艾美耳球虫是鸡球虫病的病原体，采用疫苗防治是当前研究的热点之一。其表面抗原是一种有效的疫苗候选分子，本文对卡介苗（BCG）、乳酸乳球菌（LL）、植物乳杆菌（LP）、鼠伤寒沙门氏菌（St）、枯草芽孢杆菌（Bs）、粪肠球菌（Efs）、大肠埃希菌（Ec）、蓝细菌（CB）、酵母、蜥蜴利什曼原虫（Lt）、鸡痘病毒（FPV）、火鸡疱疹病毒（HVT）、牛痘病毒（VV）和昆虫杆状病毒等载体介导的艾美耳球虫表面抗原疫苗的研制现状做一概述，以期为新型疫苗的开发和应用提供参考依据。

目的 了解福建省实验兔球虫的感染情况.方法 采集福建省6个地级市2家实验兔生产企业和12家使用单位的实验兔粪样,通过饱和盐水漂浮法对卵囊进行收集,测定每克粪便中卵囊数(OPG)并对孢子化的卵囊进行鉴定.结果 本次调查共收集和分析了195个样本,阳性样本28个,总感染率为14.36％,OPG平均值为2 333.33.2个实验兔生产企业感染率为22.22％,12家实验兔使用单位感染率为13.10％.共检出10种兔球虫,均为混合感染,以斯氏艾美耳球虫为优势虫种.普通级实验兔的球虫感染率为15.30％,清洁级实验兔未见球虫感染.幼兔球虫检出率最高,感染率为17.50％,青年兔次之,成年兔感染率最低,感染强度最高.我省生物制药企业实验兔球虫感染强度最大,OPG平均值为5 678.39,感染率也较高.在医院、高校等科研单位,实验兔也存在不同程度的球虫感染.结论 福建省实验兔球虫感染率较低.但日常工作中还是应进一步加强实验兔球虫病的监测与防治,并建议将兔球虫病纳入国家标准中普通级实验兔必要时的检测项目.

目的 建立荧光定量PCR检测兔斯氏艾美耳球虫的方法.方法 根据斯氏艾美耳球虫(内转录间隔区1)ITS1序列区设计特异性引物,构建重组质粒,并作为标准品绘制标准曲线,对建立的荧光定量PCR检测方法进行特异性、敏感性和重复性试验.结果 建立的荧光定量PCR能特异性地检测兔斯氏艾美耳球虫,且可检测到含一个卵囊DNA的样本.该方法的重复性较好,组内、组间重复试验的变异系数均小于2％.结论 建立了一种特异性好、敏感度高、可靠的检测兔斯氏艾美耳球虫荧光定量PCR方法.

建立检测兔斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)环介导等温扩增技术(LAMP)的方法.方法 根据E.stiedai的ITS 1-5.8sRNA-ITS2基因序列设计特异引物,通过优化反应条件,建立E.stiedai的LAMP检测方法.结果 25μL的反应体系中Bst聚合酶的最优添加量是1.5 μL,DNA的最优添加量是75 ng,环引物、内引物和外引物的最优浓度依次是0.8 μmol/L、1.6 μmol/L和0.15 μmol/L,在63℃反应1h后能特异性地扩增目的基因,并且具有较高的灵敏度.结论 建立了E.stiedai的LAMP检测方法,为E.stiedai感染的快速检测提供了新思路.

目的 研究柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原-1(EtAMA1)与微线蛋白-2(EtMIC2)之间的相互作用. 方法 以柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA为模板,PCR扩增EtAMA1和EtMIC2基因,构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-EtAMA1及捕获载体pGADT7-EtMIC2并转化Y2HGold酵母菌中,观察酵母在营养缺陷选择培养基上的生长情况.原核表达 GST-EtAMA1和His-EtMIC2融合蛋白,纯化后进行GST-Pulldown试验.同时构建真核表达载体pcDNA3.1-His- EtAMA1和pcDNA3.1-HA-EtMIC2并转染HEK-293T细胞,收集细胞裂解液,进行免疫共沉淀试验.在此基础上构建双分子荧光互补载体pEtAMA1-Myc-LC151和pEtMIC2-HA-KN151并转染HEK-293T细胞,激光共聚焦观察转染细胞荧光发生情况. 结果 诱饵基因和捕获基因均对酵母双杂交系统无自激活和毒性作用,pGBKT7-EtAMA1/ pGADT7-EtMIC2共转化菌能激活酵母双杂交报告系统;原核表达并纯化GST-EtAMA1和His-EtMIC2融合蛋白进行 GST-Pulldown试验,二者可在体外相互作用;EtAMA1和EtMIC2可在HEK-293T细胞中共表达,免疫共沉淀试验进一步证实二者间的相互作用;双分子荧光互补技术验证EtAMA1和EtMIC2在细胞内存在相互作用. 结论 通过酵母双杂交、GST-Pulldown、免疫共沉淀及双分子荧光互补技术验证柔嫩艾美耳球虫顶膜抗-1(EtAMA1)与微线蛋白-2(Et- MIC2)之间存在相互作用,这为揭示微线蛋白在鸡球虫入侵宿主细胞过程中的分子机制提供了理论基础.

艾美耳属球虫是一类胞内寄生原虫,其造成的球虫病对畜禽养殖造成巨大经济损失.近年来随着分子生物学的飞速发展,艾美耳球虫的转基因研究取得较大突破,使转基因技术成为推动球虫研究的有力工具.本文综合近几年转基因球虫的研究成果,对艾美耳球虫转基因技术的建立与优化以及转基因球虫的潜在应用作一综述.

鸡球虫病是由艾美耳属球虫感染引起的一种寄生性原虫病,严重危害养禽业.目前鸡球虫病的防治主要还是依赖药物.但随着药物的广泛及不合理利用,鸡球虫抗药性问题日趋严重.本文主要阐述中草药、化学合成类、 聚醚类载体抗生素等抗球虫药物,同时就鸡球虫抗药性研究作一概述.

鸡球虫病在我国广泛流行,严重影响我国养鸡业健康发展.目前各地关于鸡球虫流行情况均有报道,但鲜见关于全国整体流行情况的报道分析.本文对建国后各地的调查报告进行了梳理,发现我国各地鸡群球虫感染率均在50％以上,常见的虫种有柔嫩、 巨型、 堆型、 和缓和毒害艾美耳球虫等,影响我国鸡球虫病流行的因素有饲养管理方式、 环境及气候、 免疫抑制或其他疾病、 鸡只日龄等.同时我们还发现文献中检测鸡球虫的手段还比较落后,仅采用镜检球虫卵囊的占60％以上,并且调查范围局限于一市的占80％以上.由此可见,我国鸡球虫病流行严重,影响因素较多,而且流行病学调查手段落后、 范围小,我们应当采用综合防控措施,并提高检测手段,以期控制鸡球虫病流行,促进养鸡业健康发展.

为了探究京海黄鸡感染柔嫩艾美尔球虫(E.tenella)后盲肠组织差异表达基因,以及球虫感染分子应答过程和免疫应答机制,试验采用RNA-seq技术对E.tenella感染和非感染组第7天的盲肠组织进行转录组测序,筛选差异表达基因,并进行差异基因的功能、通路富集分析.结果表明,在感染和非感染组中有显著差异的表达基因2830个(P<0.05),其中1419个基因上调,1411个基因下调.随机选取10个差异基因进行qRT-PCR验证,结果显示差异基因的表达倍数与RNA-seq检测结果显著相关(r=0.988,P<0.000),决定系数达0.975.GO分析表明,有2356个差异基因获得GO功能注释,显著富集的前30个GO terms主要涉及细胞交流、信号转导、血管生成、氧化还原酶活性等.KEGG分析发现差异基因显著富集的信号通路有黏着斑、细胞外基质-受体相互作用、过氧化物酶体增殖物激活受体等.这些通路中的差异基因有ANGPTL4、ACSL5、VEGFC、CD44和MAKP10等,提示这些基因在宿主柔嫩艾美耳球虫感染过程中发挥重要作用.

本研究将‘软籽石榴’作为实验材料,将感染柔嫩艾美耳球虫的3周龄Cobb肉仔鸡作为研究对象,考察石榴果皮水提物组、氨丙啉组、未用药组和对照组的每克粪便中的卵囊数、体重增量和饲料转化率之间的差异.结果 显示,治疗7d后,水提物组的每克粪便中的卵囊数和饲料转化率显著低于未用药组,而体重增量显著高于未用药组.不同剂量(1 00 mg/kg,200 mg/kg,400 mg/kg体重)的石榴果皮水提物的抗球虫效果呈剂量依赖性增加,而以400 mg/kg体重的石榴果皮水提物对Cobb肉仔鸡灌胃效果最佳,治疗7d后,每克粪便中的卵囊数(103个)和饲料转化率(1.47)分别达到最低,体重增量达到最高(1 699.99 mg·kg-1·bw-1).因此,石榴果皮水提取物具有较好的抗球虫活性.