目的 研究芒柄花素磺酸钠(sodium formononetin-3'-sulphonate,Sul-F)调控线粒体凋亡通路改善脑缺血再灌注损伤的作用机制.方法 建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组、模型组、依达拉奉(3mg/kg)组和Sul-F高、低剂量(80、40mg/kg)组,分别于再灌注0、12h尾iv药物干预,假手术组和模型组给予等体积的生理盐水.再灌注24h后,Zea Longa评分法评估神经功能;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色测定脑梗死体积;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察脑缺血半暗带病理变化;原位末端标记(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)染色检测脑缺血半暗带细胞凋亡情况;JC-1探针流式细胞术检测脑缺血半暗带线粒体膜电位水平;透射电镜观察脑组织超微结构;ELISA法检测脑缺血半暗带丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性;qRT-PCR 和 Western blotting 分别检测脑缺血半暗带 B 淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2 相关 X 蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparat eprotease-3,Caspase-3)mRNA和蛋白表达.结果 与模型组比较,Sul-F高剂量组大鼠神经功能评分显著降低(P＜0.01),脑梗死体积显著减小(P＜0.05),脑缺血半暗带病理损伤减轻,细胞凋亡显著减少(P＜0.01),线粒体膜电位的去极化显著逆转(P＜0.05),线粒体嵴更加清晰、自噬现象更少见,MDA含量显著降低(P＜0.01),SOD和GSH-Px活力显著升高(P＜0.05、0.01);Bcl-2表达显著增加(P＜0.01),Bax和Caspase-3表达显著减低(P＜0.01).结论 Sul-F通过调控线粒体凋亡相关基因Bcl-2/Bax平衡,改善线粒体氧化应激水平,减轻脑缺血再灌注损伤.

[目的]观察芒柄花素磺酸钠对卵清蛋白(OVA)诱导哮喘小鼠的保护作用及其机制.[方法]购买SPF级C57BU6小鼠60只,并随机分6组,每组10只,具体组别如下:空白对照组(CON组)、模型组(OVA组)、芒柄花素磺酸钠低剂量(MBHS-L组)、芒柄花素磺酸钠中剂量(MBHS-M组)、芒柄花素磺酸钠高剂量(MBHS-H组)和地塞米松组(DEX组),使用OVA诱导建立小鼠哮喘模型.实验主要评价小鼠哮喘症状并进行评分、计量支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞数量(Diff-Quick染色法)、镜下观察肺组织的病理学变化[苏木精-伊红(HE)染色法]、分析BALF中超氧化物歧化酶(SOD)活性和肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和丙二醛(MDA)水平(ELISA法和化学发光法)、分析肺组织p-ERK1/2,p-JNK和p-p38MAPK蛋白表达水平(免疫荧光法和Western blot法).[结果]与OVA组比较,哮喘症状评分、BALF炎症细胞数量、TNF-α、IL-1β和MDA水平以及p-ERK1/2,p-JNK和p-p38MAPK蛋白表达水平在MBHS组和DEX组均明显降低(P＜0.05),而SOD的活性明显升高(P＜0.05),肺组织病理学变化明显改善.[结论]芒柄花素磺酸钠可能通过MAPKS信号通路缓解OVA诱导哮喘小鼠的肺部炎症.

目的 建立芒柄花素磺酸钠血浆样品的高效液相色谱(HPLC)分析方法,并应用该方法对正常大鼠和模型大鼠体内的芒柄花素磺酸钠进行药动学分析;明确芒柄花素磺酸钠在正常、模型大鼠血浆中的吸收分布情况.方法 采用Venusil MPC18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),流动相乙腈-水(30:70,水相中加0.1％甲酸),柱温30℃,进样量20.0 μL,体积流量1.0 mL/min,检测波长250 nm.制备大鼠脑缺血再灌注模型,将SD大鼠随机分为10组,每组5只大鼠.于大鼠脑缺血1h及再灌注3.5h按20 mg/kg ip芒柄花素磺酸钠注射液,并于给药后15、30、45、60、90、120、150、180、240、300 min腹主动脉取血.正常组大鼠分别于给药后5、10、15、30、45、60、90、120、150、180、240、300、480、720 min目内眦取血.样品经处理后,采用HPLC法检测各时间点血浆中的芒柄花素磺酸钠浓度.采用药动学软件WinNonLin 6.3进行数据分析,计算药动学参数.结果 芒柄花素磺酸钠在0.25～100.0 μg/mL线性关系良好.定量下限RSD值为12.15％.日内精密度RSD值均＜5.0％,日间精密度RSD值均＜10.0％.提取回收率均＞80％,RSD值均＜5.0％.芒柄花素磺酸钠在正常大鼠、模型大鼠血浆内药动学参数为:t1/2分别为(173.13±13.12) min、(117.86±45.05) min,Cmax分别为(67.23±4.04) μg/mL、(75.22±10.57) μg/mL,AUC0-t分别为(2493.69±216.98) min· μg/mL、(6 094.52±250.81) min·μg/mL,Vd分别为(1 981.97±134.12) mL/kg、(484.56±167.93) mL/kg,C1分别为(7.96±0.73) mL·min/kg、(2.87±0.14) mL· min/kg,MRT0-4分别为(76.92±1.54) min、(89.06±0.77) min.结论 应用HPLC法测定芒柄花素磺酸钠的血药浓度定量准确、灵敏,芒柄花素磺酸钠在模型大鼠血浆中吸收的量多,单位时间内消除的量少,滞留时间长.

目的 观察芒柄花素磺酸钠(sodium formononetin-3′-sulphonate,Sul-F)对SD大鼠实验性心肌缺血再灌注损伤的作用及机制.方法 将32只SD大鼠随机分成4组,每组8只,分别为假手术组、缺血再灌注模型组(模型组)、芒柄花素磺酸钠低剂量组(低剂量组)、芒柄花素磺酸钠高剂量组(高剂量组).适应性喂养1周后,连续给药5 d,于末次给药1 h后建立心肌缺血模型,给予缺血30 min,再灌注120 min,观察大鼠在心肌缺血再灌注后的心电图(ECG)Ⅱ导联的ST段,计算室性心律失常发生率,观察心肌组织的病理学变化.对比各组大鼠血液中髓过氧化物酶(MPO)、肌酸激酶(creatine kinase-MB,CK-MB)的活性,以及肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达情况.结果 芒柄花素磺酸钠可以明显降低心肌缺血再灌注后大鼠室性心律失常的发病率,减少心肌细胞坏死程度,其中模型组>低剂量组>高剂量组>假手术组,生化指标高剂量组显著优于模型组,以上各组比较均差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001).结论 芒柄花素磺酸钠对心肌缺血再灌注损伤有保护作用.

探讨芒柄花素-3'-磺酸钠对小鼠胶原性类风湿关节炎的治疗作用及其机制.采用鸡Ⅱ型胶原诱导C57小鼠成功建立了类风湿关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型,腹腔注射不同剂量的芒柄花素-3'-磺酸钠(50,100,200 mg/kg),治疗前后观察所有组小鼠体重、食物摄入量和足肿胀情况.CBA试剂盒检测血清中TNF-α、IL-6、IL-10的水平,蛋白质印迹法测定脾脏组织中NF-κB p65、p-NF-κB p65(p-p65)、TIPE2、PCNP、IκB-α的表达水平,同时观察小鼠的脏器指数、踝关节软骨组织的病理变化及踝关节组织中NF-κB p65阳性表达情况.结果表明,与模型对照组比较,给药组小鼠体重及食物摄入量有所升高,足肿胀程度降低;血清中炎症因子TNF-α、IL-6表达水平降低,抑炎因子IL-10表达上升;脾组织中NF-κB p65、p-p65、PCNP蛋白表达降低,而TIPE2、IκB-α蛋白表达上升;给药组CIA小鼠的脾和胸腺指数降低,踝关节中炎细胞浸润减少,滑膜组织及软骨破坏程度减轻,NF-κB p65阳性表达水平下降;其中芒柄花素-3'-磺酸钠高剂量组显示出更好的治疗效果.结果提示芒柄花素-3'-磺酸钠对CIA小鼠具有治疗作用,其作用机制可能是通过调控NF-κB p65信号通路,抑制炎症因子水平表达来实现的.