目的:观察猪脱细胞真皮基质(pADM)在小鼠创面修复过程中对蛋白激酶B(Akt)及β-连环蛋白(β-catenin)表达水平的影响。方法:猪皮经脱细胞处理后制成微粒皮，15只C57BL/L小鼠在脊柱左右各制作直径为6 mm的圆形皮肤缺损，左侧以纱布覆盖，常规护理，右侧以pADM覆盖，不作特别处理，按处理方法分为pADM组(实验组)及纱布组(对照组)，建模后第1、2、3、4、6周每次取3只小鼠处死，并取创面组织，使用免疫组织化学方法检测Akt及β-catenin在组织中的表达。组间比较采用 t检验。 结果:在模型建立后的第1、2、3、4、6周，实验组各时间点AKT蛋白表达量两两比较差异均有统计学意义(4 022.02±652.42、1 160.12±225.60、3 422.17±675.91、324.15±64.67、27.26±4.49， t1-2＝9.458、 t2-3＝-4.839、 t3-4＝8.776、 t4-6＝7.436， P<0.05)。同时对照组蛋白表达在各时间点间有统计学意义(1 110.98±219.14、337.13±61.37、118.80±18.08、834.98±64.19、395.70±76.79， t1-2＝8.802、 t2-3＝4.951、 t3-4＝-19.584， t4-6＝6.835， P<0.05)。第2、3、4、6周时实验组(1 160.12±225.60、3 422.17±675.91、324.15±64.67、27.26±4.49)及对照组(337.13±61.37、118.80±18.08、834.98±64.19、395.70±76.79)的蛋白表达差异有统计学意义( t2＝8.574、 t3＝8.694、 t4＝-10.183、 t6＝-7.880， P<0.05)，其他组差异无统计学意义(4 022.02± 652.42、1 160.12±225.60， t1＝-0.363， P>0.05)。实验组各时间点β-catenin蛋白表达量两两比较差异均有统计学意义(3 646.32±687.04、8 447.29±1 181.79、9 488.65±1 439.52、6 158.74±1 083.52， t1-2＝-6.626、 t3-4＝12.101， P<0.05)，对照组蛋白表达在各时间点间有统计学意义(4 364.09±811.29、2 187.85±424.84、2 752.27±500.01、7 522.95±1 109.30、2 592.14±474.23， t1-2＝-4.334、 t3-4＝-5.594、 t4-6＝12.154， P<0.05)，实验组(8 447.29±1 181.79、9 488.65±1 439.52)及对照组(2 187.85±424.84、2 752.27±500.01)两组间的β-catenin的蛋白表达在第2、3周时差异有统计学意义( t2＝9.351、 t3＝-9.225， P<0.05)，其他组差异无统计学意义(3 646.32±687.04、6 158.74±1 083.52、5 487.60±1 068.96；4 364.09±811.29、7 522.95±1 109.30、2 592.14±474.23， t1＝0.377、 t4＝0.386、 t6＝0.051， P>0.05)。实验组及对照组两组间的Akt及β-catenin蛋白在创面组织中的表达，均于第2周开始升高，于第3周达高峰，具有相似的变化趋势。 结论:pADM可能是通过影响Akt/β-catenin信号通路的表达从而影响创面愈合。

目的:观察采用液氮保存GGTA1/β4GalNT2双基因敲除近交系五指山小型猪猪皮异种移植的效果。方法:采用冻存双基因敲除猪断层皮片及市售基因转染猪皮进行异种移植。切取双基因敲除猪皮后采用玻璃化方法储皮，使用时复温。受体为恒河猴，分为实验组和对照组，每组4只。于每只猴背部切除4块4 cm×4 cm的皮肤，形成全层皮肤切除模型，分别移植冻存双基因敲除猪皮和基因转染猪皮。术后不同时间点观察皮片成活情况，通过颜色、质地等评估皮片活力，留取标本进行病理检查；于术前及术后4、7、10、14、21 d取血清，检测IL-2、IL-4、IFN-γ、IL-12含量。结果:实验组猪皮存留于创面时间[10～21(14.5±3.4)d]长于对照组[7～14(10.6±2.7)d]，差异有统计学意义(t＝3.272，P＝0.004)。术后第4天两组皮片均活力良好；术后第7天，实验组2个皮片局部有小水疱，对照组6个皮片皮下有大水疱；术后第10天，实验组5个皮片被完全撕脱，6个皮片整体仍温暖、柔软，对照组4个皮片整体仍温暖、柔软；术后第12天，实验组和对照组分别有3个、1个皮片整体仍温暖、柔软；术后第14天，实验组1个皮片仍保持温暖、柔软，对照组皮片则全部失活。病理观察显示，两组术后第4天皮片组织形态均完整；术后第7天，实验组皮片表皮细胞结构完整，对照组皮片表皮层细胞数量减少，两组均可见部分皮片与基底床形成嫁接；术后第10天，实验组表皮层细胞数量减少，表皮与真皮交界面局部分离，对照组表皮层细胞数量较前进一步减少，仍可见部分皮片与基底床嫁接现象；术后第14天，实验组表皮层细胞数量明显减少，仍可见嫁接现象，对照组可见基底床炎细胞浸润。实验组术后第10天血清IL-2和IL-4水平、术前与术后第4天血清IFN-γ水平、术后第14天血清IFN-γ/IL-4高于对照组。结论:采用冻存GGTA1/β4GalNT2双基因敲除近交系五指山小型猪猪皮移植后皮片存留于创面情况良好，可获得较长的创面存留时间。

目的 对比脱细胞猪皮与异体皮作为覆盖物应用于大面积烧伤微粒皮移植的效果.方法 82例大面积烧伤患者根据不同术式分组,各41例.对照组采用异体皮覆盖自体微粒皮移植术治疗,对照组实施脱细胞猪皮覆盖自体微粒皮移植术治疗.对比两组术前、术后2周血白细胞计数(WBC)、中性粒细胞比例(NEUT％)、淋巴细胞绝对值(LYMPH)及血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLOB)]水平.结果 观察组术后2周WBC、NEUT％、LYMPH均低于对照组(P＜0.05);TP、ALB、GLOB水平均高于对照组(P＜0.05).结论 脱细胞猪皮覆盖自体微粒皮移植术治疗大面积烧伤可改善机体免疫功能,能减轻全身炎性反应,疗效确切.

目的 通过小鼠全层皮肤损伤模型研究脱细胞猪皮细胞外基质(ECM)在皮肤再表皮化过程中发挥的作用.方法 50~80日龄长白猪6只,经取皮、去毛、漂洗、生物酶法脱细胞,HE和免疫组化染色后,对脱细胞猪皮的DNA残余,ECM主要成分胶原(Ⅰ~Ⅴ型)和硫酸糖胺聚糖进行检测.24只NOD-SCID小鼠经背部直径1 cm全层皮肤创伤切口模型构建后,随机分为两组,每组12只,分别使用生理盐水和ECM处理伤口,连续28 d观察伤口形态,分别在第3、7、14、28天对动物模型伤口皮肤取材,HE染色观察实验组和对照组创伤修复过程.结果 猪皮经去细胞处理变得透明且失去皮肤纹理,经HE染色和DAPI染色,显示无细胞核残留;免疫组化染色显示胶原蛋白、纤连蛋白、弹性蛋白和透明质酸并未因去细胞过程而有较大丢失,基底膜主要构成Ⅳ型胶原、层连蛋白、巢蛋白及串珠素全部保留.经天狼星红染色,脱细胞猪皮中Ⅰ型和Ⅲ型胶原的含量和分布与正常猪皮组织相比未见明显变化.生理盐水组小鼠第28天时,创口愈合,ECM组创口在14 d时愈合,其创伤愈合速度有显著提高.HE染色证实ECM组在第7天时,出现再表皮化进程,第14天时,再表皮化完成,生理盐水组在第28天发生完全的再表皮化.结论 经过酶法获得的脱细胞猪皮基质未见细胞核残余,其主要成分得到保留.猪皮ECM明显促进创伤愈合的速度.

目的:探讨生物敖料Ⅱ型(脱细胞猪皮)作为肉芽创面小皮片移植后覆盖物的临床效果.方法:22例肉芽创面植皮患者,肉芽创面总面积为5％～8％ TBSA,随机分为观察组和对照组.肉芽创面在小皮片移植后应用生物敷料Ⅱ型覆盖为观察组,以凡士林纱布覆盖为对照组,两组各11例.以视觉模拟评分(VAS评分)作为疼痛评分,比较两组术后第5天换药前和换药后30 min疼痛评分、平均换药次数、平均愈合时间;两组创面愈后予以相同的瘢痕康复治疗及功能锻炼,创面愈合后3个月采用温哥华瘢痕评分量表(VSS)评价瘢痕增生情况.结果:术后第5天首次换药,换药前30 min VAS评分:观察组(2.63±0.67)分,对照组(3.54±1.21)分;换药后30 min VAS评分:观察组(3.09±1.13)分,对照组(7.63±0.92)分;观察组换药前、后VAS评分均明显低于对照组(P＜0.05);观察组换药次数(5.27±1.19)次,对照组为(10.27±2.79)次,观察组换药次数明显少于对照组(P＜0.05);观察组愈合时间为(13.09±3.20)d,对照组为(19.27±2.32)d,观察组创面愈合时间明显缩短(P＜0.05);创面愈合后3个月瘢痕VSS评分,观察组:色泽(1.90±0.70)分,血管分布(1.63±0.67)分,厚度(2.36±0.80)分,柔软度(2.72±0.78)分,对照组分别为(3.18±0.87)、(2.36±0.67)、(3.27±0.64)、(4.00±0.89)分,观察组明显优于对照组(P＜0.05).结论:与传统的凡士林纱布相比,生物敷料Ⅱ型作为肉芽创面小皮片移植后覆盖物可以减轻患者植皮术后的换药疼痛、减少换药次数、加快创面的愈合、减轻瘢痕增生,效果良好.

目的 探讨猪脱细胞真皮基质(ADM)对小鼠创面毛囊再生中基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及Wnt3a/β-catenin信号通路表达的影响.方法 取新鲜猪皮,经脱细胞处理后制成微粒状,灭菌,密封,常温保存,以备后面实验使用.制作18只C57 BL/6小鼠背部全层皮肤缺损模型,以脊柱为中线,在左右各制作直径为6 mm的缺损,左右侧分别以纱布和猪ADM覆盖,隔天纱布侧换药,猪ADM侧不做处理,于模型建立第7天,按照所用材料不同分为纱布组与猪ADM组,再按所取部位不同分为纱布窗口组、猪ADM窗口组、纱布创面组、猪ADM创面组、纱布创缘组、猪ADM创缘组,其中9只小鼠组织用于蛋白质印迹法检测,另外9只小鼠组织用于免疫组织化学检测.通过蛋白质印迹法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、β-catenin、转化生长因子-β(TGF-β)、Wnt3a、血管内皮生长因子(VEGF)、SDF-1、成纤维细胞生长因子(FGF)2、FGF9、AKT的蛋白表达,免疫组织化学检测Wnt3a、SDF-1、FGF2、FGF9的表达.数据比较采用独立样本t检验.结果 在小鼠模型建立第7天创面中,蛋白质印迹法检测β-catenin、Wnt3a、SDF-1的蛋白表达量均是猪ADM窗口组(0.533±0.058、0.446±0.039、0.972±0.048)高于纱布窗口组(0.401±0.005、0.132±0.022、0.175 ±0.036),差异均有统计学意义(￡=3.996、12.230、23.130,P值均小于0.05).β-catenin、Wnt3a、SDF-1的蛋白表达量均是猪ADM创面组(0.557±0.009、0.626±0.066、0.868 ±0.102)高于纱布创面组(0.302 ±0.010、0.109±0.019、0.036±0.009),差异均有统计学意义(t=32.830、13.020、14.130,P值均小于0.05).Wnt3a、SDF-1的蛋白表达量均是猪ADM创缘组(0.419±0.014、0.370±0.069)高于纱布创缘组(0.115±0.020、0.056±0.007),差异均有统计学意义(t=21.460、7.825,P值均小于0.05).免疫组织化学检测结果显示Wnt3a、SDF-1、FGF2、FGF9在猪ADM组中的表达高于纱布组,且阳性细胞主要分布于毛囊细胞周围.结论 猪ADM在小鼠创面中可能通过上调SDF-1及Wnt3a/β-catenin信号通路的表达而促进毛囊的再生.

目的 分析脱细胞猪皮覆盖自体微粒皮治疗大面积深度烧伤的疗效及护理满意度.方法 收集该院大面积深度烧伤患者60例,均采用脱细胞猪皮覆盖自体微粒皮的治疗方案.根据护理干预方式的不同分为研究组与对照组,每组30例,其中对照组进行常规护理,而研究组采用舒适护理.比较两组温哥华瘢痕评分、术中术后情况、康复效果及护理满意度.结果 研究组患者的输液总量、输注红细胞量、手术时间和手术人数均明显少于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05) ;研究组患者愈合时间、创面一期愈合率、植皮存活率、死亡率、住院天数和康复效果优良率均明显优于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05) ;研究组护理满意度明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 脱细胞猪皮覆盖自体微粒皮可成为治疗大面积深度烧伤的理想覆盖物,对创面的修复效果理想,而在治疗过程中给予患者舒适护理干预则是治疗成功的关键因素.

目的 初步探讨脂肪脱细胞基质(decellularized adipose tissue,DAT)联合封闭式负压引流(vacuum sealing drainage,VSD)对猪创面炎症反应的影响.方法 取自愿捐赠人脂肪组织,经反复冻融、胰蛋白酶消化及异丙醇萃取制备DAT.大体观察冻干前后DAT外观,HE染色观察其结构和脱细胞效果.取雄性巴马小型猪18只,于每只猪背部制备4个直径4 cm皮肤软组织创面,并随机分为4组;其中,DAT/VSD组创面DAT覆盖联合VSD治疗,DAT组创面单纯DAT覆盖,VSD组创面采用VSD治疗,对照组创面无菌纱布覆盖.治疗后第3、7、10、14天取创面组织,HE染色观察中性粒细胞浸润情况,实时荧光定量PCR检测炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α以及M1型、M2型巨噬细胞表型标记物诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、精氨酸酶1 (arginase 1,ARG-1) mRNA的表达情况,ELISA检测iNOS、ARG-1含量.结果 大体及HE染色观察示DAT呈疏松多孔结构,未见细胞残留.动物实验组织学观察显示,治疗后第3天DAT/VSD组中性粒细胞计数低于对照组和DAT组(P＜0.05),与VSD组比较差异无统计学意义(P＞0.05);第7、10、14天,DAT/VSD组中性粒细胞计数明显低于其他组(P＜0.05).实时荧光定量PCR检测显示,治疗后第3、7、10、14天,DAT/VSD组创面组织IL-1β、IL-6、TNF-α和iNOS mRNA表达均低于其他组,而ARG-1 mRNA表达升高(P＜0.05).ELISA检测显示,DAT/VSD组治疗后第3、7、10、14天创面组织iNOS含量均低于其他组(P＜0.05),ARG-1含量高于其他组(P＜0.05).结论 DAT联合VSD治疗猪皮肤软组织创面,可以减少继发于炎症反应的组织损害,效果优于二者单独使用以及常规换药.

背景:半月板损伤的再生修复目前仍然是一个科学性难题,构建具有良好生物力学性能与细胞相容性的组织工程支架至关重要.目的:制备脱细胞猪皮基质支架,评价其生物力学性能和细胞相容性.方法:采用胰蛋白酶、Triton X-100、十二烷基磺酸钠组合对猪皮进行脱细胞处理,获得脱细胞猪皮基质,采用DAPI染色观察脱细胞效果,扫描电镜观察其微观结构.通过组织学染色、胶原和糖胺多糖定量及生物力学检测对比脱细胞猪皮基质与天然半月板的差异.将第3代骨髓间充质干细胞接种于脱细胞猪皮基质上,培养3 d后分别进行扫描电镜、死/活细胞染色和鬼笔环肽染色观察.结果 与结论:①DAPI染色显示,脱细胞猪皮基质无细胞核结构;扫描电镜显示,脱细胞猪皮基质表面较为粗糙,表面纤维呈拓扑学结构;②组织学染色显示,天然半月板组织含有丰富的细胞外基质,半月板细胞在基质中均匀分布,胶原纤维致密且排列规则,胶原成分主要以Ⅰ型胶原纤维为主,含有糖胺多糖成分;脱细胞猪皮基质无细胞核,呈疏松的纤维条索状,有较多的孔隙结构,胶原成分主要以Ⅰ型胶原纤维为主,含有糖胺多糖成分;③脱细胞猪皮基质的胶原含量、拉伸弹性模量与天然半月板比较差异无显著性意义(P>0.05),糖胺多糖含量、压缩弹性模量低于天然半月板(P<0.05),并且脱细胞猪皮基质的生物力学性能足够承受膝关节的负荷、保持支架的完整;④扫描电镜显示,骨髓间充质干细胞黏附分布在猪皮基质的孔隙结构中,细胞呈椭圆形,聚集生长;⑤死/活细胞染色显示,脱细胞猪皮基质上的骨髓间充质干细胞具有较高的活性(94.0±3.8)％;⑥鬼笔环肽/DAPI染色显示,骨髓间充质干细胞在脱细胞猪皮基质上呈现出很好的铺展状;⑦结果表明,脱细胞猪皮基质与天然半月板具有类似的胶原成分,呈现出良好的生物力学性能和细胞相容性,有利于细胞的黏附和生长.

目的 探讨猪皮来源的组织工程生物补片对实验猪阴道缺损模型阴道重建的效果.方法 建立中国小型实验猪的阴道缺损模型并植入组织工程生物补片重建阴道.在术后1、2、4、6、8周分别取阴道全层,每次1只,其中第4周两只.手术前取其中2只实验猪的正常阴道作为对照组.对不同时间段的阴道全层进行HE染色以观察组织的生长情况;免疫组化检测上皮光谱角蛋白AE1/AE3、层粘连蛋白Laminin和平滑肌肌动蛋白α-actin,以表征重建阴道的上皮生长、完整程度和平滑肌生长;VG染色评价胶原纤维的生成情况.结果 HE染色可见重建阴道2周后出现新生黏膜;8周后新生阴道上皮结构与正常阴道无明显差异.AE1/AE3蛋白的免疫组化染色表明上皮组织的存在.Laminin的免疫组化染色提示新生阴道黏膜内基底膜成分的生成.VG染色和α-actin的表达结果显示阴道重建8周后可生成完整的胶原纤维和平滑肌肌束,且排列整齐.结论 同源组织工程生物补片进行阴道重建时可形成完整的阴道黏膜和平滑肌,与正常阴道结构相似.