目的 探讨蒿甲醚脂质体(ARM-Lip)体外抑制刚地弓形虫(简称弓形虫)速殖子增殖的作用.方法 将含有1× 104个人宫颈癌细胞置于96孔平底细胞培养板中培养,每孔100μl,设置不同浓度的ARM-Lip组(3.125、6.250、12.500、25.000、50.000、100.000、200.000、400.000和 800.000 μmol/L),对照组(仅含 1 × 104个人宫颈癌细胞)和空白组(仅含培养液),24h后ARM-Lip组每孔分别加入对应药物100μl,48h后各孔均加入10μl CCK-8溶液,1 h后使用酶标仪检测450 nm波长处的吸光度(A值),计算细胞存活率和ARM-Lip的半数抑制浓度(IC50).进一步采用稳定表达绿色荧光的RH株(RH-GFP)弓形虫速殖子感染人宫颈癌细胞,与不同浓度的ARM-Lip进行共培育,筛选细胞存活率大于50％的安全浓度的ARM-Lip组,同时设置浓度为400 μmol/L的磺胺嘧啶(SDZ)组和未加药组.荧光显微镜观察24、48和72h后速殖子的增殖情况,测量共培养48 h时各组平均荧光灰度值,选取最佳浓度ARM-Lip组.吉氏染色后,光学显微镜下观察各组细胞内的纳虫空泡和弓形虫速殖子的生长情况并计数.组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用最小显著性差异法检验.结果 ARM-Lip在25 μmol/L或以下浓度对人宫颈癌细胞几乎无毒性,IC50为 285.1 μmol/L.经 100.000、200.000、400.000和800.000 μmol/L 的 ARM-Lip 处理后,平均细胞存活率分别为 89.03％、76.30％、42.12％和 27.85％,选取 6.250、12.500、25.000、50.000 和100.000 μmol/L等5个浓度进行后续实验.荧光显微镜下可见未加药组弓形虫RH-GFP株速殖子大量增殖,形态正常,呈现高强度的绿色荧光;随着ARM-Lip浓度的增加,绿色荧光强度逐渐减弱.ARM-Lip体外抑制弓形虫繁殖的最佳作用浓度为100.000 μmol/L,最佳作用时间为48 h.未加药组、ARM-Lip组(100.000 μmol/L)和SDZ组作用48h 后,荧光灰度值分别为 89.92±1.12、35.74±1.55 和 7.34±0.60(F=7 916.301,P＜0.01),ARM-Lip 组和 SDZ组的平均灰度值相比未加药组均下降(t=81.247、123.831,均P＜0.01),SDZ组低于ARM-Lip组(t=-42.584,P＜0.01).经吉氏染色,未加药组、ARM-Lip组和SDZ组的纳虫空泡数分别为(28.667±2.658)、(16.667± 0.817)和(12.667±1.211)个(F=135.652,P＜0.01),弓形虫 RH-GFP株速殖子数分别为(176.167±13.273)、(105.333±7.789)和(70.167±5.947)个(F=192.763,P＜0.01),ARM-Lip组和 SDZ组纳虫空泡数量相比未加药组均减少(t=0.083、0.063,均P＜0.01),弓形虫RH-GFP株速殖子数量也减少(t=0.014、0.009,均P＜0.01),SDZ组的纳虫空泡和速殖子数量均少于ARM-Lip组(t=-0.500、-0.057,均P＜0.01).结论 ARM-Lip具有较好的安全性,在体外可抑制弓形虫速殖子的增殖,但效果不及SDZ.

目的 构建靶向性蒿甲醚脂质体并评价其对C6脑胶质瘤细胞的体外靶向性.方法 以氨基蝶呤(APGA)为靶向性分子,采用化学法合成靶向性功能材料氨基蝶呤-聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺共聚物(APGA-PEG2000-DSPE),以薄膜分散法制备靶向性蒿甲醚脂质体,构建血脑屏障(BBB)-C6脑胶质瘤肿瘤球共培养模型,以香豆素为荧光探针,以共聚焦荧光显微镜观察靶向性脂质体跨越BBB及穿透肿瘤球的能力,以流式细胞仪检测C6细胞对脂质体的摄取情况来评价制剂的靶向性能,采用SRB法考察靶向性脂质体对C6脑胶质瘤细胞的生长抑制作用.结果 合成的APGA-PEG2000-DSPE的相对分子质量为3 150,与预测的相对分子质量相吻合;共培养模型显示靶向性脂质体可以更好地跨越BBB并穿透肿瘤球,对于C6脑胶质瘤细胞,靶向性蒿甲醚脂质体、蒿甲醚脂质体、游离蒿甲醚对C6脑胶质瘤细胞的IC50值分别为42、82、95μmol/L.结论 构建的靶向性蒿甲醚脂质体可以有效跨越BBB,并靶向运输至脑胶质瘤肿瘤球内部,且具有很强的杀伤脑胶质瘤细胞活性.

目的 优选氨基蝶呤修饰的蒿甲醚脂质体的最佳处方配比和制备工艺,并进行理化性质评价.方法 以包封率为指标,优选氨基蝶呤修饰蒿甲醚脂质体的制备方法,并通过正交试验优化其处方及工艺;采用激光粒度仪、透射电镜评价脂质体的粒径、Zeta电位及外观形态;利用透析法研究脂质体的体外释放.结果 制备的氨基蝶呤修饰的蒿甲醚脂质体的最优处方为卵磷脂-胆固醇-TPGS物质的量比95∶0.5∶3,5％氨基蝶呤修饰率,蒿甲醚与脂材的比例为1∶20,30℃下旋转成膜,水化后,探头超声8 min.所得的氨基蝶呤修饰蒿甲醚脂质体的粒径为(99.97±1.67) nm;多分散度为0.185±0.021;Zeta电位为(-0.023±0.080)mV.透射电镜结果显示蒿甲醚脂质体形态圆整;包封率为(90.06±1.15)％;在模拟血液中,蒿甲醚脂质体的48 h累积释放率为(57.07±6.09)％.结论 正交试验优选的氨基蝶呤修饰的蒿甲醚脂质体形态圆整、粒径小且均一、药物包封率较高、具有很好的缓释效果.

目的 制备用于静脉注射的蒿甲醚固体脂质纳米粒(ARM-SLNs),并评价小鼠体内药动学以及抑瘤效果.方法 采用热熔乳化超声-低温固化法制备ARM-SLNs,并考察其理化性质;测定了ARM-SLNs在小鼠体内的药动学行为,评价ARM-SLNs对小鼠接种HepG2肿瘤细胞的抑制效果.结果 本研究制备的ARM-SLNs呈球形分布,平均粒径大小为(77.6±1.3) nm,Zeta电位为(-20.1 +0.4)mV,包封率为(93.5±1.2)％,载药量为(9.2±0.3)％,冻干对ARM-SLNs的粒径大小、包封率和载药量均未产生显著影响;ARM-SLNs在体外显示出缓慢释药特性,符合一级动力学方程;小鼠药动学研究表明ARM-SLNs的t1/2及AUC0-t分别是ARM注射液的9.67倍和3.88倍;小鼠药效学研究表明ARM-SLNs的对HepG2肿瘤生长的抑制率显著高于ARM注射液(P＜0.05).结论 本研究制备的ARM-SLNs对HepG2肿瘤细胞起到了良好的抑制效果,有望成为ARM的新型给药系统应用于临床研究中.