目的:评价Nr1D1核受体亚家族1，组D，成员1(Rev-erbα)/芳香烃受体核转位蛋白样1受体(Bmal1)信号通路在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及其与自噬的关系。方法:SPF级成年雄性SD大鼠，6～8周龄，体重200～220 g，腹腔注射链脲佐菌霉素60 mg/kg建立1型糖尿病模型，糖尿病造模成功后继续饲养8周。取糖尿病大鼠30只，采用随机数字表法分为3组：糖尿病假手术组(DS组， n＝6)、糖尿病心肌缺血再灌注组(DI/R组， n＝12)和糖尿病心肌缺血再灌注+Rev-erbα拮抗剂SR-8278组(DI/R+SR组， n＝12)。另取非糖尿病大鼠18只，采用随机数字表法分为2组：非糖尿病假手术组(NS组， n＝6)和非糖尿病心肌缺血再灌注组(NI/R组， n＝12)。采用结扎左冠状动脉前降支30 min再灌注120 min的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型。DI/R+SR组于缺血前1 h时经股静脉注射SR-8278 2 mg/kg。再灌注结束即刻采集颈动脉血标本，采用ELISA法检测血清cTnI、CK-MB和LDH水平；然后处死大鼠，取心肌组织，采用TTC法测定心肌梗死面积百分比，透射电镜下计数自噬小体，采用RT-PCR检测Rev-erbα和Bmal1的mRNA表达水平，Western blot法检测Rev-erbα、Bmal1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ和LC3 Ⅰ的表达水平，并计算LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值。 结果:与NS组比较，NI/R组心肌梗死体积百分比、血清cTnI、CK-MB和LDH水平和自噬小体计数升高，心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调，Bmal1及其mRNA表达下调，LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高，DS组血清cTnI、CK-MB和LDH水平升高，自噬小体计数降低，心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调，Bmal1及其mRNA表达下调，LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低( P<0.05)；与NI/R组比较，DI/R组心肌梗死体积百分比、血清cTnI、CK-MB和LDH水平升高，自噬小体计数降低，心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调，Bmal1及其mRNA表达下调，LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低( P<0.05)；与DS组比较，DI/R组心肌梗死体积百分、血清cTnI、CK-MB和LDH水平和自噬小体计数升高，心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调，Bmal1及其mRNA表达下调，LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高( P<0.05)；与DI/R组比较，DI/R+SR组心肌梗死体积百分比、血清cTnI、CK-MB和LDH水平降低，自噬小体计数降低，心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达下调，Bmal1及其mRNA表达上调，LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高( P<0.05)。 结论:Rev-erbα/BMAL1信号通路可通过调节细胞自噬水平，参与糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的过程。

目的:探讨严重创伤后小鼠腹腔巨噬细胞（PM）中芳香烃受体（AhR）的表达规律并分析增强创伤后PM的AhR表达对炎症因子水平和杀菌能力的影响。方法:采用实验研究方法。取40只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠（小鼠周龄、性别、品系下同），按随机数字表法（分组方法下同）分为对照组、创伤后2 h组、创伤后6 h组、创伤后12 h组，每组10只。将后3组小鼠构建骨折+失血的严重创伤模型，对照组小鼠不做处理。分别在未创伤和创伤后2、6、12 h时，提取对照组、创伤后2 h组、创伤后6 h组、创伤后12 h组小鼠原代PM（提取细胞下同），分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量反转录PCR法检测AhR的蛋白和mRNA表达，采用转录组测序分析AhR信号通路相关分子的基因表达。取20只小鼠分为对照组、创伤后6 h组，每组10只，提取PM后，采用免疫沉淀法检测AhR泛素化水平。取12只小鼠，分为单纯二甲基亚砜（DMSO）组、创伤后6 h+DMSO组、单纯MG-132组、创伤后6 h+MG-132组，每组3只，并行相应处理后，提取PM，采用蛋白质印迹法检测AhR蛋白的表达。取20只小鼠构建创伤后6 h模型并提取PM，分为空载腺病毒（Ad-NC）组和AhR过表达腺病毒（Ad-AhR）组，部分细胞转染相应腺病毒36 h后，采用蛋白质印迹法检测AhR的蛋白表达；将剩余Ad-NC组细胞分为单纯Ad-NC组、Ad-NC+内毒素/脂多糖（LPS）组，将剩余Ad-AhR组细胞分为单纯Ad-AhR组和Ad-AhR+LPS组，并行相应处理12 h后，采用酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达（样本数为6）。取20只小鼠提取PM并分为对照+Ad-NC组、创伤后6 h+Ad-NC组、对照+Ad-AhR组、创伤后6 h+Ad-AhR组，并行相应处理后，采用平板涂布法检测细胞内载菌量（样本数为6）。对数据行单因素方差分析、LSD检验、析因设计方差分析、独立样本 t检验。 结果:与对照组（1.16±0.28）比较，创伤后2 h组（0.59±0.14）、创伤后6 h组（0.72±0.16）、创伤后12 h组（0.71±0.17）PM中AhR的蛋白表达水平均明显降低（ P<0.05）。对照组、创伤后2 h组、创伤后6 h组、创伤后12 h组PM中AhR的mRNA表达量组间总体比较，差异无统计学意义（ P>0.05）。AhR信号通路相关分子包括 AhR、AhR抑制因子、细胞色素P450家族成员1b1、细胞色素P450家族成员11a1 、热休克蛋白90、芳香烃受体-相互作用蛋白、热休克蛋白70相互作用蛋白。除创伤后2 h组PM的热休克蛋白90表达水平较对照组高，其他分子的表达水平在创伤后变化不明显。与对照组比较，创伤后6 h组PM中AhR泛素化水平升高。与单纯DMSO组比较，创伤后6 h+DMSO组PM中AhR的蛋白表达量下降，单纯MG-132组PM中AhR的蛋白表达量无明显变化。与创伤后6 h+DMSO组比较，创伤后6 h+MG-132组PM中AhR的蛋白表达量上调。转染36 h，与Ad-NC组比较，Ad-AhR组PM中AhR的蛋白表达水平明显升高。处理12 h，与Ad-NC+LPS组比较，Ad-AhR+LPS组PM上清液中IL-6、TNF-α的表达水平均明显降低（ t值分别为4.80、3.82， P<0.05）。对照+Ad-NC组、创伤后6 h+Ad-NC组、对照+Ad-AhR组、创伤后6 h+Ad-AhR组1×10 6个PM的胞内载菌量分别为（3.0±1.8）、（41.8±10.2）、（1.8±1.2）、（24.2±6.3）集落形成单位。与创伤后6 h+Ad-NC组比较，创伤后6 h+Ad-AhR组PM的胞内载菌量明显减少（ t=3.61， P<0.05）。 结论:严重创伤后小鼠PM中AhR发生泛素化降解导致其蛋白表达降低，增强创伤后巨噬细胞AhR的表达可降低LPS诱导的炎症因子IL-6和TNF-α的表达，且提升创伤后巨噬细胞的杀菌能力。

目的:研究血清微小RNA-34a（miR-34a）和芳香烃受体核转录样蛋白1（BMAL1）在宫颈癌中的临床价值及其与高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染的关系。方法:回顾性分析济宁医学院附属医院2022年1—12月76例宫颈癌患者和50例宫颈良性疾病患者的临床资料。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-34a和BMAL1表达水平，采用流式荧光杂交法检测HR-HPV感染情况。患者随访截至2023年12月，记录死亡和预后不良（指随访1年时出现死亡、肿瘤复发进展、严重并发症）情况。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析miR-34a、BMAL1及相关指标评估宫颈癌患者1年预后不良的效能。采用多因素Cox回归分析影响宫颈癌患者死亡的独立危险因素。采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-34a和BMAL1表达与生存期的关系，比较采用log-rank检验。结果:宫颈癌患者血清miR-34a表达水平明显低于宫颈良性疾病患者（0.46±0.08比0.67±0.11），血清BMAL1表达水平明显高于宫颈良性疾病患者（0.58 ± 0.07比0.41±0.07），差异有统计学意义（ t = 12.40和13.34， P<0.01）。宫颈癌患者血清miR-34a和BMAL1表达水平与肿瘤分化程度、肌层浸润深度、淋巴结转移、远处转移和国际妇产科联合会（FIGO）分期有关，差异有统计学意义（ P<0.05或<0.01），与年龄、绝经、病理类型无关，差异无统计学意义（ P>0.05）。宫颈癌患者中，HR-HPV感染阳性患者（60例）miR-34a表达水平明显低于HR-HPV感染阴性患者（16例）（0.41±0.07比0.49±0.08），BMAL1表达水平明显高于HR-HPV感染阴性患者（0.65±0.09比0.53 ± 0.06），差异有统计学意义（ t = 3.68和4.24， P<0.05或<0.01）。宫颈良性疾病患者中，HR-HPV感染阳性患者（7例）与HR-HPV感染阴性（43例）患者miR-34a和BMAL1表达水平比较差异无统计学意义（ P>0.05）。ROC曲线分析结果显示，miR-34a联合BMAL1评估宫颈癌患者1年预后不良的灵敏度（90.4%）、特异度（89.9%）和曲线下面积（0.911）最高（ P<0.01），miR-34a和BMAL1表达水平的最佳截断值为≤0.39和≥0.64。多因素Cox回归分析结果显示，低分化、肌层浸润深度≥1/2、有淋巴结转移、有远处转移、FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期、miR-34a表达水平≤0.39、BMAL1表达水平≥0.64是影响宫颈癌患者死亡的独立危险因素（ OR = 1.857、2.125、2.337、2.751、2.457、3.885和3.666，95% CI 0.845~5.788、0.726~5.924、0.709~5.631、0.693~5.727、0.801~5.936、1.244~6.423和1.031~5.612， P<0.01）。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示，miR-34a表达水平≤0.39且BMAL1表达水平≥0.64宫颈癌患者（21例）中位生存期明显低于其他宫颈癌患者（miR-34a表达水平>0.39或BMAL1表达水平<0.64，55例）[（26.4±4.2）个月比（34.2±5.6）个月，log-rank χ2 = 17.12， P<0.05]。 结论:宫颈癌患者血清miR-34a表达水平明显降低而BMAL1表达水平明显升高，与宫颈癌病情、预后及HR-HPV感染有关，可作为宫颈癌患者病情和预后评估的标志物，两者联合检测可提高评估效能。

目的 基于铁死亡相关基因(FRG)构建骨肉瘤(OS)预后模型,探讨FRG在OS中的表达及与患者预后的关系.方法 通过生物信息学方法从UCSC Xena数据库中获取88例OS患者的转录组测序数据和其中85例患者的临床资料,与基因型-组织表达(GTEx)数据库中获取的396例正常骨组织样本合并,从FerrDb数据库中获取FRG,从合并后的数据中进行差异分析并提取差异表达的FRG.采用基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析探索OS中FRG的生物学功能.采用单因素Cox与Lasso回归模型筛选预后相关基因并构建预后预测模型.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析预后模型的预测价值.采用单因素及多因素Cox回归模型分析OS患者预后的独立影响因素.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测预后相关FRG在人成骨细胞hFOB1.19与OS细胞系U2OS、MG63中的表达情况.结果 共获得57个差异表达的FRG.GO与KEGG富集分析发现这些差异基因主要富集在缺氧反应、线粒体外膜、铁离子结合等生物学反应和线粒体自噬、化学致癌-活性氧以及铁死亡等途径.应用单因素Cox及Lasso回归模型共筛选出9个预后相关的FRG来构建预后模型,分别为酰基辅酶A合成酶家族成员2(ACSF2)、芳香烃受体核转运因子样蛋白(ARNTL)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相互作用蛋白3(BNIP3)、脂肪酸去饱和酶2(FADS2)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、磷酸葡萄糖酸脱氢酶(PGD)、细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)、转化生长因子β受体1(TGFBR1)、血管内皮生长因子A(VEGFA).ROC曲线和生存分析证实这9个FRG构建的风险模型对OS患者的生存情况具有较好的预测价值.单因素和多因素分析结果显示,转移和风险评分均是OS患者预后的独立影响因素(P＜0.01).qPCR结果显示,U2OS和MG63细胞中FADS2 mRNA相对表达量均高于hFOB 1.19细胞,差异均有统计学意义(P＜0.05);MG63细胞中ACSF2 mRNA相对表达量高于hFOB1.19细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 本研究成功构建了基于 FRG 的 OS 预后模型,发现 A CSF2、ARNTL、G6PD、PGD、FADS2、SOCS1、BNIP3、TGFBR1、VEGFA 等 9个FRG能够作为OS患者的预后生物标志物,可为OS患者的临床治疗和预后评估提供参考.

目的 探讨脑和肌肉组织芳香烃受体核转运蛋白的类似蛋白1(BMAL1)通过核因子E2相关因子2(NRF2)调节活性氧(ROS)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体通路对过氧化氢(H2O2)诱导的心肌细胞损伤的影响.方法 体外培养H9c2细胞和BMAL1稳定过表达的H9c2细胞,建立H2O2诱导的H9c2细胞损伤模型,并将细胞分为对照(Control)组、H2O2组、BMAL1过表达(BMAL1-OE)组、BMAL1过表达+H2O2(BMAL1-OE+ H2O2)组、BMAL1过表达+NRF2抑制剂(BMAL1-OE+ML385)组、BMAL1过表达+NRF2抑制剂+H2O2(BMAL1-OE+ ML385+H2O2)组.采用CCK-8法检测细胞活力,荧光探针2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯检测ROS生成,Western blot检测BMAL1、NRF2和NLRP3蛋白表达,酶联免疫吸附试验法检测白细胞介素(IL)-1β释放.结果 与Control组相比,H2O2组H9c2心肌细胞活力减弱,ROS生成增多,BMAL1和NRF2蛋白表达水平降低,NLRP3蛋白表达水平升高,IL-1β释放增多(P＜0.05);与H2O2组相比,BMAL1-OE+H2O2组H9c2心肌细胞活力升高,ROS生成减少,BMAL1和NRF2蛋白表达水平升高,NLRP3蛋白表达水平降低,IL-1β释放减少(P＜0.05).与BMAL1-OE+H2O2组相比,BMAL1-OE+ML385+H2O2组H9c2心肌细胞活力减弱,ROS生成增多,NLRP3蛋白表达水平升高,IL-1β释放增多(P＜0.05).结论 BMAL1可减轻H2O2诱导的H9c2心肌细胞损伤,其机制可能与NRF2调节ROS/NLRP3炎症小体通路有关.

目的:研究青黛对溃疡性结肠炎(UC)肠上皮细胞炎症模型的抗炎机制.方法:采用脂多糖(LPS)诱导LoVo细胞24h建立肠上皮细胞炎症模型,分别以青黛及柳氮磺胺吡啶(SASP)进行干预.以酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中IL-1β、IL-6、IL-18、IL-10、IL-22的含量,应用实时荧光定量转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹技术(WB)检测Nlrp3、Caspase1、Ahr、Cyp1a1 mRNA和蛋白表达.结果:与正常对照组比较,模型对照组细胞上清液中IL-1β、IL-6和IL-18的含量明显升高(P＜0.05),IL-10和IL-22的含量明显降低(P＜0.05);Nlrp3、Caspase1 mRNA和蛋白表达明显上调(P＜0.05),而Ahr、Cyp1a1 mRNA和蛋白表达明显下调(P＜0.05).与模型对照组相比,青黛0.5 mg/mL干预后细胞上清液中IL-1β、IL-6、IL-18含量明显降低(P＜0.05),IL-10、IL-22含量明显升高(P＜0.05),同时可明显下调NLRP3、Caspase-1蛋白和mRNA的表达(P＜0.05),又能明显上调AHR、CYP1A1蛋白及mRNA的表达(P＜0.05).结论:青黛可能通过抑制NLRP3炎症小体活化及激活AHR/CYP1A1信号途径改善溃疡性结肠炎肠上皮细胞炎症损伤.