目的:观察过表达S100A4蛋白对视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）后视网膜毛细血管细胞和视网膜神经节细胞（RGC）的影响。方法:采用随机数字表法将100只健康雄性成年C57BL/6小鼠分为正常对照组（C组）、RIRI组、玻璃体腔注射腺相关病毒（AAV2）-S100A4-绿色荧光蛋白（GFP）组（S组）、RIRI＋玻璃体腔注射AAV2-GFP组（GIR组）、RIRI＋玻璃体腔注射AAV2-S100A4-GFP组（SIR组），每组各20只。RIRI组、GIR组、SIR组小鼠采用前房高眼压法建立RIRI模型。建模后3 d过量麻醉处死摘除眼球。视网膜胰蛋白酶消化铺片和苏木精-伊红、高碘酸-雪夫染色观察各组小鼠视网膜毛细血管内皮细胞、周细胞数量；免疫荧光染色观察内皮细胞、周细胞覆盖率和RGC存活率；蛋白质免疫印迹法检测小鼠视网膜组织中Toll-样受体4 (TLR4）、p38蛋白、核因子E2相关因子2 （NRF2）蛋白相对表达量。多组间数据比较采用单因素方差分析。结果:建模后3 d，内皮细胞与周细胞比值：C组与S组、SIR组比较，差异均无统计学意义（ F=106.30， P>0.05）；SIR组与RIRI组、GIR组比较，差异均有统计学意义（ F=106.30， P<0.000 1 ）。内皮细胞覆盖率：各组比较，差异无统计学意义（ F=3.44， P>0.05 ）。周细胞覆盖率：与C组比较，RIRI组、GIR组显著降低，差异均有统计学意义（ F=62.69， P<0.001 ）。RGC存活率：与C组比较，RIRI组、GIR组明显降低，差异有统计学意义（ F=171.60， P<0.000 1 ）；与RIRI组、GIR组比较，SIR组明显增高，差异有统计学意义（ F=171.60， P<0.000 1）。TLR4、p38、NRF2蛋白相对表达量：各组比较，差异均有统计学意义（ F=42.65、20.78、11.55， P<0.05 ）。 结论:RIRI后，周细胞较内皮细胞对缺血更敏感，早期毛细血管细胞变性以周细胞丢失为主，而不是内皮细胞。S100A4蛋白过表达通过抑制TLR4/p38/NRF2信号通路保护了RIRI后周细胞和RGC的丢失。

目的:研究急性高眼压诱导小鼠视网膜缺血-再灌注损伤模型中血-视网膜外屏障的破坏情况。方法:选取SPF级雄性C57BL/6J小鼠57只，采用随机数表法将小鼠随机分为对照组和高眼压组，其中对照组25只，高眼压组32只，剔除建模失败或建模不佳的小鼠后，每组最终纳入20只，均选取左眼为实验眼。高眼压组采用质量分数0.9%氯化钠溶液前房灌注法建立小鼠急性高眼压诱导的视网膜缺血-再灌注损伤模型，对照组仅作前房穿刺。采用动物光相干断层扫描法检测视网膜厚度变化；采用免疫荧光染色法检测视网膜组织中紧密连接蛋白1(ZO-1)分布变化；采用胰蛋白酶消化法检测视网膜毛细血管退化程度；采用苏木精-伊红染色法观察视网膜炎性细胞浸润情况。结果:与对照组比较，高眼压组视网膜色素上皮(RPE)层结构紊乱，伴有明显渗出，局部神经上皮层脱离、隆起。高眼压组小鼠视网膜全层厚度为(235.8±5.3)μm，较对照组的(213.3±3.9)μm明显增厚，差异有统计学意义( t＝3.427， P＝0.009)。小鼠RPE层中ZO-1主要定位在细胞膜上，少部分在细胞质中，建模后2 d，高眼压组ZO-1出现明显内化，细胞膜上ZO-1减少，细胞质中ZO-1增多，整体分布紊乱。建模后7 d，高眼压组视网膜毛细血管出现退行性变，退化的毛细血管数量明显增加，高眼压组退化的毛细血管数量为(201.0±13.2)根，明显多于对照组的(11.2±1.7)根，差异有统计意义( t＝14.280， P<0.01)。苏木精-伊红染色结果显示，高眼压组小鼠视网膜中可见炎性细胞浸润，主要是嗜中性粒细胞，浸润的炎性细胞主要位于内界膜下。 结论:急性高眼压诱导小鼠视网膜缺血-再灌注损伤使视网膜外屏障受到破坏，引起外周循环中粒细胞的浸润及视网膜水肿，视网膜毛细血管退化。

目的:观察N-乙酰-5-羟色胺（NAS）对视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）大鼠视网膜中肿瘤坏死因子（TNF）-α蛋白表达的影响，探讨其可能机制。方法:采用随机数字表法将90只健康雄性Sprague-Dawley大鼠分为假手术组（10只）、RIRI组（40只）、NAS组（40只）。以右眼为实验眼。RIRI组、NAS组大鼠采用前房高眼压法建立RIRI模型。NAS组大鼠分别于建模前及建模后30 min腹腔注射10 mg/kg NAS。建模后6、12、24、72 h，苏木精-伊红染色观察各组大鼠视网膜组织病理变化，计数视网膜神经节细胞（RGC）；免疫组织化学染色、蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠视网膜中TNF-α、核因子E2相关因子2 （Nrf2 ）、血红素氧合酶-1 (HO-1）蛋白相对表达量。组间差异采用单因素方差分析。采用一般线性回归法分析NAS干预后TNF-α蛋白相对表达量变化与Nrf2、HO-1蛋白相对表达量变化的相关性。结果:光学显微镜观察发现，建模后6、12、24 h，RIRI组大鼠视网膜水肿；NAS组大鼠视网膜厚度显著薄于RIRI组，差异有统计学意义（ F=9.645、477.150、2.432， P<0.01）。建模后6、12、24、72 h，NAS组大鼠视网膜RGC计数显著高于RIRI组，差异有统计学意义（ F=12.225、12.848、117.655、306.394， P<0.05 ）。免疫组织化学染色、Western blot检测结果显示，建模后6 h，RIRI组大鼠视网膜中TNF-α蛋白相对表达量较假手术组显著增加，12 h达较高水平，24、72 h下降，但均显著高于假手术组，差异有统计学意义（免疫组织化学染色： F=105.893、1 356.076、434.026、337.351， P<0.01；Western blot： F=92.906、534.948、327.600、385.324， P<0.01 ）；建模后不同时间点，NAS组大鼠视网膜中TNF-α蛋白相对表达量显著低于RIRI组（免疫组织化学染色： F=15.408、570.482、21.070、13.767， P<0.05；Western blot： F=12.618、115.735、13.176、111.108， P<0.05），但仍高于假手术组（免疫组织化学染色： F=40.709、151.032、156.321、216.035， P<0.01；Western blot： F=33.943、79.729、74.057、64.488， P<0.01），差异均有统计学意义；建模后12 h，NAS组大鼠视网膜中Nrf2（免疫组织化学染色： F=51.122， P<0.05；Western blot： F=33.972， P<0.05 ）、HO-1（免疫组织化学染色： F=30.750， P<0.05；Western blot： F=18.283， P<0.05）蛋白相对表达量显著高于RIRI组，差异均有统计学意义。一般线性回归分析结果显示，RIRI组、NAS组大鼠视网膜TNF-α +细胞数差值与Nrf2 +、HO-1 +细胞数差值均呈负相关（ r2=0.923、0.936， P<0.01）。 结论:NAS可抑制RIRI大鼠视网膜中TNF-α蛋白表达，减轻RIRI，其机制可能与Nrf2/HO-1通路有关。

目的:探讨牡荆苷对大鼠视网膜缺血-再灌注(RIR)引起的视网膜神经节细胞(RGCs)氧化应激损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法:将60只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法随机分为正常对照组、模型组和牡荆苷组，均以右眼为实验眼。模型组和牡荆苷组大鼠采用前房灌注方法建立RIR模型，牡荆苷组大鼠建模后每日按照25 mg/kg剂量腹腔内注射牡荆苷生理盐水溶液，模型组大鼠腹腔内注射相同剂量的生理盐水，连续给药7 d。正常对照组大鼠右眼仅行前房穿刺而不升高眼压，同时腹腔内注射相同剂量的生理盐水。造模后7 d过量麻醉法处死大鼠，采用组织病理学染色法检测大鼠视网膜厚度和RGCs数量，采用逆行荧光金染色标记法检测RGCs密度，采用TUNEL染色法检测RGCs凋亡情况，采用比色法检测视网膜组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)浓度，采用Western blot法检测大鼠视网膜组织细胞质Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)、NQO1、细胞核Nrf2蛋白表达。结果:模型组大鼠视网膜厚度为(90.21±3.55)μm，明显低于正常对照组的(128.20±5.31)μm和牡荆苷组的(119.65±6.14)μm，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。模型组单位面积RGCs数量为(1 300.85±14.00)个/mm 2，明显低于正常对照组的(2 330.12±15.05)个/mm 2和牡荆苷组的(1 921.64±11.78)个/mm 2，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。模型组TUNEL阳性RGCs比率为(68.34±5.04)%，明显高于正常对照组的(3.01±0.18)%和牡荆苷组的(35.51±2.04)%，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。模型组大鼠视网膜组织中SOD活性明显低于正常对照组和牡荆苷组，MDA、NO摩尔浓度明显高于正常对照组和牡荆苷组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。模型组大鼠视网膜组织中细胞质Nrf2蛋白相对表达量明显低于正常对照组，HO-1、NQO1和细胞核Nrf2蛋白相对表达量明显高于正常对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；牡荆苷组大鼠视网膜组织中细胞质Nrf2蛋白相对表达量明显低于模型组和正常对照组，HO-1、NQO1和细胞核Nrf2蛋白相对表达量明显高于模型组和正常对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:牡荆苷能减少RGCs凋亡，缓解RIR引起的大鼠视网膜氧化应激损伤，这一作用可能是通过活化Nrf2相关信号通路而实现的。

目的:探索载脂蛋白E模拟肽COG1410对小鼠视网膜缺血－再灌注(IR)损伤后M1/M2小胶质细胞极化及视网膜神经节细胞(RGCs)存活的影响及其可能的机制。方法:将18只8周龄C57BL/6J雄性小鼠按照随机数字表法分为正常对照组6只、IR 3 d组6只、IR 7 d组3只和IR 14 d组3只，其中IR组小鼠使用生理盐水进行前房灌注，将眼压提高至100 mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa)并维持1 h，以建立视网膜IR损伤模型。取正常对照组和IR 3 d组各3只，采用视网膜冰冻切片免疫荧光染色法观察视网膜小胶质细胞的分布情况。取正常对照组、IR 3 d组、IR 7 d组和IR 14 d组各3只，通过视网膜铺片免疫荧光染色法观察视网膜M1型、M2型小胶质细胞随IR损伤后时间的变化。另取91只C57BL/6J小鼠按照随机数字表法随机分为正常对照组19只、IR组24只、生理盐水组24只、COG1410组24只，其中正常对照组小鼠维持正常眼压，其余3个组均建立IR损伤模型，且COG1410组和生理盐水组在造模后分别尾静脉注射1 mg/kg COG1410和等体积生理盐水。采用视网膜铺片免疫荧光染色法观察各组小胶质细胞表型及RGCs存活率；采用实时荧光定量PCR法检测各组视网膜肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA的相对表达量；采用TUNEL法观察视网膜神经细胞的凋亡情况；采用Western blot法检测各组视网膜核因子κB(NF-κB)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)蛋白的表达水平。结果:正常对照组与IR 3 d组视网膜小胶质细胞主要分布在神经节细胞层、内丛状层和外丛状层。正常对照组、IR 3 d组、IR 7 d组和IR 14 d组M1型、M2型小胶质细胞数目总体比较差异均有统计学意义( F＝29.83、57.62；均 P<0.001)；与正常对照组相比，IR 3 d组M1型小胶质细胞数量增多，IR 7 d组M2型小胶质细胞数量增多，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。正常对照组、IR组、生理盐水组、COG1410组M1型小胶质细胞比例分别为(4.25±0.57)%、(65.26±10.43)%、(63.01±4.93)%和(33.13±4.46)%，M2型小胶质细胞的数目分别为(4.50±0.20)%、(11.47±0.24)%、(11.75±0.17)%和(38.93±4.26)%，总体比较差异均有统计学意义( F＝23.33、50.82；均 P<0.05)；与IR组比较，COG1410组M1型小胶质细胞数目减少而M2型小胶质细胞数目增多，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；各组RGCs存活率及视网膜TNF-α mRNA、IL-1β mRNA相对表达量、凋亡细胞数目、NF-κB和Bax蛋白表达水平、Bax/Bcl-2值总体比较差异均有统计学意义( F＝30.77、12.52、6.74、28.72、13.02、7.94、7.58，均 P<0.05)；与正常对照组比较，IR组RGCs存活率明显降低，视网膜凋亡细胞数增多，TNF-α和IL-1β mRNA表达量升高，视网膜NF-κB和Bax蛋白表达水平升高，Bax/Bcl-2比值升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；与IR组比较，COG1410组视网膜RGCs存活率升高，TNF-α和IL-1β mRNA表达量降低，TUNEL阳性细胞减少，NF-κB和Bax蛋白表达水平降低、Bax/Bcl-2比值降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:视网膜IR后3 d，COG1410促进M1型小胶质细胞向M2型极化，抑制视网膜NF-κB及下游炎症因子表达，减轻视网膜炎症反应，同时抑制凋亡相关蛋白的表达，从而促进RGCs存活。

视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）是糖尿病视网膜病变、青光眼、视网膜中央动静脉阻塞等多种缺血性视网膜疾病的重要病理生理基础。目前关于RIRI的发病机制研究主要有氧化应激、细胞凋亡、细胞坏死性凋亡、血管损伤、炎症反应等几种学说。针对上述RIRI发病机制，国内外学者研究提出很多治疗RIRI的方法，包括抗自由基损伤、抗谷氨酸兴奋性毒性、抗凋亡、抗坏死性凋亡、保护紧密连接、保护内皮细胞、抗炎症反应等。尽管目前有很多针对RIRI的药物研究，但对于RIRI的药物干预时机尚不明确，确定最为有效的治疗时间窗可能起到事半功倍的效果，也将对眼科相关疾病的临床治疗起到至关重要的指导作用。

目的:探索在新西兰兔视网膜中央动脉阻塞(CRAO)模型中行经睫状体平坦部玻璃体切割术(PPV)联合反搏术构建新型视网膜缺血－再灌注(RIR)损伤模型。方法:选用20只健康成年新西兰兔，按照随机数字表法随机分为2个组，每组10只：激光组单纯行视网膜动脉激光光凝术，反搏术组于光凝术后行PPV联合反搏术，均取右眼为实验眼，左眼作为正常对照组。通过荧光素眼底血管造影(FFA)、玻璃体腔氧分压(PO 2)评估灌注恢复情况，观察视网膜电图(ERG)的振荡电位(OPs)变化评估视网膜功能改变，苏木精－伊红染色法观察视网膜结构改变。 结果:反搏术组术中即可观察到视网膜灌注恢复；术后2 h，FFA检查示所有眼视网膜动静脉完全恢复灌注，早期即见视网膜动脉充盈，随后静脉充盈，充盈时间无延迟，无血流中断。不同时间点反搏术组、激光组和正常对照组PO 2百分数总体比较，差异均有统计学意义( F分组＝330.87， P<0.001； F时间＝985.70， P<0.001)，其中激光后、术后不同时间点反搏术组玻璃体腔PO 2百分数分别为(18.67±6.29)%、(38.82±1.48)%、(57.33±4.25)%、(84.51±3.91)%和(89.20±2.97)%，高于激光组的(23.24±1.95)%、(31.44±3.29)%、(40.21±3.05)%、(43.65±3.82)%和(58.07±2.93)%，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。不同时间点反搏术组、激光组和正常对照组OPs百分数总体比较，差异均有统计学意义( F分组＝164.09， P<0.001； F时间＝447.91， P<0.001)，其中术后3 d、7 d、2周和1个月反搏术组OPs百分数分别为(47.23±2.73)%、(70.79±3.09)%、(78.39±3.63)%、(76.69±4.08)%和(82.18±1.78)%，较激光组的(46.83±2.89)%、(55.32±1.58)%、(51.08±4.02)%、(52.32±6.59)%和(53.46±6.46)%升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。反搏术组视网膜内层结构破坏较小，有髓神经纤维层(MFL)结构疏松，大量空泡状改变。激光组MFL、内丛状层、内核层和外丛状层结构紊乱，Müller细胞神经纤维破坏。 结论:在新西兰兔CRAO模型中行PPV联合反搏术可构建新型RIR损伤模型。

目的:探讨小胶质细胞活化抑制剂C-X3-C基序趋化因子受体1(cx3cr1)抗体玻璃体腔注射对视网膜缺血—再灌注损伤(RIR)过程中视网膜微循环的保护作用及其可能机制。方法:采用随机数字表法将150只成年健康C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、模型组和cx3cr1抗体注射组，每组各50只。空白对照组小鼠仅玻璃体腔注射无菌注射用水2 μl，模型组小鼠采用前房灌注升高眼压法建立RIR模型，cx3cr1抗体注射组小鼠玻璃体腔注射0.2 μg/μl cx3cr1抗体2 μl，注射后4 h建立RIR模型。于造模后3 d采用免疫荧光染色法检查各组小鼠实验眼冰冻切片中各层视网膜结构Iba-1阳性表达以评估小胶质细胞活化情况；采用视网膜铺片血管染色法观察视网膜深层和浅层血管密度变化及活化小胶质细胞数以评估视网膜微循环改变；采用FITC-dextran造影法测定视网膜血管渗漏面积；采用实时荧光定量PCR法测定视网膜中缺氧相关因子及炎性因子mRNA表达变化。结果:眼球冰冻切片免疫荧光染色结果显示，空白对照组中Iba-1阳性小胶质细胞稀疏分布于视网膜神经节细胞层和内丛状层，呈分支形态；模型组Iba-1阳性细胞数量明显增多，呈阿米巴样或球形，并明显向外丛状层、外核层等视网膜外层移动；cx3cr1抗体注射组球形或阿米巴样的Iba-1阳性细胞数较模型组明显减少；模型组小鼠视网膜各层活化小胶质细胞数明显多于空白对照组和cx3cr1抗体注射组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与模型组比较，cx3cr1抗体注射组小鼠视网膜血管周围活化小胶质细胞数量明显减少。视网膜铺片血管与活化小胶质细胞共染色结果显示，空白对照组和cx3cr1抗体注射组小鼠视网膜深层血管密度均明显高于模型组，cx3cr1抗体注射组浅层及深层视网膜血管周围小胶质细胞数量较模型组明显减少，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。空白对照组、模型组和cx3cr1抗体注射组血管相对渗漏率分别为(100.0±4.7)%、(162.1±10.6)%和(130.5±9.5)%，总体比较差异有统计学意义( F＝128.66， P<0.01)，cx3cr1抗体注射组小鼠视网膜血管相对渗漏率明显低于模型组，差异有统计学意义( P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示，与模型组比较，cx3cr1抗体注射组和空白对照组小鼠视网膜中血管内皮生长因子A(VEGF-A)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA相对表达量均明显降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:Cx3cr1抗体玻璃体腔注射可对RIR模型小鼠的视网膜微循环系统血管完整性发挥保护作用。

外泌体是细胞主动分泌的一种纳米囊泡，其选择性包裹蛋白质、RNA、细胞因子等生物活性分子，在细胞间通讯、免疫调节、维持内环境稳态中发挥重要作用，还可以作为靶向递送药物的载体。视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）是一种严重威胁人类视力健康的视网膜病变。目前临床上治疗此类疾病多为对症治疗，部分患者疗效欠佳甚至失明。外泌体作为一种富含功能性蛋白和RNA的细胞外囊泡，其不仅可作为药物治疗RIRI；同时，也可以作为载体进行药物递送，发挥协同治疗作用。随着对外泌体分子结构、内容物成分及生物功能研究的不断深入，以及眼科生物和基因工程技术的不断发展，外泌体未来有望发挥其作为治疗性药物及载体的巨大潜力，成为治疗RIRI的重要手段。

经典的Hippo通路通过激酶反应导致下游效应分子Hippo-Yes相关蛋白（Yap）和转录共激活因子（Taz）丝氨酸位点的磷酸化，从而在促进细胞增生、控制细胞极性、改变细胞骨架、上皮细胞-间充质转化和细胞接触抑制等多种病理生理过程中发挥重要调控作用。研究表明，Yap/Taz会影响玻璃体视网膜疾病的进展过程，为糖尿病视网膜病变、增生性玻璃体视网膜病变、视网膜缺血再灌注损伤等发病机制研究和临床治疗开辟了新的前景。探索Yap/Taz的分子机制为未来研究治疗糖尿病视网膜病变、增生性玻璃体视网膜病变等视网膜纤维化疾病提供一个可能的治疗靶点。同时，调控视网膜局部Yap/Taz的活性也将成为视网膜缺血再灌注损伤中损伤-修复的有效治疗靶点。但Yap抑制剂有潜在的视网膜毒性，目前仍处于临床前研发阶段，进一步研究Yap抑制剂的作用机制和临床安全性将为视网膜疾病的治疗提供新方法。