目的:探讨短链脂肪酸（SCFA）对缺氧诱导的胰腺星状细胞（PSCs）氧化应激和活化的调控作用。方法:常氧及缺氧培养PSCs建立常氧组和缺氧组，SCFA工作液（10 mmol/L乙酸钠、0.5 mmol/L丙酸钠及0.5 mmol/L丁酸钠）和生理盐水分别预处理PSCs后进行缺氧培养建立缺氧SCFA组和缺氧对照组。采用CCK-8法检测各组PSCs生长活力，采用DCFH-DA荧光探针法检测PSCs活性氧（ROS）的相对水平，JC-1荧光探针检测线粒体膜电位的变化，蛋白质免疫印迹法检测PSCs周期相关蛋白cyclin A和cyclin D、缺氧标志蛋白HIF1α、活化标志蛋白α-SMA及抗氧化蛋白NRF2和HO-1的表达。结果:缺氧组PSCs在培养48 h时的相对活力显著高于常氧组（1.23±0.05比0.99±0.04），而缺氧SCFA组在培养36 h和48 h时的相对活力均显著低于缺氧对照组（0.69±0.01比0.86±0.03，0.86±0.02比1.25±0.05）。缺氧组ROS相对水平显著高于常氧组（1.74±0.11比1.00±0.10），而缺氧SCFA组ROS相对水平显著低于缺氧对照组（1.39±0.14比1.66±0.11）。缺氧组JC-1聚合体的荧光信号明显高于常氧组（1.36±0.05比1.00±0.11），而缺氧SCFA组JC-1聚合体的荧光信号明显低于缺氧对照组（1.11±0.03比1.32±0.06）。缺氧组cyclin A、cyclin D、HIF1α、α-SMA、NRF2和HO-1表达量显著高于常氧组（1.19±0.01比0.63±0.02，0.93±0.02比0.83±0.03，1.18±0.07比0.41±0.02，1.19±0.14比0.66±0.04，1.22±0.11比0.61±0.04，1.28±0.12比0.68±0.02），而缺氧SCFA组cyclin A、cyclin D、α-SMA、NRF2和HO-1的表达量显著低于缺氧对照组（0.79±0.04比1.15±0.03，0.88±0.01比0.95±0.03，0.87±0.01比1.18±0.05，0.84±0.01比1.22±0.04，0.92±0.02比1.27±0.06）。以上差异均有统计学意义（ P值均<0.05）。 结论:SCFA显著改善缺氧状态下PSCs的氧化应激状态，维持线粒体膜电位的稳定，抑制缺氧诱导的PSCs活化。

目的:探讨上皮基质相互作用蛋白1（epithelial stromal interaction 1，EPSTI1）在胰腺癌发生发展过程中对癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的作用。方法:对132例胰腺癌组织样本进行免疫组化染色评估，对体外培养的癌细胞进行转染，采用Western blot、Transwell试验分析EPSTI1对胰腺癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响 。结果:EPSTI1在胰腺癌细胞中的异常高表达可导致癌细胞的上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT），增加胰腺癌细胞的迁移和侵袭（均 P<0.05）。通过与胰腺星形细胞共培养，癌细胞中EPSTI1表达显著升高。EPSTI1与磷酸化蛋白激酶（phosphorylated protein kinase，AKT）相互作用，可诱导AKT磷酸化，促进上述恶性表型（均 P<0.05）。 结论:EPSTI1部分通过调节AKT激活促进胰腺癌细胞迁移、侵袭和EMT。

目的:观察核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体激活对胰腺星状细胞(PSCs)增殖、迁移及细胞外基质沉积的影响。方法:对大鼠PSCs进行分离培养与鉴定，根据是否给予细菌脂多糖(LPS)10 μg/ml预处理24 h分为对照组和LPS组，ELISA法检测PSCs培养液中NLRP3炎症小体相关分子的表达；通过携带靶向NLRP3基因的shRNA慢病毒载体感染PSCs的方法构建NLRP3基因表达抑制的PSCs细胞株，根据有无LPS预处理和是否慢病毒干扰NLRP3表达，将PSCs分为LPS+阴性对照组和LPS+慢病毒组，采用CCK-8法和Transwell小室实验分别检测细胞增殖及迁移能力变化；采用免疫荧光染色检测PSCs细胞外基质α-SMA和collagen沉积；采用RT-qPCR检测PSCs促纤维化因子TGF-β的变化。结果:培养24 h的PSCs胞质内富含高亮环形脂滴，细胞表达desmin。培养7 d后，细胞体积变大，脂滴基本消失，细胞活化并表达α-SMA。LPS组PSCs上清液中caspase-1、IL-1β、IL-18水平均显著高于对照组(1.55±0.04比0.65±0.03；2.02±0.04比1.05±0.05；1.70±0.05比0.97±0.03)。慢病毒感染PSCs后，慢病毒组NLRP3蛋白表达量(0.25±0.04)显著低于阴性对照组(0.68±0.05)。对照组、LPS组、LPS+阴性对照组、LPS+慢病毒组PSCs培养48 h后的 A490值分别为0.61±0.02、1.15±0.06、0.96±0.05、0.56±0.01，迁移细胞数分别为(64.12±4.58)、(121.67±8.02)、(111.67±4.67)、(69.67±8.08)个/高倍视野，α-SMA蛋白沉积量分别为0.78±0.05、4.12±0.04、3.81±0.06、0.88±0.05，collagen蛋白沉积量分别为0.65±0.03、3.43±0.02、2.67±0.02、0.48±0.03，TGF-β mRNA表达量分别为0.22±0.03、0.89±0.01、0.86±0.03、0.43±0.02。LPS组、LPS+阴性对照组的 A490值、迁移细胞数、α-SMA和collagen蛋白表达水平及TGF-β mRNA表达量均显著高于对照组及LPS+慢病毒组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:NLRP3炎症小体可通过调控PSCs生物学功能，促进其细胞增殖和迁移能力，从而加剧细胞外基质沉积和胰腺纤维化形成。

胰腺癌是最常见的消化系统恶性肿瘤之一，侵袭性强、易转移、耐受放射治疗和靶向治疗是胰腺癌的主要特点，这与胰腺癌免疫微环境复杂有关。由肿瘤细胞、胰腺星形细胞、免疫细胞以及细胞外基质构建的胰腺癌免疫微环境，抑制免疫反应，促进胰腺癌生长，并协助其逃避免疫监视。因此，胰腺癌临床治疗要将免疫治疗与靶向治疗和手术治疗相结合。免疫治疗可以改善免疫微环境、建立长久的抗肿瘤免疫应答反应，为治愈胰腺癌提供可能。

患者男，57岁，4年前因体检发现血小板减少于当地医院就诊，影像学检查提示肝内有多个结节(考虑良性)，肝硬化、门静脉高压、脾肿大，具体声像不详。未行治疗。入院前1周，因体检复查胃镜，见胃底食管静脉曲张显著，为求进一步诊治入我院。入院后查体发现脾脏肿大(超声测得脾肋下5 cm)，余未见阳性体征。实验室检查：肝功能、血常规、凝血常规、肿瘤标志物未见明显异常，乙肝及丙肝病原学检查阴性。消化系统及肝脏血管系统超声检查描述：非明确肝硬化背景，肝脏各叶形态比例尚规整，叶间裂稍宽，表面欠光滑，结节外实质回声尚均。肝内可见若干个类圆形近等回声结节，均边界清晰，内部回声均匀，较大者位于肝右前叶下段(S5)，大小32 mm×24 mm×17 mm。彩色多普勒血流显像(color Doppler flow imaging，CDFI)示：所有结节中央均见涡流样血流信号，均与门静脉分支延续(图1)。门静脉系统显著增宽：门静脉主干内径16.0 mm，右支内径8.9 mm，左支矢状部内径14.7 mm。脐静脉重新开放，脐静脉及属支静脉迂曲、扩张。肠系膜上静脉与脾静脉汇合处管腔内径20.0 mm，胰腺后方脾静脉管腔内径12.8 mm，肠系膜上静脉管腔内径11.2 mm。CDFI：各静脉均血流通畅，血流形态规则，其中门静脉主干血流呈向肝血流，左支矢状部双向血流。肝动脉未见增宽。肝静脉及下腔静脉走形正常，血流通畅，未见明显异常。提示：①门静脉高压(窦前性)，伴脐静脉开放及其属支扩张；②肝内多发结节，性质待定，建议行CT/MRI检查。肝内结节超声造影检查：病灶动脉期未见增强，门静脉期由中心向周边呈"轮辐样"高增强，延迟期呈持续增强，提示肝内多发结节，肝脏局灶性结节性增生(focal nodular hyperplasia，FNH)可能性大，建议定期复查(图2)。肝细胞特异性对比剂MRI检查提示：①肝硬化、脾大、少许腹腔积液，门脉高压伴侧支循环开放；②肝内多发类圆形异常信号，长T1、稍长T2，中央可见星形信号，动脉期可见轻度强化，门脉期及移行期可见持续进行性强化，病灶中心可见门静脉分支供血，肝胆特异期，病灶呈高摄取，中心可见裂隙状低摄取。待除外FNH或不典型肝硬化结节(图3)。胃镜提示：食管胃底静脉曲张(重度)，门静脉高压性胃病(图4)。超声引导下穿刺活检，结节外肝组织镜下描述：非正常结构，肝细胞增多，未见明确异型性，肝板排列正常，其汇管区小叶间静脉扩张，少量肝纤维化；镜下结节内可见：肝穿组织共见24个中心汇管区，小叶结构紊乱；肝穿组织内可见异常扩张的管腔样结构，多与汇管区相伴，CD34染色阳性，内皮细胞稍肿胀。有的汇管区扩大，轻度混合性炎性细胞浸润，以单个核细胞为主，可见肝实质塌陷区伴肝窦淤血，该区域肝细胞CK7染色呈强阳性，汇管区小胆管可辨，轻度胆管反应，汇管区间质纤维组织增生，病理诊断FNH可能性大(图5)。临床诊断为肝内多发FNH，门静脉高压。

目的 探讨纤调蛋白(FMOD)在氧化应激诱导的胰腺星形细胞(PSCs)活化中的作用.方法 应用靶向FMOD-shRNA(sh-FMOD)慢病毒感染PSCs,再用促氧化剂甲萘醌(MND)处理48 h(MND+ sh-FMOD组),以等容积DMSO处理的慢病毒感染的PSCs细胞为sh-FMOD组,亲本细胞为对照组,MND处理的PSCs为MND组.采用RT-PCR法检测PSCs活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅲ型胶原蛋白α1(Co13α1)、Ⅰ型胶原蛋白α1(Col1 α1)、金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)、整合素α1(α1-Integrin)mRNA表达.采用二丁基二氯化锡尾静脉注射建立慢性胰腺炎(CP)大鼠模型.应用免疫组织化学染色法检测大鼠正常胰腺组织和CP胰腺组织中FMOD、α-SMA及抗氧化标志物超氧化物歧化酶(SOD)、氧化标志物丙二醛(MDA)蛋白表达.结果 sh-FMOD组PSCs的FMOD mRNA表达量较对照组显著下降(0.16 ±0.03比1),差异有统计学意义(P＜0.01),表明FMOD基因沉默成功.MND组PSCs的FMOD、α-SMA、Co13α1、Col1α1、TIMP1、α1-Integrin mRNA表达量均较对照组显著增加,而MND+sh-FMOD组PSCs的上述各基因表达量均较MND组下降,差异均有统计学意义(P值＜0.05或＜0.01).CP胰腺组织FMOD、α-SMA、SOD、MDA蛋白表达均较正常胰腺组织增加,差异具有统计学意义(P值均＜0.05).结论 氧化应激通过诱导FMOD表达促进PSCs活化.

我国胶质瘤年发病率为(3 ～6.4)/10万,年死亡人数达3万[1-2].恶性胶质瘤的发病率为5.8/10万,5年病死率在全身肿瘤中仅次于胰腺癌和肺癌[3].在原发性恶性中枢神经系统(central nervous system,CNS)肿瘤中,胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM,WHOⅣ级)的发病率最高,占46.6％,约为3.20/10万;其次是弥漫性星形细胞瘤,发病率为0.51/10万[4].

目的 探讨星形胶质细胞上调基因1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)表达水平对人胰腺癌细胞增殖和细胞周期的影响,研究其可能的分子机制.方法 采用RNAi技术抑制AsPC-1细胞中AEG-1表达,采用Western blot检测转染前后AEG-1蛋白表达情况,实验分为未转染组、脂质体组和AEG-1 siRNA转染组3组.采用MTT法和流式细胞术分析AEG-1基因沉默后对人胰腺癌AsPC-1细胞生长及周期的影响.结果 Western blot检测结果显示,AEG-1 siRNA转染48 h后,AsPC-1细胞中AEG-1蛋白相对灰度值为0.10 ±0.09,明显弱于未转染对照组的0.69±0.24和脂质体转染组的0.70±0.21(P＜0.05),而未转染对照组和脂质体转染组之间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).转染AEG-1 siRNA的AsPC-1细胞其AEG-1基因表达量下降了82％.MTT法检测结果显示,AEG-1 siRNA干扰AsPC-1细胞后,AEG-1 siRNA干扰组AsPC-1细胞生长减慢(P＜0.05).FCM法检测结果显示,AEG-1基因沉默后,与未转染对照组和脂质体转染组相比,Go/G1期细胞的比例明显升高(P＜0.05),S期的比例显著下降(均P＜0.05).结论 RNA干扰AEG-1基因表达后可明显抑制人胰腺癌AsPC-1细胞增殖,且其抑制增殖作用与改变细胞周期的分布有关.

急性胰腺炎(AP)和慢性胰腺炎(CP)是消化科基础与临床研究的热点与难点,目前认为胰酶激活、白细胞招募、微循环灌注受损在AP的发病机制中发挥着重要作用,CP的发病机制涉及胰腺星形细胞激活、基因突变、免疫调节失衡等.中性粒细胞作为人体内最丰富的免疫细胞,除了传统的抗菌作用外,近年发现它还以另一种方式即产生中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)来调节炎症、免疫和组织损伤.本文就NETs的产生、免疫作用和在胰腺炎发病机制中的作用做一综述.

目的 探讨骨桥蛋白(OPN)对胰腺星形细胞(PSC)的影响及其机制.方法 构建OPN慢病毒过表达载体(OPN-O/E)并转染PSC,设置空载体转染细胞作为对照组.分别采用CCK-8实验和Transwell小室检测OPN-O/E转染及OPN-O/E转染联合Akt抑制剂LY294002(10μmol/L、50μmol/L)处理后PSC增殖活性和趋化活性,采用蛋白质印迹法检测-平滑肌肌动蛋白(-SMA)及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达.结果 OPN-O/E转染上调OPN表达后,PSC增殖活性增高、趋化活性增高,细胞中磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)和-SMA表达水平均增高,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);细胞中PI3K和Akt表达水平与对照组相比差异均无统计学意义(P均>0.05).使用10μmol/L或50μmol/L Akt抑制剂LY294002干预后,细胞中-SMA及p-Akt的表达被抑制,与OPN-O/E组相比差异均有统计学意义(P均<0.01),Akt的表达无明显变化.结论 OPN通过PI3K/Akt信号通路介导PSC活化,活化后PSC的增殖及趋化活性也增强.