蚋是一种重要的医学与畜牧学昆虫,是人类盘尾丝虫病和河盲症的传播媒介.不同种类的蚋在形态学上表现出高度的相似性,难以用传统形态学方法进行快速准确鉴定.DNA条形码技术作为一门新兴的物种鉴定方法以其灵敏、精确、方便和客观的优势,在蚋科昆虫的分类鉴定中已经得到广泛应用.本文通过介绍DNA条形码的产生、发展和研究现状,探讨其在蚋科昆虫鉴定中应用的技术方法路线,并对DNA条形码技术在蚋科分类研究中的应用前景进行了展望.

2014年5月2日在秦皇岛港检疫锚地停泊的一艘来自澳大利亚维多利亚州的波特兰大港的运载进口奶牛的入境船舶新加坡籍“吉布雷快车”(M.V.GELBRAY EXPRESS)轮上采获一只活的输入性蚋类雌虫.经鉴定,根据该蚋虫标本的中胸侧膜、中胸下侧片及翅径脉基部具毛和爪基齿等形态结构,符合蚋属Morops亚属的特征.因仅采获一只蚋类雌虫,且无蛹的标本,因此,未定种名,暂命名为蚋属Morops亚属未定种.现将该蚋类雌虫的形态学特征予以描述,以供研究参考.标本保存于军事科学院军事医学研究院医学昆虫标本馆.蚋属Morops亚属的蚋类最早发现于澳大利亚东南部地区,分布于大洋洲和南太平洋诸岛以及印度尼西亚、菲律宾和日本等地.而该轮始发港澳大利亚的波特兰大港即位于澳大利亚东南部地区,所装载的奶牛也来自附近区域.我们应高度重视入境船舶特别是运载动物的入境船舶携带输入性蚋类等病媒生物入侵的危害,确保国门生物安全.

目的:调查贵州威宁草海国家级自然保护区蚊蚋相.方法:收集贵州威宁草海国家级自然保护区内有水环境的积水或流水中水生植物和石头上的蚊、蚋类幼虫、蛹,培育出蚊、蚋成虫,经形态学和DNA条形码技术进行分类鉴定.结果:在保护区沿岸共采集到蚊幼虫400余条,育出成虫68头;蚋蛹400头、幼虫1 000余条,育出成虫159头;经经形态学和DNA条形码技术鉴定为蚊科(Family Culicidae Meigan,1818)2亚科3属共10种,占贵州省记述种9.17％;蚋科(Family Simuliidae Newman,1834)1亚科1属共8种,占贵州省记述种21.62％;调查亦见贵州省新记述五指库蚊、窄足真蚋和昌隆蚋.结论:此次调查贵州威宁草海国家级自然保护区蚊科10种、蚋科8种,多为嗜吸人、畜血常见种.

为了解安宁河底栖动物群落结构及其影响因素,分别于丰水期(2015年7、8月)和枯水期(2016年1、2月)开展了安宁河中游干支流底栖动物的2次调查,并于2015年7月至2016年6月进行安宁河支流的周年调查.共检出底栖动物5门115属122种,其中水生昆虫居多(109种).干流丰、枯水期底栖动物的密度和生物量都明显低于支流,丰水期干支流底栖动物的密度和生物量都明显低于枯水期.安宁河支流全年优势种为四节蜉(Baetis sp.)、蚋(Simulium sp.)、高翔蜉(Epeorus sp.)、花翅蜉(Baetiella sp.)、扁襀(Peltoperlidae spp.)和小蜉(Ephemerella sp.).安宁河支流底栖动物密度以12月最高,7月最低;生物量以1月最高,7月最低.典范对应分析(CCA)分析结果显示,影响丰水期安宁河底栖动物分布的关键环境因子为底质类型和海拔,影响枯水期底栖动物分布的主要环境因子为流速、海拔和水温;影响安宁河支流底栖动物群落结构周年变化的主要环境因子为水温与电导.研究为高海拔地区河流生物多样性研究和保护提供科学参考.

为了确定COI基因序列分析在蚋科中的分类地位,本研究测定了双齿蚋(Simulium bidentatum) COI基因序列,分析该基因序列特征;下载与其同源性较高的12个蚋种的COI基因序列15条,进行同源性分析和分子系统发育研究.结果 显示,双齿蚋COI基因序列(DQ534946)与Snotiale、S.snowi、S.nyssa等蚋种的COI基因序列同源性最高,在贝叶斯分析所构建的分子系统进化树中,不同蚋组的序列各自聚成一枝,双齿蚋序列(DQ534946)未与其他任何蚋种聚为一枝.研究结果表明,双齿蚋COI基因序列与蚋亚属序列同源性较高,COI基因序列分析能较好建立蚋亚属内组间关系,双齿蚋未与其他蚋组序列聚为一枝,分类至淡足蚋组并不合适,支持分类至阿根蚋组.本研究进一步明确了COI基因序列分析在蚋科分子系统发育研究中的意义,并在一定程度上解决了双齿蚋在蚋科的分类争议.

目的 对中老越三国交界边境地区白天叮咬人,并引起严重皮炎的吸血蚋进行系统分类鉴定,明确其准确种类,为该地区防控相关疾病提供科学依据.方法 2019年5月6日下午17:00在云南省江城县中老越三国交界边境地区河边采用人诱法采集吸血昆虫样本,采用无损伤昆虫形态的方法消化昆虫体表细胞,提取基因组DNA,PCR扩增昆虫COI基因,测序;分别采用Clustal X2.1、DNAStar(MegAlign)和Mega-X等生物信息学软件进行序列分析;同时对昆虫进行透明、脱水等处理,在显微镜下观察昆虫形态学特征.结果 在云南省江城县中老越三国交界边境地区小河边采集到9只吸血蚋,它们叮咬人后都能引起严重皮炎症状.9只吸血蚋形态学鉴定结果显示,它们都具有:体色较黑,头额部较宽,两复眼分离,触角11节,口器短厚;翅宽阔,翅膜透明,翅上无鳞,翅脉发达,径分脉不分叉,无基室,翅径脉基段光裸;中胸盾片黑色,无纵条,中胸侧膜、下侧片光裸;腹部有一个球形受精囊,表面无饰纹等相似的形态学特征.但在生殖叉突,有8只蚋生殖叉突两臂末端膨大,有外突和内突,形成三叉头状;而另1只蚋生殖叉突两臂末端不膨大,具有外突,并骨化.分子鉴定结果显示,9只蚋位于两个进化分支内,其中8只蚋与S.nodos um(节蚋)处于相同进化分支,核苷酸同源性最高(97.3％～100％);而另一只与S.siripoomense处于相同进化分支,核苷酸同源性最高(96.8％～98.5％).结论 江城县存在S.nodosum和S.siripoomense两种白天叮咬人并引起严重皮炎的吸血蚋,其中S.nodosum为优势种群,S.siripoomense为国内首次报道.

记述采自云南省蚋属Simulium蚋亚属Simulium脉蚋组venustum 1新种,以腹部特征命名为毛腹蚋Simulium(Simulium)setiferorum sp.nov.,对其雌虫特征进行了描述.该新种与来自中国辽宁的新宾蚋S.(S.)xinbinen Sun,1994形态相似,但新种的生殖器与上述蚋种明显不同.文章还编制了中国蚋亚属脉蚋组雌虫的分种检索表.

目的 采用DNA条形码coi基因对海南省文昌市采集的双翅目毛蠓科未知昆虫进行分子鉴定,建立标准化分子鉴定流程,并为相关疾病的流行风险提供防控依据.方法 诱蚊灯法采集海南省文昌市双翅目毛蠓科昆虫,碱裂解法提取基因组DNA,PCR扩增coi基因出现特异性条带的产物进行Sanger测序,序列在NCBI中进行BLAST同源比对,结合形态学特征初步确定物种.使用MEGA X软件通过计算遗传距离、构建系统发育树进行分子进化分析.结果 出现特异性条带的5个PCR产物经测序、同源比对后,与星斑蛾蚋序列相似性最高,确定该物种为星斑蛾蚋(Psychoda alternata).海南省文昌市星斑蛾蚋coi序列的核苷酸中A+T平均含量为69.42％,G+C平均含量为30.58％,具有A+T偏好性.系统发育树呈现海南省文昌市星斑蛾蚋分别与巴基斯坦、日本的星斑蛾蚋系统发育关系最接近.结论 基于coi基因的DNA条形码技术可用于星斑蛾蚋的分子鉴定.星斑蛾蚋在环境中的存在,提示有发生蝇蛆病的风险.

目的 使用DNA条形码鉴定方法对两名儿童从尿道排出的不明昆虫幼虫进行鉴定,解决未知昆虫幼虫无法利用传统形态学鉴定方法进行鉴定的难题,为主诊医生后期制定针对性治疗方案提供科学依据.方法 以家长收集并送检的患儿从尿道排出的不明活体昆虫幼虫为材料,先进行图像采集和形态学描述,然后取部分昆虫幼虫组织提取基因组DNA,利用多细胞无脊椎动物线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ(COⅠ)的通用引物进行DNA扩增,PCR产物直接从两端测序,DNA测序结果以MEGA6软件验证图谱确定为有效序列后,经拼接、去除通用引物序列,最终得到658 bp的COⅠ基因片段碱基序列.上传数据与GenBank和BOLD数据库中的序列进行同源性比对,建立系统发育树.结果 序列测定结果与GenBank和BOLD中公布的白斑蛾蚋(Clogmia albipunctata)的COⅠ序列相似性为100％.选取GenBank中与目的片段核苷酸序列比较所得相似性较高的7种物种序列,以红头丽蝇为外群,构建NJ树,发现昆虫幼虫的序列以及Gen-Bank 中的白斑蛾蚋聚为一类,毛蠓科的全部物种聚成一支,置信度高达 100％.结论 根据实验结果可以判断这两名儿童从尿道排出的不明昆虫活虫为白斑蛾蚋的幼虫.DNA条形码技术不仅可以快速准确识别物种种类,还能鉴定近缘种,发现隐存分类单元,是对非成虫发育形态昆虫的快速、准确的种类鉴定方法,可以有效弥补形态学鉴定方法的不足.

目的 掌握丽水市蚋虫种类和地区分布,评估蚋虫对丽水市旅游产业的影响,为蚋虫密度监测及蚋传疾病防控工作奠定科学基础.方法 在丽水市9县(区)开展研究,每县(区)选择2个乡镇,每乡镇选择1～2个旅游景区所在村作为现场进行调查.从不同生境采集蚋卵、幼虫和蛹,用人诱停落法收集蚋虫成虫.用自制调查问卷调查民宿从业者(村民)和游客(导游)对蚋虫的知晓和侵害情况.建立风险评估指标和风险评估指数矩阵进行风险评估.结果 在丽水市庆元县五大堡乡西洋村的西洋殿景区发现蚋科蚋亚科蚋族蚋属杂色蚋组草海蚋分布,密度1.78只/人时.问卷调查122人中88.52％从未听过蚋虫,42.62％被蚋虫叮咬过,其中53.85％被叮咬2次以上,92.31％叮咬在下肢,被叮咬后主要表现为叮咬部位的痛、痒、肿胀,34.62％去就诊或自行购药.91.80％不知晓蚋虫传播疾病种类,86.89％不知晓避免被叮咬方法,被叮咬后100.00％会缩短在本景区旅游时间并不推荐亲友来丽游玩.因蚋虫叮咬减少旅游损失每年合计2.48万元.评估结果是丽水市蚋虫影响旅游业发展的可能性为"不太可能",严重程度为"极低".结论 丽水市蚋虫地区分布相对局限,侵害时间较为短暂,但在其孳生地区对当地群众生活和旅游产业存在一定影响,需定期开展监测,动态评估风险.