为助力解决蟾蜍资源日益减少的窘境,探究蟾蜍中功效成分蟾蜍甾烯类化合物(BDs)生物合成部位及代谢途径,为蟾蜍资源可持续利用提供理论基础.利用UHPLC-Orbitrap-MS对蟾蜍多组织进行检测,筛选BDs在蟾蜍体内的合成部位,并利用质谱成像、匀浆孵化实验加以验证,确定BDs生物合成的关键器官.蟾蜍组织分布结果表明除耳后腺、皮肤组织外,BDs在肝脏中含量最多,胆汁中浓度最高,因此推测肝脏能够生物合成BDs,并通过胆汁代谢分布向蟾蜍全身.DESI-MSI质谱成像检测结果也指出,BDs主要富集在蟾蜍肝脏而并非是未发育成熟的耳后腺.蟾蜍肝脏匀浆孵化证明了蟾蜍肝脏能够独立生物合成BDs.该研究表明中华大蟾蜍在变态、发育、生长过程中,肝脏是蟾蜍体内合成BDs的重要器官,为生物合成BDs以及资源可持续利用提供了有力的理论支撑.

目的 研究酒制前后蟾酥中蟾蜍甾烯的含量变化及对外用透皮吸收的影响.方法 样品溶液的分析采用Waters XBridge C18色谱柱(100 mm×4.6 mm,3.5 μm);流动相乙腈-0.2％磷酸水,梯度洗脱;柱温35℃;体积流量0.7 mL/min;检测波长296 nm.通过体外Franz扩散池法测定酒制前后蟾酥透皮吸收率.结果 24批样品中脂蟾毒配基、华蟾酥毒基、蟾毒灵、沙蟾毒精、蟾毒它灵、华蟾毒它灵在酒制前平均质量分数分别为3.20％、3.73％、1.69％、2.48％、1.44％、1.85％;酒制后平均质量分数分别为3.06％、3.63％、1.65％、2.30％、1.41％、1.82％.酒制前6种成分体外透皮吸收率分别为2.65％、2.44％、6.32％、6.01％、3.84％、5.44％;酒制后透皮吸收率分别为2.10％、2.36％、5.83％、4.44％、3.63％、4.73％.结论 蟾蜍甾烯类成分经酒制后含量和其透皮吸收比率均有不同程度的降低,其中影响较大成分为沙蟾毒精和脂蟾毒配基.

目的 研究蟾皮(中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans的干燥皮)中的蟾蜍甾烯类成分及其细胞毒活性.方法 利用硅胶、ODS、凝胶、高效液相色谱等方法对中药蟾皮的化学成分进行分离,运用IR、UV、NMR、MS及单晶X-衍射等波谱学方法对分离得到的化合物进行结构鉴定,采用MTT法测试化合物对人肝癌HepG2细胞、人非小细胞肺癌A549细胞及人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制活性.结果 从蟾皮95％乙醇提取物的氯仿萃取部位共分离鉴定了 14个蟾蜍甾烯类成分,分别为3,23-二羟基-γ-内酯-24-去甲-14,20(22)-二烯-21-胆酸(1)、3-表-酯蟾毒配基(2)、3-表-去乙酰华蟾蜍精(3)、3-表-蟾蜍灵(4)、3-氧-去乙酰华蟾蜍精(5)、3-氧-蟾蜍它灵(6)、3-氧-伪沙蟾蜍精(7)、3-oxo-Δ4(5)-resibufogenin(8)、3-oxo-Δ4(5)-cinobufotalin(9)、3-dehydroscillarenin(10)、3-氧-毛地黄毒苷配基(11)、digirezigenin(12)、bufogargarizin A(13)、bufogargarizin B(14).化合物6、9、10对HepG2、A549及HeLa细胞具有显著的增殖抑制活性,半数抑制浓度(IC5o)为0.11～1.67 μmol/L.结论 化合物1为新天然产物,并首次报道其核磁数据;化合物1～14均为首次从蟾皮中分离得到;化合物 6、9、10具有显著的细胞毒活性.

目的:研究蟾酥中的化学成分,建立蟾酥HPLC指纹图谱,并探究其治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的活性成分和作用机制.方法:采用HPLC-Q-TOF/MS技术对蟾酥进行成分鉴定,建立HPLC指纹图谱,同时运用网络药理学方法进行靶点和通路分析.结果:通过质谱鉴别出87个化学成分,包含生物碱类、蟾蜍甾二烯类、氨基酸及其酰化物等;建立10批蟾酥HPLC指纹图谱,共标定17个共有峰,相似度均≥0.950,通过对照品指认出五羟色胺盐酸盐、蟾蜍色胺、蟾毒它灵、日蟾毒它灵、沙蟾毒精、蟾毒灵、华蟾酥毒基、酯蟾毒配基8个化学成分;其中华蟾酥它灵、19-氧代华蟾酥它灵及指纹图谱指认的8个成分为蟾酥发挥治疗COVID-19的关键成分,得到包括PIK3CA、AKT1、MAPK1等10个核心靶点,涉及冠状病毒-新冠肺炎通路、PI3K-Akt信号通路、免疫调节通路等.推测蟾酥可能通过直接抑制病毒、改善免疫功能和减少炎症反应来发挥作用.结论:建立的指纹图谱可较为全面的表征蟾酥药材,其主要色谱峰对应的成分与蟾酥治疗COVID-19密切相关,联合网络药理学为蟾酥治疗COVID-19活性成分及作用机制的研究奠定基础,为其他防治病毒感染成分的筛选提供参考.