目的 研究生化汤抑制子宫内膜炎的作用机制.方法 脂多糖(LPS)诱导建立子宫内膜上皮细胞(HEEC)炎症损伤模型,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选出LPS最佳作用时间浓度,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测模型组、生化汤组、对照组的白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8 表达量变化;以中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)及中医药综合数据库(TCMID)为基础,探索生化汤作用靶点,利用DrugBank、DisGeNET数据库系统,筛查与子宫内膜炎有关的靶点,通过STRING平台建立药物-疾病靶点网络;运用METASCAPE数据库对子宫内膜炎靶位蛋白的生物学过程开展研究,通过基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析,形成生化汤活性物质-子宫内膜炎靶点-KEGG通路多维研究的相互关系图谱.结果 与对照组相比:LPS作用 6、12 h的模型组中IL-1β(7.972±0.035、26.083±0.070)、IL-6(3.475±0.054、5.525±0.028)、IL-8(5.783±0.060、11.013±0.018)均提高(P<0.01);3 h模型组中IL-1β(5.054±0.005)、IL-8(3.008±0.052)提高(P<0.05).生化汤组和模型组对比:3 h时IL-1β(1.000±0.004、5.054±0.005)、IL-6(0.811±0.014、1.450±0.045)减少(P<0.05);6 h时IL-6(1.794±0.028、3.475±0.054)、IL-8(3.880±0.028、5.783±0.060)下降(P<0.01),12 h时IL-8(8.978±0.012、11.013±0.018)下降(P<0.01).通过检测,共找到 31 个生物活性成份及236 个药物的潜在靶点.其中,川芎哚、豆甾醇、甘草酚、槲皮素、山奈酚等能够干预子宫内膜炎的形成.共采集到了 65 个疾病靶点,蛋白质相互作用(PPI)核心网络共包括 51 个蛋白质,关键蛋白:IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)、Toll受体 4(TLR4)、IL-1β、IL-10、半胱天冬酶(CASP3)等.GO生物过程分析筛查并确定包括光动力疗法诱导的核因子(NF)-κB存活信号、对LPS的反应、凋亡信号通路、TNF反应等生物分析过程;KEGG富集筛选出8条通路,主要涉及到糖尿病并发症的糖基化终未产物(AGE)-糖基化终未产物受体(RAGE)信号通路、流体剪切应力和动脉粥样硬化、乙型肝炎等.结论 生化汤抑制子宫内膜炎可能是通过抑制AGE-RAGE、NF-κB信号通路的传导,从而进一步抑制IL-6、IL-1β、IL-8等细胞因子的释放.

目的:探讨氯硝柳胺对脂多糖(L PS)诱导小胶质细胞炎症作用的影响.方法:建立脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞系BV2炎症反应模型;采用Griess 法检测细胞上清中 NO 释放量, MTT 法检测细胞活性;实时定量 PCR(qPCR)检测促炎症因子iNOS、COX-2、TNF-α和IL-6的表达量.分析氯硝柳胺对小胶质细胞炎症的影响.结果:氯硝柳胺能够显著抑制LPS激活的BV2细胞中NO释放量;qPCR结果显示,与正常细胞组相比,LPS组BV2中促炎因子的表达水平明显升高;氯硝柳胺显著降低LPS诱导的BV2细胞中促炎因子表达.结论:氯硝柳胺对LPS诱导的小胶质细胞炎症反应有明显抑制作用.

目的:研究枸杞多糖对髓样分化因子88(MyD88)非依赖性信号通路的影响,探讨枸杞多糖影响TNF-α生成的机制.方法:采用高糖高脂饲料联合链脲菌素诱导MyD88基因敲除小鼠形成2型糖尿病模型.将造模成功的小鼠随机分为模型对照组、阳性对照组和枸杞多糖组,另取8只小鼠作为健康对照组.干预三个月后,采用实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测小鼠腹腔巨噬细胞中TRAM、TRIF、TRAF6、RIP1和TNF-α基因和蛋白表达,ELISA法测定小鼠血清TNF-α 水平.结果:枸杞多糖抑制了糖尿病小鼠腹腔巨噬细胞中Tram、Trif、Traf6和Tnf-α的基因表达,激活了Rip1基因(均P<0.05),但对TRAM、TRIF、TRAF6、RIP1和TNF-α蛋白表达和血清TNF-α水平无影响(均P>0.05).结论:枸杞多糖可能不能通过MyD88非依赖性信号通路抑制TNF-α的生成.

目的:研究半胱氨酰白三烯(CysLT)受体(CysLT1 R和CysLT2 R)对小鼠BV2小胶质细胞吞噬功能的调节作用.方法:以经典炎症激活剂脂多糖和CysLT受体激动剂LTD4处理BV2细胞,采用免疫荧光计数法和流式细胞仪检测BV2细胞吞噬功能,免疫荧光共染法观察BV2细胞中CysLT1 R和CysLT2 R表达分布.结果:脂多糖和LTD4均能增强BV2细胞吞噬功能,而CysLT1受体选择性拮抗剂孟鲁司特和CysLT2受体选择性拮抗剂HAMI 3379均能抑制脂多糖和LTD4诱导的BV2细胞吞噬功能增强;脂多糖和LTD4激活BV2细胞后可引起CysLT1 R和CysLT2 R在细胞内分布变化,两种亚型的受体分布变化趋势基本一致,且存在共表达.结论:CysLT1 R和CysLT2 R均可以调节BV2细胞的吞噬功能,且两者具有协同性.

目的 观察脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞表达干扰素诱导蛋白(IP)-10的情况及核因子(NF) κB信号通路在其中的作用.方法 分离及培养大鼠腹膜间皮细胞.于脂多糖不同浓度(0、10、100、1 000、10 000 ng/ml)作用3h及脂多糖(100 ng/ml)作用不同时间点(0、1、3、6、12、24、48 h)收集细胞;脂多糖(100 ng/ml)或BAY 11-7085(一种IκBα的磷酸化抑制剂)不同浓度(5μmol/L)预处理2h加脂多糖,作用3h后收集细胞;采用RT-PCR方法检测IP-10 mRNA表达.采用蛋白印迹检测NF-κB p65 (p65)蛋白表达,采用ELISA方法测定IP-10蛋白的表达.结果 与常规培养基对照组相比,10 ng/ml脂多糖组IP-10 mRNA表达显著升高(P＜0.05),1 000 ng/ml脂多糖组最高,但与10 ng/ml脂多糖组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).脂多糖(100 ng/ml)作用下,IP-10 mRNA表达从1h开始升高,3h达到高峰,之后逐渐降低.常规培养的大鼠腹膜间皮细胞结构性表达p-p65蛋白;加入脂多糖后,p-p65蛋白表达显著增加,其中30 min至1h表达最强,之后逐渐降低,至2h仍显著高于常规培养组(P＜0.05).加入5μmol/L BAY11-7085后,脂多糖诱导的IP-10基因和蛋白表达显著降低(P＜0.05).结论 脂多糖以时间依赖和浓度依赖模式上调IP-10的表达.NF-κB信号途径参与调节脂多糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞IP-10的表达.

目的 探究天麻防治头痛的分子作用机制,预测治疗头痛的可能有效的潜在疾病靶标.方法 利用中药整合药理学平台,将天麻化学信息进行靶标预测,与头痛相关疾病靶标信息进行蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络构建,富集分析中药成分、疾病、关键靶标的生物基因功能和相关通路,构建出天麻化学成分、关键作用靶标和疾病相关通路的相互作用网络,绘制"中药-化学成分-关键靶标-通路"网络图.结果 预测的天麻活性成分主要包括酚类、多糖类等,如天麻素、双(4-羟基苯基)醚-β-D-喃葡萄糖、枸橼酸、苍耳苷/β-谷甾醇3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、十六烷酸等;针对天麻防治头痛方面共得到118条核心靶标信息,其中潜在药物靶标(Putative Drug Target)9条,如葡萄糖激酶(GCK)、钠/钾转运的碱性磷酸酶亚基α-1(ATP1A1)、5-磷酸糖异构酶A(RPIA)等,已知疾病靶标(Known Disease Target)27条,如5-羟色胺受体2B(HTR2B)、5-羟色胺受体1B(HTR1B)、5-羟色胺受体1D(HTR1D)、5-羟色胺受体1A(HTR1A)、磷脂酰肌醇3-激酶(PIK3CA)等.结论 该研究在中药整合药理学平台V1.0现有基础上,分析天麻防治头痛的分子作用机制,并预测天麻抗头痛的潜在药物靶标,为天麻的进一步实验研究提供科学依据.

[目的]探讨槲皮素(quercetin,QUE)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的影响及其机制.[方法]将60只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组(每组15只):正常对照组(CON组)、QUE单独处理组(QUE组)、LPS模型组(LPS组)和QUE治疗组(LPS+QUE组).采用腹腔注射LPS(10 mg/kg)构建小鼠ALI模型;CON组及QUE组给予等量生理盐水.QUE组只预先接受灌胃法给予QUE(25 mg/kg);LPS+QUE组在给予LPS之前2 h预先灌胃QUE 25 mg/kg;CON组和LPS组灌胃等量二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO).采用HE染色检测肺组织病理学改变,蛋白质免疫印迹检测肺组织双链RNA依赖的蛋白激酶ER激酶(PERK)和细胞凋亡途径关键蛋白的表达.通过检测肺组织丙二醛(MDA)/谷胱甘肽(GSH)改变反映氧化应激水平,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞、炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β]及肺组织中髓过氧化物(MPO)活性反映炎症程度.[结果]QUE单独处理(QUE组)对小鼠肺组织的组织病理学和炎症指标无影响.腹腔注射LPS可诱导小鼠肺组织病理损伤,增加BALF中细胞总数和中性粒细胞的数量,升高MPO活性,同时增加BALF中TNF-α、IL-6和IL-1β等炎症因子含量.而给予QUE预处理(LPS+QUE组),可显著性减轻上述改变;WB检测结果发现,QUE预处理可抑制内质网应激PERK信号途径相关蛋白的表达,减轻细胞凋亡途径关键蛋白caspase-3的表达.[结论]槲皮素可通过抑制内质网应激、氧化应激及炎症反应,减轻LPS诱导的小鼠ALI,其机制与抑制内质网应激PERK信号途径有关.

目的 探讨葛根素对脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肾损伤的改善作用及其相关机制.方法 将24只BALB/C小鼠随机分为4组,葛根素组以50 mg/kg葛根素灌胃,地塞米松组(阳性对照)腹腔注射5 mg/kg的地塞米松,模型组和对照组灌胃给予同等容量的生理盐水.葛根素组和地塞米松组小鼠预防性给药1h后,腹腔注射10 mg/kg LPS刺激12 h.采用苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠肾组织形态学改变,同时检测肾功能指标血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测小鼠血清中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量,Western blotting法检测肾组织中炎症蛋白诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶2(COX2)的表达.结果 与对照组比较,LPS诱导急性肾损伤小鼠肾组织中可见肾小管坏死中心的产生,血清中BUN和Cr的水平显著升高(F=51.55、102.75,P<0.01),血清中炎症因子TNF-α和IL-6的含量显著增加(F=3338.15、1226.85,P<0.01),肾组织中炎症蛋白iNOS和COX2的表达显著升高(F=21682.77、4497.00,P<0.01);葛根素预防给药1 h能显著改善LPS引发的上述变化(P<0.01).结论 葛根素对LPS诱导的急性肾损伤具有明显的改善作用,同时可明显减少炎症因子的释放及降低炎症蛋白的表达,提示抗炎可能是葛根素治疗急性肾损伤的药理学基础.

恶性肿瘤长久以来威胁着人类的健康,传统中药通关藤的茎和根以及其他部位已被广泛用于治疗恶性肿瘤、哮喘病、风湿病和气管炎等.近年越来越多的研究聚焦于通关藤的抗肿瘤作用,由通关藤的提取物制成的消癌平制剂在临床上广泛用于治疗肝癌、肺癌、食道癌和胃癌等.至今为止,已从通关藤的各个部位提取鉴定出包括C21甾体皂苷、甾醇/环醇类、有机酸类、多糖类、三萜类、脂肪酸类、酯类等在内的几百种化学成分.C21甾体皂苷类为通关藤的首要特征和抗肿瘤活性成分.现代药理学研究证明通关藤在体内外均有抗肿瘤活性,主要体现在抗肝癌、肺癌、血液系统肿瘤、食管癌、胃癌、乳腺癌等.通关藤的单方制剂消癌平的常用剂型有片剂、糖浆、注射液、口服液、胶囊等,主要用于治疗肝癌、食道癌、非小细胞肺癌、胃癌、结肠癌、宫颈癌、乳腺癌和白血病等.通关藤及其制剂抗肿瘤作用的主要机制包括直接抗肿瘤作用,具体体现为抑制癌细胞增殖、调节肿瘤细胞血管生成、介导细胞凋亡、促进分化等,还包括对其他抗癌药物的增效减毒作用.主要综述通关藤抗肿瘤作用的主要成分和作用机制的近年研究进展及现状,旨在为通关藤的应用开发以及抗肿瘤药物的研发提供参考.