目的 采用正交试验设计法优选盐蒸仙茅最佳工艺.方法 采用正交试验设计法,以盐水比例、闷润时间、蒸制时间为考察因素,以仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷、苔黑酚葡萄糖苷及醇溶性浸出物含量为考察指标,优化盐蒸仙茅炮制工艺.结果 仙茅盐蒸最佳工艺为取生仙茅饮片适量,置于密闭容器内,加入盐水(盐水比例1∶17.5,每100 kg仙茅饮片用2 kg食盐)拌匀,闷润1 h,置于锅中蒸制1 h,取出放凉,50℃干燥,即得.结论 优化所得盐蒸仙茅炮制工艺稳定可行,且仙茅盐蒸后有效成分的含量高于仙茅生品、传统酒炙品和盐炙品,盐蒸工艺优于盐炙工艺.

目的:优选酒蒸仙茅最佳工艺.方法:采用正交试验设计法,以加酒量、闷润时间、蒸制时间为考察因素,以仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷、苔黑酚葡萄糖苷及醇溶性浸出物含量为考察指标,优化仙茅酒蒸炮制工艺.结果:仙茅酒蒸最佳工艺为取生仙茅饮片适量,置密闭容器内,加入黄酒(每100 kg饮片加入黄酒20 kg)拌匀,闷润1 h,置锅中蒸制1 h,取出放凉,50℃干燥.结论:优化所得酒蒸仙茅炮制工艺稳定可行,仙茅酒蒸后有效成分的含量高于仙茅生品和酒炙品,酒蒸工艺优于传统酒炙工艺.

目的 探讨仙茅苔黑酚龙胆二糖苷(orcinol gentiobioside,OGB)对氧化应激诱导的破骨细胞(osteoclasts,OCs)的作用及机制.方法 可溶性核因子-κB受体活化因子配体(soluble receptor activator of nuclear factor-KB ligand,sRANKL)联合H2O2诱导RAW264.7细胞,建立氧化应激诱导的OCs模型;CCK-8法检测OCs活力;抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色测定OCs的数目;磷酸苯二钠法测定OCs的TRAP活性;免疫荧光法观察OCs的F-actin环结构和形态,以及p65和核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)的核转位;ELISA法测定OCs相关的生化指标;Western blotting检测骨吸收关键蛋白及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和Nrf2通路相关蛋白的表达.结果 OGB显著抑制氧化应激诱导的OCs的形成和分化(P＜0.01),并抑制TRAP活性、F-actin环的形成及其骨吸收作用(P＜0.05、0.01),下调骨吸收关键蛋白c-Fos、组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP9)的表达(P＜0.05、0.01),降低活性氧(reactiveoxygen species,ROS)和还原型辅酶 Ⅱ(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶 4(NADPH oxidase 4,NOX4)的活性(P＜0.05、0.01),增加抗氧化酶血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase 1,NQO1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(gamma-glutamyl cysteine synthetase,γ-GCS)的活性(P＜0.05、0.01),增强 OCs 中 Nrf2 的表达和核转位,抑制肿瘤坏死因子受体相关蛋白 6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)的募集、核因子-κB 抑制因子 α(inhibitor of NF-κB-α,IκBα)的降解,并阻止p65的磷酸化和核转位(P＜0.05).结论 OGB能够通过调控NF-κB和Nrf2通路,抑制氧化应激诱导的OCs形成分化和骨吸收作用.

目的 探讨仙茅苔黑酚类酚苷(orcinol glucoside in Curculigo orchioideson,COOG)对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢及破骨细胞形成分化的影响.方法 3月龄Sprague-Dawley大鼠被随机分为正常对照组和去卵巢组.再将去卵巢大鼠分为5组,连续12周分别灌胃给0.5％的羧甲基纤维素钠(sodium carboxymethyl cellulose,CMC-Na)溶液,1 mg·kg-1尼尔雌醇(nilestriol,Nyl-1),15、45和135 mg·kg-1COOG.用双能X线吸收仪测定骨密度(bone mineral density,BMD),采用试剂盒测定血清和尿液的生化指标.RANKL诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色测定破骨细胞的数目;罗丹明-鬼笔环肽染色和激光共聚焦显微镜观察破骨细胞F-actin环的结构和形态;磷酸苯二钠法测定破骨细胞TRAP的活性;Elisa试剂盒测定破骨细胞组织蛋白酶K(cathepsin K,CK)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-ase-9,MMP-9)的活性.结果 去卵巢大鼠骨密度显著降低,血清碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶活性升高,尿钙排出增加,血清抗氧化物水平降低.COOG在15、45和135 mg·kg-1剂量下,显著增加去卵巢大鼠的骨密度,显著降低血清抗酒石酸酸性磷酸酶活性,增加血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和还原型谷胱甘肽(fre-dused glutathione hormone,GSH)的水平,降低氧化产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量,减少尿钙排出.苔黑酚葡萄糖苷(sakakin,Sak)和苔黑酚龙胆二糖苷(orcinol gentiobioside,Og)显著抑制破骨细胞的形成分化、抑制破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶的活性、CK的活性和MMP-9的活性,抑制破骨细胞F-Actin环的形成.结论 COOG能够减缓去卵巢大鼠的骨丢失,抑制破骨细胞的形成、分化和骨吸收作用.

目的:建立酒仙茅的微波炮制工艺,并与传统炮制法进行比较.方法:采用高效液相色谱法测定酒仙茅中仙茅苷、苔黑酚葡萄糖苷、苔黑酚龙胆二糖苷的含量;在单因素实验的基础上,以加酒量、微波功率、闷润时间、微波时间为考察因素,以仙茅苷、苔黑酚葡萄糖苷、苔黑酚龙胆二糖苷及醇溶性浸出物含量为考察指标,采用正交实验结合综合加权评分法优化微波炮制的工艺并验证,同时比较生仙茅饮片和炮制品的含量.结果:最优微波炮制工艺为加酒量20％(生仙茅饮片质量的20％),微波功率300 W,闷润时间3 h,微波时间2 min.经3次实验验证,仙茅苷、苔黑酚葡萄糖苷、苔黑酚龙胆二糖苷及醇溶性浸出物的平均含量分别0.0956％、0.7239％、0.4066％、10.1153％,RSD分别为0.71％、0.54％、0.99％、1.44％(n=3);平均综合评分为99.08分,RSD为0.69％(n=3).除传统酒炙品中醇溶性浸出物含量外,传统酒炙品和微波炮制品中仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷含量及微波炮制品中醇溶性浸出物含量均显著高于生仙茅饮片,且微波炮制品中仙茅苷、苔黑酚龙胆二糖苷含量均显著高于传统酒炙品(P<0.05);两种炮制品中苔黑酚葡萄糖苷均显著低于生仙茅饮片,但微波炮制品显著高于传统酒炙品(P<0.05).结论:优化所得微波炮制工艺稳定、可行,可用于酒仙茅的炮制.