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社会隔离对小鼠认知功能及海马星形胶质细胞表型转换的影响
编辑人员丨6天前
目的:探讨社会隔离(social isolation,SI)对小鼠认知行为及海马星形胶质细胞表型转换的影响。方法:20只3~4周龄雄性C57BL/6小鼠根据随机数字表法分为正常群居组(group house,GH组)和社会隔离组(SI组),SI组小鼠单笼饲养8周建立社会隔离模型,GH组小鼠5只/笼正常饲养。采用新旧事物识别实验和新旧位置识别实验检测小鼠认知功能;采用免疫组织化法、RT-PCR和Western blot分别检测小鼠海马星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达变化;Sholl Analysis定量分析星形胶质细胞形态变化;RT-PCR和Western blot法检测海马A1和A2型星形胶质细胞标志物蛋白酶体亚单位β-8(proteasome subunit beta 8,PSMB8)以及钙结合蛋白S100家族的成员(a member of the S100 family of Ca 2+-binding proteins,S100A10)的表达。采用GraphPad Prism 6.0软件进行统计分析,两组间比较采用 t检验。 结果:认知功能结果显示,SI组小鼠新事物识别指数[(-5.54±3.30)%,(33.42±7.14)%; t=4.680, P=0.001]和新位置识别指数[(-7.96±4.81)%,(23.55±8.20)%; t=3.670, P=0.008]均低于GH组。免疫组化结果显示,SI组小鼠海马GFAP阳性细胞数明显低于GH组[(369.90±42.97)个,(544.90±57.64)个; t=2.480, P=0.023]。Sholl分析结果显示,SI组小鼠海马星形胶质细胞突起回缩,突起分支与同心圆交点数目减少,在距离星形胶质细胞胞体6、8、10、12、14、16 μm处,两组间比较均差异有统计学意义(均 P<0.05)。Western blot结果显示,SI组GFAP蛋白的表达低于GH组[(0.85±0.05),(1.03±0.06); t=2.527, P=0.028];PCR结果显示,SI组GFAP mRNA表达低于GH组[(0.83±0.05),(1.00±0.03); t=2.970, P=0.018];SI组小鼠海马区A1表型标志物PSMB8 mRNA表达[(1.58±0.17),(1.00±0.06); t=2.931, P=0.011]和A2表型标志物S100A10 mRNA表达[(1.52±0.14),(1.00±0.07); t=3.121, P=0.007]均高于GH组。SI组营养因子IGF-1 mRNA表达低于GH组[(0.73±0.07),(1.00±0.08); t=2.327, P<0.05],而SI组LCN2 mRNA、IL-1β mRNA、TNF-α mRNA表达均高于GH组[(1.12±0.03),(1.00±0.03), t=2.575, P<0.05;(1.76±0.19),(1.00±0.07), t=3.460, P<0.01;(2.18±0.42),(1.00±0.07), t=2.427, P<0.05]。 结论:社会隔离诱导的小鼠认知障碍可能与海马星形胶质细胞表型转换有关。
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编辑人员丨6天前
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氧化环境下 PSMB5基因对人晶状体上皮细胞的保护作用
编辑人员丨6天前
目的::研究氧化环境下高表达蛋白酶体β5亚单位( PSMB5)对人晶状体上皮细胞的保护作用。 方法::实验研究。建立稳定过表达 PSMB5的人晶状体上皮细胞株(实验组),以空白载体转染细胞株为对照组。通过Western blot法分别检测2组细胞内PSMB5、蛋白酶体β2亚单位(PSMB7)和蛋白酶体β1亚单位(PSMB6)蛋白表达情况;人工合成的多肽Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC(LLVY)、Boc-Bal-Gly-Arg-AMC(VGR)及Z-Leu-Leu-Glu-βNA(LLE)分别检测2组细胞内 PSMB5、 PSMB7和 PSMB6蛋白活性的变化;并将2组细胞置于40 μmol/L H 2O 2环境下,观察细胞增殖能力的变化及细胞内羰基化蛋白含量改变的情况。数据采用独立样本 t检验进行比较。 结果::转染 PSMB5的实验组人晶状体上皮细胞株内PSMB5蛋白的表达量较对照组高,同时PSMB6和PSMB7蛋白的表达量也相对高;而相应蛋白酶体亚单位的蛋白酶活性也显著增加。在40 μmol/L H 2O 2环境下处理4 h后,对照组和实验组细胞的增殖能力均受到抑制,2组细胞的增殖率分别为(6.99±3.43)%和(72.47±5.56)%,但对照组细胞的增殖能力受到抑制的程度明显高于实验组,2组之间的差异有统计学意义( t=22.41, P<0.001)。经过相同处理后,对照组和实验组细胞内羟基化蛋白含量分别为(2.65±0.44)nmol/mg和(1.63±0.36)nmol/mg,均高于处理前[分别为(0.41±0.10)nmol/mg和(0.45±0.12)nmol/mg],但是实验组细胞内氧化蛋白含量明显低于对照组细胞内氧化蛋白的含量,差异具有统计学意义( t=4.01, P=0.008)。 结论::氧化环境下,高表达 PSMB5基因提高了人晶状体上皮细胞内蛋白酶体的活性及抗氧化能力,具有保护作用。
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编辑人员丨6天前
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免疫蛋白酶体及相关的自身炎症性疾病
编辑人员丨2023/8/6
免疫蛋白酶体是由标准蛋白酶体在IFN-γ或TNF-α诱导下产生,负责水解细胞内衰老及外源性蛋白质的细胞器,借此它能参与氨基酸更新及抗原提呈等生理过程.其关键亚单位β5i的编码基因突变,可导致一类罕见的遗传性疾病——蛋白酶体相关的自身炎症性疾病(proteasome-associated autoinflammatory syndrome,PRAAS),包括中条-西村综合征(nakajo-nishimura syndrome,NNS)、关节挛缩-肌肉萎缩-贫血-脂膜炎性脂肪萎缩综合征(joint contractures,muscular atrophy,microcytic anemia,and panniculitis induced lipodystrophy syndrome,JMP)以及伴发热和脂肪萎缩的慢性非典型嗜中性粒细胞皮病(chronic atypical neutrophilic dermatosis with lipodystrophy and elevated temperature syndrome,CANDLE),这类疾病的临床特点有发热、皮疹、进行性脂肪萎缩以及关节畸形等,目前尚缺乏有效的治疗方法,预后极差.国内对该类疾病认识不深,可能存在误诊漏诊的情况.因此,本文旨在对蛋白酶体相关的自身炎症性疾病的发病机制、临床表现、诊断及治疗等进行综述.
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编辑人员丨2023/8/6
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免疫蛋白酶体亚单位低分子量多肽7(β5i)的研究进展
编辑人员丨2023/8/6
泛素-蛋白酶体系统(UPS)是真核细胞内非溶酶体通路的蛋白质降解主要途径,UPS水解活性与β1、β2、β5亚基密切相关,在特定的条件下,β1、β2、β5亚基可被相应的免疫亚基β1i、β2i和低分子量多肽7(LMP7或β5i)替代,其中β5i活性最强,新形成的结构被称为免疫蛋白酶体(immunoproteasome).β5i在自身免疫性疾病、心脑血管疾病、肥胖与代谢疾病、肿瘤等方面发挥着重要作用.本文综述了β5i在上述疾病中的研究进展,以便为药物治疗提供理论依据,从而改善疾病预后.
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编辑人员丨2023/8/6
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IGF-1激活20S蛋白酶体β5亚单位活性对N2a细胞活力的影响
编辑人员丨2023/8/5
目的:探索胰岛素样生长因子(IGF-1)对蛋白酶体的作用,并观察其对小鼠神经母细胞瘤来源的N2a细胞活力的影响,寻找维持细胞活力的有效手段.方法:体外培养N2a细胞加入不同浓度的IGF-1后,分析N2a细胞肽基谷氨酰肽水解酶样(PGPH-L)、胰蛋白酶样(T-L)和糜蛋白酶样(CT-L)三种蛋白酶体活性的变化,real time RT-PCR比较分别具有PGPH-L活性、T-L活性和CT-L活性的20S蛋白酶体β1亚单位(PSMB1)、20S蛋白酶体β2亚单位(PSMB2)、20S蛋白酶体β5亚单位(PSMB5) mRNA水平的变化.双荧光素酶实验检测IGF-1对PSMB5转录活性的影响.CCK8实验和Hoechst 33342/PI染色实验检测IGF-1和PSMB5对N2a细胞活性和凋亡的影响.结果:应用不同浓度的IGF-1干预N2a细胞后,PGPH-L活性和CT-L活性均显著增高,其中CT-L活性升高最显著,50 ng/ml和100 ng/ml IGF-1干预后,CT-L活性分别是对照组的1.32倍(P<0.05)和1.49倍(P<0.01),但是IGF-1干预后T-L活性无显著变化;realtime RT-PCR结果显示应用100 ng/ml IGF-1作用后,PSMB5和PSMB1的mRNA表达水平显著上升(P<0.05);双荧光素酶结果显示IGF-1能够上调N2a细胞PSMB5转录活性;CCK8实验和Hoechst 33342/PI染色结果表明IGF-1干预使N2a细胞活力增强(P<0.01),凋亡细胞减少;相反,敲低PSMB5后,N2a细胞活力减弱(P<0.05),凋亡细胞增多;使用IGF-1干预PSMB5-siRNA组,发现PSMB5-siRNA组细胞活力较NC-siRNA组降低(P<0.05)、凋亡细胞增加.结论:IGF-1通过激活CT-L蛋白酶体活性,提高N2a细胞的活力.
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编辑人员丨2023/8/5
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20S蛋白酶体β5亚单位对小鼠神经干细胞增殖和分化能力的影响
编辑人员丨2023/8/5
目的:探讨20S蛋白酶体β5亚单位(PSMB5)对小鼠神经干细胞(NSCs)增殖和分化能力的影响.方法:体外分离培养新生BALB/c小鼠(P0)的NSCs,应用免疫荧光染色观察PSMB5在NSCs中的表达与分布;利用real time RT-PCR方法检测PSMB5 mRNA的表达;荧光分光光度法测定PSMB5相关的糜蛋白酶活性的变化;应用PSMB5-siRNA抑制P0 NSCs中PSMB5基因的表达;使用含有PSMB5基因的重组慢病毒((lenti-PSMB5))感染成年小鼠(P90) NSCs.利用CCK-8试验检测PSMB5对NSCs增殖能力的影响,利用BrdU和Tuj1染色观察PSMB5基因敲低和过表达对NSCs增殖及分化能力的影响.结果:PSMB5主要分布于NSCs的胞浆,P0的NSCs分化后,PSMB5 mRNA的表达下调.成年和老年小鼠NSCs中糜蛋白酶体活性较新生小鼠显著降低.PSMB5敲减后NSCs增殖能力和向神经元分化能力减弱,PSMB5过表达后NSCs增殖能力和向神经元分化能力增强.结论:PSMB5可能参与小鼠NSCs增殖及分化的调控.
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编辑人员丨2023/8/5
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PSMB5基因沉默对运动促进小鼠海马神经发生的影响
编辑人员丨2023/8/5
目的:观察20S蛋白酶体β5亚单位(PSMB5)基因沉默在小鼠自主跑轮运动促进海马神经发生中的作用.方法:BABL/c小鼠随机分为慢病毒对照组(Lenti-ctrl-shRNA)和靶向PSMB5的shRNA重组慢病毒感染组(Lenti-PSMB5-shRNA).小鼠海马通过立体定位注射感染慢病毒,2周后应用Western Blot检测PSMB5基因沉默效率,随后小鼠自主跑轮运动4周.应用荧光酶标仪检测蛋白酶体活性,Ki67、DCX免疫荧光染色观察海马齿状回神经干细胞(NSCs)的增殖分化潜能,Y迷宫自发交替和新物体识别实验观察小鼠学习记忆能力.结果:Lenti-PSMB5-shRNA组小鼠海马PSMB5蛋白表达水平较Lenti-ctrl-shRNA组下降44.59% (P<0.01),海马蛋白酶体活性较Lenti-ctrl-shRNA组下降37.66% (P< 0.01).Lenti-PSMB5-shRNA组小鼠SGZ区Ki67阳性细胞数较Lenti-ctrl-shRNA组显著降低(P<0.05),DCX阳性细胞数较Lenti-ctrl-shRNA组显著降低(P<0.05).Lenti-PSMB5-shRNA组小鼠Y迷宫自发交替率较Lenti-cttrl-shRNA组明显下降(P< 0.05).Lenti-PSMB5-shRNA组小鼠新物体识别正确率与Lenti-ctrl-shRNA组相比明显下降(P<0.05).结论:PSMB5基因沉默导致小鼠海马蛋白酶体活性下降,进而抑制了运动对海马神经发生的促进作用,提示蛋白酶体活性在自主跑轮运动促进海马神经发生的过程中起重要作用.
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编辑人员丨2023/8/5
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隆纳霉素引起三阴性乳腺癌细胞周期阻滞基因表达谱及关键通路的生物信息学分析
编辑人员丨2023/8/5
目的 利用生物信息学方法分析隆纳霉素对人三阴性乳腺癌细胞系细胞周期阻滞的作用机制.方法 利用隆纳霉素处理人三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-468细胞48、72 h,计算IC50,采用流式细胞术分析细胞周期变化.选取0.8μmol/L隆纳霉素处理48 h的MDA-MB-468细胞和未加药处理的对照细胞进行转录组测序,测序数据经质量控制过滤后,使用DESeq21.16.1软件进行差异表达基因分析,并进行基因本体和京都基因与基因组百科全书功能分析及基因集富集分析,用STRING工具进行蛋白质相互作用网络分析及用AutoDock 1.5.6软件进行分子对接预测.结果 隆纳霉素干预MDA-MB-468细胞48、72 h的IC50分别为2.733和0.866μmol/L,且流式细胞术分析显示隆纳霉素干预48 h有明显G2/M阻滞作用.隆纳霉素干预后共筛选出1764个差异表达基因,主要定位于NF-κB介导的TNF-α通路和P53通路,G蛋白γ亚基7(GNG7)、G蛋白γ亚基11(GNG11)、C-X-C基序趋化因子配体8(CXCL8)、腺苷酸环化酶2(ADCY2)等基因可能是隆纳霉素作用基因网络中的关键节点.隆纳霉素与DNA分子、拓扑异构酶、基因表达调节蛋白[20S蛋白酶体β亚单位5(PSMB5)和含有SET结构域7的组蛋白赖氨酸甲基转移酶(SETD7)]有较好的结合及相互作用.结论 隆纳霉素具有与蝴蝶霉素类似的功能,其通过与DNA-拓扑异构酶Ⅰ复合物中的DNA分子结合发挥抗肿瘤活性;还可通过与基因表达调节蛋白PSMB5和SETD7结合影响GNG7、GNG11、CXCL8、ADCY2等基因的表达水平,从而上调NF-κB介导的TNF-α通路和P53通路,最终导致乳腺癌细胞发生G2/M阻滞,发挥抗肿瘤作用.
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编辑人员丨2023/8/5
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免疫蛋白酶体亚单位在疾病发生发展中的研究进展
编辑人员丨2023/8/5
泛素-蛋白酶体系统(UPS)是真核细胞中特异性降解蛋白的主要途径.UPS中蛋白酶体的蛋白水解酶活性分别由β1、β2和β5亚单位表达调节,在IFN-γ、TNF-α、炎症反应、氧化应激等条件诱导下,β1、β2和β5可对应性被β1i(LMP2)、β2i(LMP10或MECL-1)和β5i(LMP7)取代,组装形成免疫蛋白酶体.免疫蛋白酶体比标准蛋白酶体对免疫反应的调节作用更强,可更快地加工提呈抗原,调节炎症因子分泌、Th细胞增殖分化,维持细胞蛋白稳态.免疫蛋白酶体在自身免疫性疾病、肿瘤、心脑血管疾病等多种疾病发生、发展及转归中发挥重要作用,但也是一把双刃剑,适时适量的产生有利于保护机体,而过度诱导合成则会危害机体.本文对免疫蛋白酶体亚单位与疾病发生发展的相关性进行综述,为相关疾病临床诊断及治疗提供参考.
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编辑人员丨2023/8/5
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鹿血晶通过降低肾小管上皮细胞的5-羟色胺合成及降解抑制顺铂诱导的肾损伤
编辑人员丨2023/8/5
目的 探讨鹿血晶保护肾脏以及抑制顺铂诱导肾损伤的作用机制.方法 人肾小管上皮HK-2细胞设对照组、模型组及鹿血晶(160、400、1000 μg/mL)组和单胺氧化酶A(monoamine oxidase A,MAO-A)抑制剂氯吉兰(15μmol/L)组,加入药物预处理1h后加入顺铂(20μmol/L)刺激24 h诱导细胞损伤.雄性ICR小鼠随机分为对照组、模型组及鹿血晶(0.78 g/kg)组,鹿血晶组预给药7d,然后模型组及鹿血晶组ip顺铂(25mg/kg)诱导肾损伤,继续治疗3d后处死动物.检测细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)水平、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平,以及细胞及小鼠肾组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)水平;采用荧光探针DCFH-DA、Mito-Tracker Red CMXRos及荧光染料Hoechst 33342分别检测细胞内ROS含量、定位及细胞凋亡情况;Western blotting 法检测细胞 B 淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关 X 蛋白(Bcl-2 associated X,Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9、NADH脱氢酶 1(NADH dehydrogenase 1,ND1)、细胞色素B(cytochrome b,CYTB)、ATP 合成酶亚单位6(ATP synthase 6,ATP6)、核因子-κB p65(nuclear factor kappa-B,NF-κB p65)、磷酸化 NF-κB p65(phosphorylated NF-κBp65,p-NF-κBp65)、抑制子 κBα(inhibitor of NF-κB,IκBα)、p-IκBα 蛋白表达,细胞及小鼠肾组织色氨酸羟化酶 1(tryptophan hydroxylase,Tph1)、芳香簇氨基酸脱羧酶(aromatic amino acid decarboxylase,AADC)、5-HT2A 受体(5-HT2Areceptors,5-HT2AR)、MAO-A蛋白表达;采用苏木素-伊红(HE)染色检测小鼠肾组织病理损伤;采用免疫组化法检测小鼠肾组织Tph1、AADC、5-HT2AR、MAO-A表达.结果 与模型组比较,鹿血晶可抑制HK-2细胞内ROS、MDA及上清液中TNF-α、IL-1β水平(P<0.05、0.01),降低细胞内GSH、SOD水平(P<0.05、0.01),抑制细胞凋亡.鹿血晶(1000μg/mL)组与氯吉兰组的作用效果接近,两组对顺铂诱导NF-κB p65磷酸化、细胞凋亡激活(Bax、Caspase-3、Caspase-9表达上调及Bcl-2表达下调)、呼吸链功能下降(ND1、CYTB、ATP6表达下调及ATP水平降低)的逆转作用也接近.并且,鹿血晶(1000 μg/mL)组可明显抑制顺铂诱导的HK-2细胞Tph1、AADC、5-HT2AR、MAO-A表达上调以及5-HT含量升高(P<0.05、0.01),而氯吉兰组使5-HT水平进一步升高(P<0.01).荧光探针检测表明,线粒体是顺铂刺激时HK-2细胞产生ROS的部位,且鹿血晶(1000μg/mL)组和氯吉兰组对其有相似的抑制效果.HE染色显示,顺铂致小鼠肾组织损伤的部位主要在近端肾小管上皮细胞,免疫组化显示该部位也是Tph1、AADC、5-HT2AR、MAO-A表达上调最明显的部位.鹿血晶可抑制顺铂诱导的Tph1、AADC、5-HT2AR、MAO-A蛋白表达的上调及肾组织5-HT、ROS含量升高(P<0.01).结论 鹿血晶活性成分抑制顺铂诱导肾损伤的机制可能是直接作用于肾脏近端肾小管上皮细胞,抑制顺铂对细胞Tph1、AADC、5-HT2AR、MAO-A表达的上调,从而抑制细胞的5-HT合成及线粒体5-HT降解,达到抑制线粒体ROS生成、保护呼吸链,最终抑制氧化应激、炎症、细胞凋亡的效果.
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编辑人员丨2023/8/5
