)、磷酸化(p-GSK-3β)及β-catenin表达。结果:与相应Sham组比较，相应CLP组血清cTnI浓度升高，心肌组织TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达、p-AKT、p-GSK-3β和β-catenin表达上调，TIPE2表达下调( P<0.05)，发生心肌病理学损伤；与WT-CLP组比较，KO-CLP组血清cTnI浓度升高，心肌组织TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达、p-AKT、p-GSK-3β和β-catenin表达上调，TIPE2表达下调( P<0.05)，心肌病理学损伤加重。 结论:TIPE2可能通过抑制AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路减轻脓毒症小鼠心肌损伤。

目的:探讨严重创伤后小鼠腹腔巨噬细胞（PM）中芳香烃受体（AhR）的表达规律并分析增强创伤后PM的AhR表达对炎症因子水平和杀菌能力的影响。方法:采用实验研究方法。取40只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠（小鼠周龄、性别、品系下同），按随机数字表法（分组方法下同）分为对照组、创伤后2 h组、创伤后6 h组、创伤后12 h组，每组10只。将后3组小鼠构建骨折+失血的严重创伤模型，对照组小鼠不做处理。分别在未创伤和创伤后2、6、12 h时，提取对照组、创伤后2 h组、创伤后6 h组、创伤后12 h组小鼠原代PM（提取细胞下同），分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量反转录PCR法检测AhR的蛋白和mRNA表达，采用转录组测序分析AhR信号通路相关分子的基因表达。取20只小鼠分为对照组、创伤后6 h组，每组10只，提取PM后，采用免疫沉淀法检测AhR泛素化水平。取12只小鼠，分为单纯二甲基亚砜（DMSO）组、创伤后6 h+DMSO组、单纯MG-132组、创伤后6 h+MG-132组，每组3只，并行相应处理后，提取PM，采用蛋白质印迹法检测AhR蛋白的表达。取20只小鼠构建创伤后6 h模型并提取PM，分为空载腺病毒（Ad-NC）组和AhR过表达腺病毒（Ad-AhR）组，部分细胞转染相应腺病毒36 h后，采用蛋白质印迹法检测AhR的蛋白表达；将剩余Ad-NC组细胞分为单纯Ad-NC组、Ad-NC+内毒素/脂多糖（LPS）组，将剩余Ad-AhR组细胞分为单纯Ad-AhR组和Ad-AhR+LPS组，并行相应处理12 h后，采用酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达（样本数为6）。取20只小鼠提取PM并分为对照+Ad-NC组、创伤后6 h+Ad-NC组、对照+Ad-AhR组、创伤后6 h+Ad-AhR组，并行相应处理后，采用平板涂布法检测细胞内载菌量（样本数为6）。对数据行单因素方差分析、LSD检验、析因设计方差分析、独立样本 t检验。 结果:与对照组（1.16±0.28）比较，创伤后2 h组（0.59±0.14）、创伤后6 h组（0.72±0.16）、创伤后12 h组（0.71±0.17）PM中AhR的蛋白表达水平均明显降低（ P<0.05）。对照组、创伤后2 h组、创伤后6 h组、创伤后12 h组PM中AhR的mRNA表达量组间总体比较，差异无统计学意义（ P>0.05）。AhR信号通路相关分子包括 AhR、AhR抑制因子、细胞色素P450家族成员1b1、细胞色素P450家族成员11a1 、热休克蛋白90、芳香烃受体-相互作用蛋白、热休克蛋白70相互作用蛋白。除创伤后2 h组PM的热休克蛋白90表达水平较对照组高，其他分子的表达水平在创伤后变化不明显。与对照组比较，创伤后6 h组PM中AhR泛素化水平升高。与单纯DMSO组比较，创伤后6 h+DMSO组PM中AhR的蛋白表达量下降，单纯MG-132组PM中AhR的蛋白表达量无明显变化。与创伤后6 h+DMSO组比较，创伤后6 h+MG-132组PM中AhR的蛋白表达量上调。转染36 h，与Ad-NC组比较，Ad-AhR组PM中AhR的蛋白表达水平明显升高。处理12 h，与Ad-NC+LPS组比较，Ad-AhR+LPS组PM上清液中IL-6、TNF-α的表达水平均明显降低（ t值分别为4.80、3.82， P<0.05）。对照+Ad-NC组、创伤后6 h+Ad-NC组、对照+Ad-AhR组、创伤后6 h+Ad-AhR组1×10 6个PM的胞内载菌量分别为（3.0±1.8）、（41.8±10.2）、（1.8±1.2）、（24.2±6.3）集落形成单位。与创伤后6 h+Ad-NC组比较，创伤后6 h+Ad-AhR组PM的胞内载菌量明显减少（ t=3.61， P<0.05）。 结论:严重创伤后小鼠PM中AhR发生泛素化降解导致其蛋白表达降低，增强创伤后巨噬细胞AhR的表达可降低LPS诱导的炎症因子IL-6和TNF-α的表达，且提升创伤后巨噬细胞的杀菌能力。

目的:评价肿瘤坏死因子α诱导蛋白家族8样蛋白2(TIPE2)在小鼠内毒素性急性肺损伤(ALI)中的作用。方法:SPF级健康成年雄性BALB/c小鼠40只，6～8周龄，体重20～25 g，采用随机数字表法分为4组( n＝10)：空载质粒组(VP组)、空载质粒组+ALI组(VP+ALI组)、腺相关病毒过表达TIPE2组(T组)和腺相关病毒过表达TIPE2组+ALI组(T+ALI组)。VP组和VP+ALI组气管内注射空载腺相关病毒，T组和T+ALI组气管内给予携带TIPE2干扰序列的腺相关病毒，3周后制备小鼠内毒素性ALI模型。VP组和T组气管内注射等容量PBS，VP+ALI组和T+ALI组气管内注射LPS 5 mg/kg。各组于注射LPS后24 h时采集腹主动脉血样，行血气分析并计算氧合指数(OI)，采用ELISA法检测血清TNF-α浓度，随后处死小鼠取肺组织，HE染色观察病理学结果并行肺损伤评分，确定肺湿重/干重(W/D)比值，测定髓过氧化物酶(MPO)活性，采用Western blot法检测TIPE2、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)和NF-κB的表达。 结果:与VP组比较，VP+ALI组肺损伤评分、W/D比值、MPO活性和血清TNF-α浓度升高，PaO 2和OI降低，肺组织TIPE2表达下调，p-JNK和NF-κB表达上调( P<0.05)，T组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与VP+ALI组比较，T+ALI组肺损伤评分、W/D比值、MPO活性和血清TNF-α浓度降低，PaO 2和OI升高，肺组织TIPE2表达上调，p-JNK和NF-κB表达下调( P<0.05)。 结论:TIPE2表达下调参与了小鼠内毒素性ALI的过程。

目的:评价肿瘤坏死因子α诱导蛋白家族8-样蛋白2(TIPE2)在脓毒症小鼠急性肺损伤内源性保护机制中的作用及其与转化生长因子-β激活的蛋白激酶(TAK1)/p38-丝裂原活化的磷酸激酶(p38 MAPK)/NF-κB信号通路的关系。方法:雄性野生型小鼠和TIPE2基因敲除小鼠各16只，6~8周龄，体重20~25 g，采用随机数字表法分别分为野生型假手术组(WT-sham组)、野生型ALI组(WT-ALI组)、TIPE2基因敲除型假手术组(KO-sham组)和TIPE2基因敲除急性肺损伤组(KO-ALI组)，每组8只。采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症小鼠急性肺损伤模型。于术后24 h时处死小鼠并留取左侧颈总动脉血标本和肺组织标本。HE染色观察肺组织病理结果并进行肺损伤评分；采集左侧颈总动脉血进行血气分析并计算氧合指数(OI)；检测每组小鼠肺泡灌洗液中性粒细胞(PMN)计数；采用Western blot法检测肺组织TIPE2、p-TAK1、p-p38 MAPK和p-NF-κB p65的表达；ELISA法检测血清IL-1β和IL-6的浓度。结果:与WT-sham组比较，WT-ALI组和KO-ALI组小鼠肺损伤评分、PMN计数、肺组织p-TAK1、p-p38 MAPK和p-NF-κB p65表达水平和血清IL-1β和IL-6浓度升高，PaO 2、OI和肺组织TIPE2表达水平降低( P<0.05)；与WT-ALI组比较，KO-ALI组小鼠肺损伤评分、PMN计数、肺组织p-TAK1、p-p38 MAPK和p-NF-κB p65表达水平和血清IL-1β和IL-6浓度升高，PaO 2、OI和肺组织TIPE2表达水平降低( P<0.05)。 结论:TIPE2参与了脓毒症小鼠急性肺损伤的内源性保护机制，与抑制TAK1/p38 MAPK/NF-κB信号通路激活有关。

目的 探究程序性细胞死亡因子4(PDCD4)通过含NOD样受体家族Pyrin域蛋白(NLRP)3/NL-RP6信号通路活性对视网膜缺血再灌注(RIR)损伤后神经炎症反应的抑制作用及机制.方法 选取50只SD大鼠作为研究对象,根据不同处理方式,分为Sham组(空白对照组)、RIR模型组、MCC950组(NLRP3/NLRP6抑制组)、si-PDCD4 组(PDCD4 沉默组)、si-PDCD4+MCC950 组(PDCD4 沉默+NLRP3/NLRP6 抑制组),每组10只大鼠.除去空白对照组大鼠外,剩余大鼠均构建RIR损伤模型,并进行相应处理;Western-blot检测视网膜组织内PDCD4、NLRP3、NLRP6、天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、抗坏血酸过氧化物酶(ASC)表达水平;苏木精-伊红(HE)染色分析视网膜组织病理变化;终端尿苷酸核苷酸末端标记法检测视网膜组织细胞凋亡能力;酶联免疫吸附试验检测大鼠眼球血、视网膜组织内炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-18、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;Western-blot检测视网膜组织内细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3表达水平.结果 与 Sham 组比较,RIR 模型组 PDCD4、NLRP3、NLRP6、Caspase-1、ASC、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平及细胞凋亡指数(AI)均升高,Bcl-2表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与RIR模型组比较,MCC950组、si-PDCD4 组大鼠 NLRP3、NLRP6、Caspase-1、ASC、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平及AI均 降低,Bcl-2 表达水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与si-PDCD4组及 MCC950组比较,si-PDCD4+MCC950组PDCD4、NLRP3、NLRP6、Caspase-1、ASC、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α 水平及 AI 进一步降低,Bcl-2 表达水平进一步升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PDCD4沉默具有减轻RIR病理损伤,抑制视网膜细胞凋亡的作用,其分子机制可能与抑制NLRP3/NLRP6炎症小体诱导神经炎症反应有关.

目的 在体外探讨石蒜碱(LYC)对缺氧条件下心肌细胞损伤和心肌成纤维细胞活化与胶原合成的影响及其生物学机制.方法 分离SD乳鼠心肌细胞与心肌成纤维细胞;使用低氧条件诱导心肌细胞损伤,并将细胞分为 4 组:对照(Ctl)组、缺氧(Hyp)组、缺氧与LYC联合处理(Hyp+LYC)组、缺氧与含NLR家族Pyrin域蛋白(NLRP)3 炎症小体抑制剂MCC950 联合处理(Hyp+MCC950)组;Western印迹检测不同缺氧时间(1、2、4、8 h)对心肌细胞中NLRP3 蛋白表达的影响;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上述 4 组心肌细胞培养上清液中炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α与心肌细胞损伤标记分子乳酸脱氢酶(LDH)的含量;TUNEL染色检测各组心肌细胞的凋亡水平;Western印迹检测各组心肌细胞中NLRP3、凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)、活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved caspase)-1、cleaved IL-1β 和cleaved IL-18 与cleaved GSDMD蛋白表达水平;应用血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导心肌成纤维细胞纤维化,并将细胞同样分为4 组:对照(Control)组,Ang Ⅱ处理(Ang Ⅱ)组,联合使用Ang Ⅱ与LYC处理(Ang Ⅱ+LYC)组,联合使用Ang Ⅱ与MCC950 处理(Ang Ⅱ+MCC950)组;5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)染色与Transwell实验观察各组心肌成纤维细胞的增殖活力与迁移能力;细胞免疫荧光(IHC)染色检测各组心肌成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白(SMA)表达丰度;Western印迹检测心肌成纤维细胞中纤维化标志分子Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(Col Ⅲ)、α-SMA和转化生长因子(TGF)-β的蛋白表达水平.结果 低氧处理可显著刺激心肌细胞中NLRP3 蛋白表达(P<0.05,P<0.01),且处理 4 h时细胞中NLRP3 增加趋势最为显著(P<0.01);与Ctl组相比,Hyp组心肌细胞中 IL-1β、IL-18、TNF-α 与 LDH 浓度、TUNEL 阳性细胞率和 NLRP3、ASC 与cleaved caspase-1、cleaved IL-1β与leaved IL-18 及cleaved GSDMD蛋白表达水平均显著增加(P<0.05,P<0.01);与Hyp组相比,Hyp+LYC组与Hyp+MCC950 组上述检测指标均明显降低(P<0.05),后两组无明显差异(P>0.05);与Control组相比,Ang Ⅱ组、Ang Ⅱ+LYC与Ang Ⅱ+MCC950 组心肌成纤维细胞的EDU阳性率、迁移能力和细胞中α-SMA蛋白表达丰度及Col Ⅰ、Col Ⅲ、α-SMA和TGF-β蛋白表达水平均显著增加(P<0.05,P<0.01);较 Ang Ⅱ组相比,Ang Ⅱ+LYC 与 Ang Ⅱ+ MCC950 组成纤维细胞的上述检测指标均明显降低(P<0.05),后两组无明显差异(P>0.05).结论 LYC可能通过降低NL-RP3 炎症小体的激活在体外改善缺氧诱导的心肌损伤与炎症反应,并抑制心肌成纤维细胞的活化与促纤维介质的释放.

目的 研究单叶铁线莲总皂苷(TsCH)抑制滑膜细胞激活的作用及可能机制.方法 细胞实验:用不同浓度的TsCH预孵育滑膜细胞12 h后用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理.CCK-8和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期;Transwell检测细胞迁移;ELISA法检测细胞培养上清液中IL-1β和IL-18的水平;Western blot法检测NLRP3、caspase-1、MMP2和MMP9的表达.动物实验:建立胶原诱导的大鼠风湿性关节炎模型,TsCH灌胃处理4周后评价关节炎指数评分、足趾体积以及厚度;检测大鼠关节组织中IL-1β、IL-18、NLRP3和Caspase-1的表达.结果 细胞实验结果表明TsCH能抑制TNF-α诱导的滑膜细胞增殖以及迁移,同时抑制IL-1β、IL-18、NLRP3、Caspase-1、MMP2和MMP9蛋白表达水平的升高.动物实验结果表明TsCH能降低关节炎大鼠的关节炎指数评分、减小足趾容积和足趾厚度,以及降低关节组织中TNF-α、IL-18、IL-1β、NLRP3、Caspase-1的表达水平.结论 TsCH对类风湿关节炎有治疗作用,可抑制TNF-α诱导的滑膜细胞激活,其作用机制可能与其抑制NLRP3/caspase-1信号通路有关.

目的 探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白8家族样蛋白2(tumor necrosis factor-alpha-induced protein-8 like-2 protein,TIPE2)对肺炎支原体感染(mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)的负向调控作用及其机制.方法 选取MPP患儿142例,根据临床表现分为普通MPP组78例和难治性肺炎支原体肺炎(refractory mycoplasma pneumoniae pneumonia,RMPP)组64例.检测所有患儿外周血中TIPE2表达的变化,并与65例健康儿童外周血中TIPE2表达的变化进行对照.在细胞试验中检测感染肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)后TIPE2的水平.通过干扰实验研究其对MPP的调控.通过Western-blot实验研究其调控机制.结果 普通MPP组和RMPP组外周血单核细胞中TIPE2 mRNA表达水平低于对照组,RMPP组低于普通MPP组(P＜0.05).随着MP浓度增加,THP-1细胞分化成的巨噬细胞TIPE2 mRNA及其蛋白灰度值逐渐降低(P＜0..05).MP浓度与TIPE2 mRNA及其蛋白表达呈负相关(P＜0.05).感染MP后巨噬细胞分泌IL-6、TNF-α、IL-1β的量明显升高,MP浓度为50 CFU/cell浓度时,细胞因子IL-6、TNF-α、IL-1β分泌量最高(P＜0.05).以MP在50 CFU/cell浓度刺激巨噬细胞,随时间增加,IL-6、TNF-α、IL-1β水平明显升高(P＜0.05).SiRNA组IL-6、TNF-α、IL-1β水平明显高于非SiRNA组(P＜0.05).结论 感染MP后患儿TIPE2表达水平明显降低,并且与疾病严重程度呈负相关.体外实验表明MPP可抑制TIPE2的表达,而TIPE2可以对MAPK通路产生抑制作用,从而负调节炎症因子的水平.

目的 探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)和外周血单个核细胞中肿瘤坏死因子α诱导蛋白家族8样蛋白2(tumor necrosis factor-α induced protein 8 like 2,TIPE2)的表达在RA的诊断及疗效评价中的价值.方法 选取开封市第二人民医院风湿科近两年收治的RA患者86例,包括活动期患者42例,缓解期患者44例,门诊健康对照40例,用酶联免疫吸附法检测3组的血清中TNF-α的浓度,无菌抽取各组外周血,提取外周血单个核细胞,用荧光定量PCR及Western blot法检测TIPE2在mRNA及蛋白水平的表达.结果 RA活动组和缓解组患者血清中的TNF-α浓度高于健康对照组,RA活动组血清中TNF-α明显高于缓解组,差异有统计学意义(P＜0.05).TNF-α和RF联合检测的敏感度和特异性分别为75.5％和90％,特异性与单独检测RF相比,差异有统计学意义(P＜0.05).RA活动期患者血清中TNF-α的浓度及TIPE2在mRNA表达水平和DAS28评分呈正相关(P＜0.01),RA患者血清中TNF-α的浓度和TIPE2在mRNA表达水平呈正相关(P＜0.01).RA患者外周血TIPE2在mRNA及蛋白水平均高于对照组,而且活动组高于缓解组(P＜0.01).结论 联合检测RA患者血清中的TNF-α对患者的诊断和病情的监测有重要临床价值,TIPE2参与了RA的发病过程,可以和TNF-α一起作为判断疾病严重程度的指标.