目的 研究葡萄球菌核酸酶结构域蛋白1(SND1)基因在人食管鳞状细胞癌(ESCC)中表达水平的表达及对食管癌细胞恶行生物学行为的影响.方法 qRT-PCR及Western blot检测SND1在ESCC细胞株中翻译和转录水平的改变.运用sh-SND1病毒载体构建出SND1稳定干扰的ESCC细胞株模型,利用克隆形成,Transwell小室及流式细胞术等细胞生物学手段研究SND1基因对ESCC细胞增殖和转移、凋亡的影响,运用动物实验研究SND1基因在体内对ESCC细胞的影响.结果 qRT-PCR和Western blot的实验结果表明SND1在ESCC细胞中的转录和翻译水平高于人正常食管上皮细胞(HEEC);经过培养、染色、拍照和通过统计学分析细胞表型实验数据,结果显示干扰SND1基因表达可显著抑制ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力;干扰SND1的表达抑制体内食管癌细胞的增殖能力;化疗药物敏感实验结果显示SND1干扰组食管癌细胞对CPT的敏感性增加,细胞凋亡率明显升高.结论 SND1在食管癌细胞中表达上调及促进食管癌细胞恶性生物学行为.

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)葡萄球菌核酸酶结构域包含蛋白1内含子转录本1( SND1-IT1)靶向miR-185-5p对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测人胃黏膜上皮正常细胞和胃癌细胞中lnc SND1-IT1和miR-185-5p的表达.将胃癌细胞AGS分为对照组、si-con、si-lnc SND1-IT1、miR-con、miR-185-5p、si-lnc SND1-IT1+anti-miR-con和si-lnc SND1-IT1+anti-miR-185-5p组.细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测AGS细胞增殖活力;Transwell实验检测AGS细胞迁移和侵袭能力;蛋白质印记( Western Blot)检测细胞周期素D1 (CyclinD1)、细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)、基质金属蛋白酶2( MMP-2)和MMP-9表达.双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证lnc SND1-IT1对miR-185-5p的靶向作用.结果 胃癌细胞中lnc SND1-IT1表达升高,miR-185-5p表达降低(P＜0. 05).沉默lnc SND1-IT1或过表达miR-185-5p后,AGS细胞中CyclinD1、CDK2、MMP-2和MMP-9表达降低,细胞增殖、迁移和侵袭能力降低(P＜0. 05).与沉默lnc SND1-IT1比较,同时沉默lnc SND1-IT1和miR-185-5p后AGS细胞中 CyclinD1、CDK2、MMP-2 和 MMP-9 表达升高,细胞增殖、迁移和侵袭能力升高( P ＜0. 05). lnc SND1-IT1靶向miR-185-5p并负调控miR-185-5p表达.结论 沉默lncRNA SND1-IT1通过靶向miR-185-5p抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭.

目的 探讨葡萄球菌核酸酶结构域蛋白1(SND1)与组织分化诱导非编码RNA(TINCR)的相互作用及其对TINCR表达水平和瘢痕疙瘩生长的影响.方法 收集2016年6月-2018年5月在陕西省人民医院接受治疗的Ⅱ、Ⅲ度烧伤患者的瘢痕疙瘩组织样本(n=27).运用生物信息学方法预测TINCR序列中的RNA甲基化位点;培养人原代正常皮肤成纤维细胞(HFs)和瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs),设置HFs组和KFs组.取对数生长期KFs,设置:(1)对照组、空载组及甲基转移酶样蛋白3(METTL3)过表达组;(2)对照组和3-脱氮基腺苷(DAA)组;(3)对照组、SND1重组蛋白组及SND1重组蛋白+DAA组.采用实时定量PCR(RT-qPCR)检测HFs和KFs中TINCR的相对表达水平,甲基化RNA免疫沉淀技术(MeRIP)联合RT-qPCR检测TINCR的甲基化水平,Western blotting检测SND1和METTL3蛋白的相对表达水平,放线菌素D处理联合RT-qPCR检测TINCR残留水平,CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力.取18只BALB/c裸鼠,构建瘢痕疙瘩异种移植模型,随机分为瘢痕疙瘩组、瘢痕疙瘩+SND1重组蛋白组及瘢痕疙瘩+SND1重组蛋白+DAA组,每组6只,采用HE染色观察瘢痕疙瘩组织生长情况,免疫组化染色和Western blotting检测SND1在瘢痕疙瘩组织中的表达水平.结果 TINCR第三外显子含有7个潜在的RNA甲基化位点.与HFs相比,KFs中TINCR相对表达水平(5.43±0.35 vs.1.00±0.11,P<0.01)和甲基化水平(19.73％±1.56％vs.10.25％±1.13％,P<0.01)均明显升高,SND1和METTL3蛋白相对表达水平明显增高(P<0.01),甲基化的TINCR与SND1和METTL3均有结合.与空载组相比,METTL3过表达可促进METTL3 mRNA和蛋白的表达(mRNA:6.03±0.55 vs.1.09±0.09,P<0.01;蛋白:4.33±0.35 vs.0.96±0.08,P<0.01)、增高TINCR甲基化水平(32.89％±2.88％vs.19.04％±1.72％,P<0.01)和相对表达水平(4.65±0.32 vs.1.00±0.10,P<0.01).与对照组相比,DAA处理可降低TINCR的稳定性[(8.50±1.13)h vs.(12.90±1.41)h,P<0.001]和甲基化水平(7.43％±0.55％vs.18.88％±1.76％,P<0.01),抑制KFs的活力和克隆形成能力(P<0.01).与对照组相比,SND1重组蛋白处理可增加TINCR的稳定性[(23.95±1.25)h vs.(13.10±1.33)h,P<0.01]、细胞活力和克隆形成能力(P<0.01),但对TINCR甲基化水平(20.15％±1.74％vs.19.04％±1.77％,P>0.05)无明显影响;DAA处理可消除SND1重组蛋白对TINCR稳定性[(12.00±1.21)h vs.(23.95±1.44)h,P<0.01]、细胞活力和克隆形成能力的影响(P<0.01).与瘢痕疙瘩组相比,瘢痕疙瘩+SND1重组蛋白组真皮层有大量成纤维细胞和胶原纤维,瘢痕疙瘩组织中SND1阳性细胞百分比(63.43％±3.32％vs.21.16％±4.67％,P<0.01)和蛋白相对表达水平(2.54±0.13 vs.1.00±0.10,P<0.01)明显增高;而经DAA处理后,瘢痕疙瘩组织中有大量疏松的胶原纤维,SND1阳性细胞百分比(38.52％±6.88％vs.63.43％±3.32％,P<0.01)和蛋白表达水平(1.07±0.09 vs.2.54±0.13,P<0.01)明显降低.结论 KFs中TINCR呈高甲基化水平,SND1可识别并结合TINCR的甲基化位点,增强TINCR的稳定性,促进TINCR介导的瘢痕疙瘩生长.