离断肢（指）体再植是挽救创伤性肢（指）体离断的首要治疗方法,如何提高手术的成功率以及术后的功能恢复至关重要。人的肢（指）体一旦离体后血液循环将停止,正常的生理代谢会被打乱,从而出现细胞变性、组织坏死等一系列的生理、病理变化,极大地影响肢（指）体再植的治疗效果。因此，如何科学地降低离断肢（指）体组织的代谢和减轻后续的缺血再灌注损伤,提高肢（指）体再植术成功率,是肢（指）体再植领域的热点问题。本文就现有的肢（指）体保存方法研究现状以及进展做出综述,通过大量检索和分析文献,总结了目前肢（指）体保存方法的优缺点,希望借此能为临床保存离断肢体提供参考。

器官移植领域中供体的缺乏是全世界面临的困境，从传统的静态低温保存技术到近年来逐步进入临床应用的体外机械灌注技术，不断提高供体器官（如肝脏、肾脏、心脏和肺脏等）的保存和维护成功率，并拓展至其他器官的保护以及联合治疗性目的、特殊紧急场景的应用等。随着该技术应用于器官的获取、接收、分配、转运和移植多个临床环节，多种因素会引入风险或影响最终效果评价。本文从项目整体风险评估的角度，梳理器官机械灌注技术发展的前沿领域以及未来项目开发和临床研究的挑战。来自监管方、研究机构、企业等组成协同网络，将从政府监管决策和项目管理人主导的技术决策层面，推动项目的实施和应用，最终提升我国作为器官移植大国和制造强国的地位。

人类生殖细胞低温冷冻作为生育力保存的一种方式，在辅助生殖技术（assisted reproductive technology，ART）发展中起着重要作用，目前该技术已成为生殖医学领域的研究热点之一，并在辅助生殖实践中得到越来越广泛的应用。为提高ART的成功率，冷冻保存技术在发展中不断改进，尤其是冷冻策略的选择和冷冻保护剂的改良与优化。冷冻保存技术适用于行ART治疗或是因疾病导致的生育力下降而进行的卵母细胞、精子、胚胎冷冻保存的群体，也适用于癌症患者为保存生育力而进行的卵巢及睾丸组织冷冻保存。然而，不同的冷冻方法对于不同生殖细胞类型的冷冻效果并不一致，且目前不同生殖细胞冷冻效果的评价尚缺乏合理有效的标准。本文综述了人类生殖细胞低温冷冻保存技术的发展现状及应用，并探讨了低温保存未来的发展方向。

目的:了解云南松鼠是否携带鼠疫噬菌体，并探讨其流行病学意义。方法:2015 - 2018年，在云南鼠疫疫源地和非疫源地的5个调查点进行鼠疫宿主动物调查。对调查中捕获的松鼠，取其脾、肝、肠道标本，低温保存备用。取肠道标本磷酸盐缓冲液（PBS）增菌液，经0.22 μm滤膜滤过后加入到含有100 μl鼠疫疫苗株（EV76）菌悬液的LB液体培养基中，28 ℃、220 r/min恒温气浴振荡培养18~24 h，采用双层平板法观察噬菌斑的生长情况，电镜下观察鼠疫噬菌体的形态结构；同时取脾、肝、肠道标本进行鼠疫菌特异标志基因caf1检测。结果:共捕获到10只松鼠，其中赤腹松鼠8只，珀氏长吻松鼠2只。共分离出4株鼠疫噬菌体，其中在赤腹松鼠分离出2株，在珀氏长吻松鼠分离出2株；家鼠鼠疫疫源地弥勒县和新平县各分离出1株，野鼠鼠疫疫源地剑川县和洱源县未分离出，非鼠疫疫源地永善县分离出2株。肉眼下观察，家鼠鼠疫疫源地分离出的2株噬菌体产生的噬斑为透明状，生长状态良好；非鼠疫疫源地分离出的2株噬菌体产生的噬斑为半透明状，生长状态欠佳。电镜下观察，噬菌体为较典型的肌尾噬菌体，噬菌体头部直径约40 nm，肌尾约120 nm，肌尾末梢可见尾丝簇。10份松鼠脾、肝、肠道标本caf1检测均为阴性。结论:云南松鼠中携带鼠疫噬菌体的比例较高，虽然鼠疫菌特异标志基因caf1检测均为阴性，但由于鼠疫噬菌体的存在，松鼠有可能成为鼠疫菌传播的一种载体。

目的:比较冻融周期中单囊胚与双囊胚移植的妊娠结局。方法:回顾性分析2012年1月至2016年12月于南宁市第二人民医院生殖医疗中心行冻融囊胚移植的3 675个周期。根据移植囊胚的数量和质量进行分组：（1）单囊胚组：包含单优组（移植1个优质囊胚）和单非优组（移植1个非优质囊胚）；（2）双囊胚组：包括双优组（移植2个优质囊胚）、单优单非优组（移植1个优质囊胚+1个非优质囊胚）和双非优组（移植2个非优质囊胚）。进一步按患者年龄分层：<35岁、35~40岁和>40岁。比较单囊胚与双囊胚移植的着床率、临床妊娠率、多胎妊娠率、活产率、早产率、流产率的差异。结果:（1）单囊胚组患者年龄大于双囊胚组［分别为（33.2±4.7）和（31.5±4.3）岁］，两组比较，差异有统计学意义（ P<0.05）；两组子宫内膜厚度、人工周期占比均无显著差异（ P>0.05）。双囊胚组着床率、临床妊娠率、多胎妊娠率、早产率和活产率均显著高于单囊胚组（ P<0.05），而流产率则显著低于单囊胚组（ P<0.01）。（2）在<35岁患者中，双囊胚组多胎妊娠率和早产率显著高于单优组（ P<0.01），双非优组的临床妊娠率、多胎妊娠率、活产率均显著高于单非优组（ P<0.01）。（3）在35~40岁患者中，双优组临床妊娠率、多胎妊娠率、活产率均显著高于单优组（ P<0.01）；而单优单非优组和双非优组的临床妊娠率、活产率与单优组无显著差异（ P>0.05），多胎妊娠率和早产率却显著增加（ P<0.01）。双非优组的临床妊娠率、活产率、多胎妊娠率均显著高于单非优组（ P<0.01）。（4）在>40岁患者中，与单优组比较，双优组并未显著提高临床妊娠率和活产率（ P>0.05），单优单非优组的着床率和双非优组的临床妊娠率均显著下降（ P<0.05）。双非优组与单非优组的着床率、临床妊娠率和活产率无显著差异（ P>0.05）。 结论:无论患者年龄如何，若存在优质囊胚，应优先选择单优质囊胚移植；若无优质囊胚，也应考虑单囊胚移植，以期降低多胎妊娠风险，提高累积活产率，改善妊娠结局。

扩大标准供肝是缓解目前移植供肝短缺的重要举措，但由此产生移植术后并发症增加及移植物存活率下降，促使供肝质量优化方式诞生及发展。尤其是机械灌注的发展，对改善供器官质量具有划时代的意义，其中器官保存液的研发尤为重要，本文就供肝低温保存液的发展历程及具体作用作一综述。

目的:探讨自然周期使用人绒毛膜促性腺激素（hCG）诱导排卵日卵泡大小对冻融胚胎移植临床结局的影响。方法:回顾性分析2016年1月至2019年12月在南京大学医学院附属鼓楼医院接受冻融单囊胚移植患者，采用hCG诱导排卵的自然周期方案共427个周期的临床资料，根据hCG诱导排卵日最大卵泡直径分为15~16 mm组（≥15且≤16 mm， n=66），16~17 mm组（>16且≤17 mm， n=101），17~18 mm组（>17且≤18 mm， n=125），18~20 mm组（>18且≤20 mm， n=109），>20 mm组（>20 mm， n=26），比较各组的hCG诱导排卵日雌二醇和黄体生成素（LH）水平，并对比各组的临床妊娠率、流产率及活产率。 结果:hCG诱导排卵日雌二醇及LH水平5组患者总体比较，差异均有统计学意义（ P均<0.05）。5组（15~16 mm组至>20 mm组）hCG诱导排卵日雌二醇水平逐渐升高；15~16 mm组雌二醇水平（中位数为1 002.3 pmol/L）明显低于17~18 mm组、18~20 mm组、>20 mm组（中位数分别为1 103.3、1 171.2、1 539.0 pmol/L），两两比较，差异均有统计学意义（ P=0.034、 P<0.001、 P=0.002）。5组（15~16 mm组至>20 mm组）hCG诱导排卵日LH水平呈降低趋势；15~16 mm组LH水平（中位数为37.73 U/L）明显高于17~18 mm组、>20 mm组（中位数分别为28.24、24.11 U/L），两两比较，差异均有统计学意义（ P=0.007、 P=0.006）。5组患者的临床妊娠率、流产率及活产率分别比较，差异均无统计学意义（ P均>0.05）。 结论:在冻融胚胎单囊胚移植，使用hCG诱导排卵的自然周期方案中，小卵泡排卵者能够得到与正常大小卵泡者相似的临床结局。

目的:建立大鼠供肝常温机械灌注(NMP)模型，比较不同门静脉灌注压力对热缺血大鼠肝损伤修复的影响。方法:经心脏停搏30 min、冷保存8 h的大鼠肝脏，使用肝动脉供氧、常温双通道灌注肝脏体系后，比较门静脉常压(M1组， n＝6)和低压(M2组， n＝6)灌注对肝灌注液流量和肝酶学指标的影响，并使用HE染色和Suzuki标准评定肝脏病理损伤，免疫组化检测中性粒细胞和巨噬细胞活化的指标髓过氧化物酶(MPO)和CD68表达，检测肝组织脂质过氧化产物丙二醛含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。心脏停搏30 min、冷保存8 h的大鼠作为静态低温保存组(CS组， n＝6)。 结果:保持门静脉灌注压力恒定的大鼠肝脏常温机械灌注模型建立后，随着灌注时间的延长，门静脉灌注流量呈增高趋势，NMP 60～120 min时灌注流量较0～20 min均增高( P<0.05)。与CS组比较，M1组肝淤血、肝细胞坏死、脂肪变性减轻，Suzuki评分减少( P<0.05)。与M1组比较，M2组的灌注液的肝酶学指标下降( P<0.05)，镜下观察M2组肝细胞坏死、脂肪变性、肝窦扩张减轻，Suzuki评分减少( P<0.05)；肝组织MDA含量降低、SOD活力升高( P<0.05)；肝组织CD68和MPO表达、TNF-α和IL-6水平降低( P<0.05)，以上差异均有统计学意义。 结论:建立大鼠常温双通道机械灌注模型，有效模拟肝灌注的生理状态；门静脉低压灌注后肝缺血再灌注损伤减轻，更有利于热缺血大鼠供肝损伤的修复。

目的:探讨复发性交界性卵巢肿瘤患者保留生育力的手术方法和辅助生殖技术助孕策略。方法:回顾性分析1例复发性交界性卵巢肿瘤患者的病例资料。该患者因双侧卵巢复发性交界性肿瘤，多次入院治疗行右附件切除术和左附件囊肿剥除术。患者未避孕3年未孕，考虑该患者强烈的生育需求，采用微刺激方案进行促排卵治疗，辅助生殖技术助孕过程中左侧卵巢肿瘤显著增大，随后行腹腔镜下左附件切除术，选取健康的卵巢皮质冷冻保存，以保留生育能力。结果:患者共经历了5次控制性促排卵，形成了7枚可利用胚胎。患者于第3次冻胚周期移植获得成功妊娠，并分娩一活婴。患者尚有2枚胚胎和3片卵巢组织冻存。结论:年轻且有生育需求的交界性卵巢肿瘤患者，可实施保留生育能力的手术和辅助生殖技术助孕，虽在一定程度上可能会导致疾病复发风险提高，但并不影响患者的生存质量，且使得患者的生育愿望得到实现。

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)/内皮祖细胞(EPC)作为种子细胞构建的基质依赖型组织工程骨(ECM-TEB)修复大鼠股骨缺损的效果。方法:分离培养骨髓来源的MSC和EPC并进行功能鉴定，种植上架于纳米晶胶原基人工骨颗粒，培养14 d后冻干，获得MSC/EPC ECM-TEB和MSC ECM-TEB。扫描电镜观察MSC和EPC在支架表面的生长形态。分别提取MSC ECM-TEB蛋白浸提液(对照组)和MSC/EPC ECM-TEB蛋白浸提液(实验组)，加入EPC培养系统中进行迁移、划痕修复、管腔形成检测；另加入MSC培养系统中进行茜素红染色和碱性磷酸酶(ALP)染色检测，观察两组细胞募集、血管生成和成骨分化情况。选取12只SD大鼠，建立股骨缺损模型，按照随机数字表法分为：(1)假手术组：仅在缺损处进行清创处理；(2)MSC ECM-TEB组：在缺损处植入MSC ECM-TEB；(3)MSC/EPC ECM-TEB组：在缺损处植入MSC/EPC ECM-TEB，每组4只大鼠。2个月后行Micro-CT检查和缺损区Masson三色染色观察骨缺损修复情况。冻干后低温保存3个月，采取同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)标记蛋白质谱检测MSC ECM-TEB和MSC/EPC ECM-TEB在成血管方面的差异，并采用基因本体论/京都基因与基因组百科全书技术(GO/KEGG)功能富集方法分析其原因。结果:MSC和EPC在支架表面生长、增殖良好，形成光滑的细胞层状结构。实验组在细胞迁移数、划痕修复比例和管腔形成长度分别为(121.6±8.3)个、(61.5±5.9)%、(11.3±0.6)mm，较对照组显著增多[(85.0±6.7)个、(39.3±3.6)%、(5.9±0.4)mm]( P均<0.01)。茜素红染色和ALP染色结果显示，实验组钙结节矿化面积比例显著增加[(38.8±3.3)%∶(49.9±3.0)%、(38.8±2.4)%∶(45.3±3.3)%] ( P均<0.05)。Micro-CT和Masson染色结果表明，MSC/EPC ECM-TEB组骨缺损修复良好，MSC ECM-TEB组仅形成少量新骨，假手术组几乎没有新骨形成；骨体积分数、骨小梁数量和骨小梁厚度差异均有统计学意义( P<0.05)。蛋白质谱分析结果表明，与MSC ECM-TEB组相比，MSC/EPC ECM-TEB组中有83个血管生成相关的因子显著上调(差异倍数>2， P<0.05)；GO/KEGG功能富集分析显示，与MSC ECM-TEB相比，MSC/EPC ECM-TEB在"血管发育"等生物过程存在明显差异( P<0.01)，"血管平滑肌收缩通路"等显著增强( P<0.01)。 结论:与MSC ECM-TEB相比，MSC/EPC ECM-TEB在细胞募集、血管生成和新骨生成方面显著增强，是一种更佳的可用于创伤性骨缺损修复的组织工程骨构建策略。