目的:观察针刺对水液缺乏型干眼(ATD)豚鼠眼表症状及泪腺组织中血管活性肠肽(VIP)/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/水通道蛋白5(AQP5)信号通路相关蛋白表达的影响,探讨针刺治疗ATD的作用机制.方法:40只豚鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、假针组和西药组,每组8只.皮下注射氢溴酸东莨菪碱复制ATD模型.针刺组针刺双侧"睛明""攒竹""丝竹空""太阳""瞳子髎",每次15 min,每日1次;假针组每 5 min钝针点压上述穴位 1次,共 3次;西药组双眼滴玻璃酸钠滴眼液,3次/d,每次 1滴.以上3组均治疗14 d.分别于造模前、造模后及干预后进行酚红棉线泪液分泌量(PRT)实验、测定泪膜破裂时间(BUT)和角膜荧光素钠染色评分(FLS).干预后泪腺称重,计算泪腺指数;HE染色法观察泪腺组织病理形态变化;免疫荧光染色法检测泪腺组织AQP5的表达;ELISA法检测泪腺组织VIP和AQP5含量;Western blot法检测泪腺组织VIP、cAMP、PKA、磷酸化(p)-PKA及AQP5蛋白表达.结果:造模后,与空白组比较,其余 4组PRT减少、BUT缩短(P<0.01,P<0.05),FLS升高(P<0.05,P<0.01).干预后,与空白组比较,模型组PRT减少、BUT缩短(P<0.01),FLS升高(P<0.01),泪腺指数降低(P<0.01),泪腺组织VIP含量、AQP5免疫荧光强度及含量降低(P<0.01),VIP、cAMP、PKA、p-PKA和AQP5蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05).干预后,与模型组比较,针刺组和西药组PRT增多、BUT延长(P<0.01,P<0.05),FLS降低(P<0.01,P<0.05),泪腺指数升高(P<0.05),泪腺组织VIP含量、AQP5免疫荧光强度及含量升高(P<0.01);针刺组泪腺组织VIP、cAMP、PKA、p-PKA、AQP5蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);西药组VIP和AQP5的蛋白表达升高(P<0.05).与假针组比较,针刺组和西药组PRT增多、BUT延长(P<0.01,P<0.05),FLS降低(P<0.01,P<0.05),泪腺组织VIP含量、AQP5免疫荧光强度及含量升高(P<0.05,P<0.01);针刺组泪腺组织VIP、cAMP、PKA、AQP5蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);西药组AQP5的蛋白表达升高(P<0.05).与西药组比较,针刺组PRT增多(P<0.05).空白组泪腺结构无明显异常;模型组和假针组泪腺上皮细胞明显萎缩,可见淋巴细胞浸润;针刺组和西药组泪腺上皮细胞结构基本正常,部分腺腔扩张,可见少量淋巴细胞浸润.结论:针刺可减轻干眼眼表损伤,促进泪液分泌,其作用机制可能与激活 VIP/cAMP/PKA/AQP5 信号通路,增强泪腺分泌功能有关.

目的:基于VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路探讨益气润肠方对气虚便秘模型大鼠作用及其机制.方法:选取48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、乳果糖组、益气润肠方低剂量组、益气润肠方中剂量组和益气润肠方高剂量组,每组8只.空白组大鼠正常饮食,每日给予生理盐水灌胃,其余大鼠给予洛哌丁胺混悬液3 mg/(kg·d)灌胃加饥饱饮食2周制作气虚便秘模型.造模成功后,空白组及模型组每日给予生理盐水灌胃,乳果糖组给予乳果糖口服溶液1.67 g/(kg·d)灌胃,益气润肠方高、中、低剂量组分别给予益气润肠方17.5、8.75、4.375 g/(kg·d)灌胃,连续2周.14 d后称量大鼠粪便湿重、粪便干重并计算粪便含水率;留取结肠组织,采用苏木精伊红染色法观察结肠病理变化,qPCR检测大鼠结肠血管活性肠肽(VIP)、环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、水通道蛋白3(AQP3)mRNA表达水平,Western blot检测大鼠VIP、AQP3蛋白表达水平.结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量明显降低(P<0.01),粪便湿重及粒数明显减少(P<0.01);与模型组比较,益气润肠方低、中、高剂量组和乳果糖组体质量明显增高(P<0.01,P<0.05),粪便湿重增加、粪便粒数增多(P<0.05,P<0.01),但粪便含水率无统计学意义(P>0.05).与乳果糖组比较,益气润肠方中、高剂量组粪便湿重明显增加、粪便粒数显著增多(P<0.05).与空白组比较,模型组VIP、cAMP、PKA、AQP3 mRNA表达水平明显降低(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,乳果糖组及益气润肠方各剂量组VIP、cAMP、PKA、AQP3 mRNA表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),益气润肠方高剂量组效果最显著(P<0.01),且优于乳果糖组(P<0.05).与模型组比较,益气润肠方各剂量组VIP、AQP3的蛋白表达水平升高,且呈剂量依赖性(P<0.05).益气润肠方可以明显改善咯派丁胺造成的便秘大鼠的肠道病理形态损害.结论:益气润肠方可通过调控VIP-cAMP-PKA-AQP3通路治疗大鼠气虚型便秘.

目的:探究肺肠合治法(麻黄汤+大承气汤)减轻脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺水肿的作用和机制.方法:Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、肺肠合治低、中、高剂量组、地塞米松组.采用LPS(10mg·kg-1)腹腔注射复制ALI大鼠模型,造模后开始灌胃给药,正常组给予生理盐水(25 mL·kg-1),肺肠合治低(5g·kg-1)、中(7.5g·kg-1)、高(10g·kg-1)剂量组分别给予(麻黄汤+大承气汤)灌胃,阳性药组给予地塞米松(5 mg·kg-1),分别于LPS注射后0、8、16h给药,共3次.给药结束后取肺组织及血清,肺组织苏木素-伊红(HE)染色,进行肺水肿评分;计算各组大鼠肺组织干/湿(D/W)质量比;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清血管活性肠肽(VIP)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠肺组织水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白5(AQP5)、VIP、环磷酸腺苷(cAMP)、磷酸化蛋白激酶A(p-PKA)、蛋白激酶A(PKA)蛋白的表达量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠肺组织中VIP mRNA表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠肺损伤明显,水肿评分升高,肺组织D/W降低(P＜0.01),肺组织AQP1、AQP5、cAMP、p-PKA/PKA明显降低(P＜0.05,P＜0.01),VIP含量显著升高(P＜0.01),肺组织VIP蛋白和mRNA表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,肺肠合治组大鼠肺损伤减轻,肺组织D/W显著升高(P＜0.01),肺组织AQP1、AQP5、VIP、cAMP、p-PKA/PKA升高(P＜0.05,P＜0.01),肺组织VIP表达升高(P＜0.05,P＜0.01).结论:肺肠合治法能减轻急性肺损伤造成的肺组织水肿,其机制可能通过激活VIP/cAMP/PKA信号通路,进而促进水通道蛋白AQP1、AQP5的表达,增强肺组织的水液代谢有关.

目的:研究不同配伍比例的枳实-白芍药对对便秘型肠易激综合征(C-IBS)大鼠的影响,探讨其对C-IBS的作用及机制.方法:取SPF级Wistar成年雄性大鼠60只,随机留取10只大鼠作为空白组.其余50只大鼠为实验组,均采用冰0.9％氯化钠溶液灌胃的方法制备C-IBS模型,造模成功后将50只实验组大鼠随机分为模型对照组、匹维溴铵组、枳实-白芍药对1 ∶ 1组、枳实-白芍药对1 ∶ 2组、枳实-白芍药对2 ∶1组,每组10只.经过14d治疗后,计算粪便含水量,ELISA法检测血清血管活性肠肽(VIP)、环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、水通道蛋白3(AQP3)的含量,荧光定量PCR检测结肠组织VIP、PKA、AQP3 mRNA的表达,Western Blot检测结肠组织cAMP、PKA、AQP3蛋白的表达.结果:与模型对照组比较,枳实-白芍药对1 ∶1组、枳实-白芍药对1 ∶2组、枳实-白芍药对2 ∶1组均可升高粪便含水量(P＜0.05),枳实-白芍药对2:1组可显著升高血清VIP、cAMP、PKA、AQP3含量(P＜0.01),枳实-白芍药对1 ∶1组可升高血清VIP含量(P＜0.05),枳实-白芍药对1 ∶2组可显著升高血清VIP、cAMP、AQP3含量(P＜0.01,P＜0.05),枳实-白芍药对1 ∶ 1组、枳实-白芍药对1 ∶ 2组、枳实-白芍药对2 ∶1组均可显著升高结肠组织VIP、PKA、AQP3 mRNA和cAMP、PKA、AQP3蛋白表达水平(p＜0.05,P＜0.01),且各组之间差异无统计学意义,说明枳实和白芍配伍时以经典名方枳实芍药散的原方剂量即可.结论:枳实-白芍药对配伍比例为1:1时即可发挥治疗C-IBS的作用,其机制可能与调控VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路有关.

目的:探讨归芪白术方联合奥沙利铂通过血管活性肠肽(VIP)/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)信号通路调控下游水通道蛋白3(AQP3)和水通道蛋白4(AQP4)从而保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障的作用.方法:将密度为1×107个/mL的胃癌细胞株MFC制成细胞悬液,经荷瘤小鼠右腋下接种细胞悬液0.2 mL,构建胃癌荷瘤小鼠模型,造模成功后将小鼠随机分为5组,模型组、奥沙利铂组(10 mg-kg1)、奥沙利铂加归芪白术方高、中、低剂量组(17.68、8.84、4.42 g·kg-1),每组10只,另外余10只作为空白组.各组小鼠经灌胃或腹腔注射中药、奥沙利铂或生理盐水,治疗14 d.末次给药后,次日眼球取血分离血清并取其结肠样本.苏木素-伊红(HE)染色观察组织形态的变化.酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中D-乳酸(D-LA)、二胺氧化酶(DAO)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组小鼠结肠组织中VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4mRNA及蛋白的表达.结果:与正常组比较,模型组黏膜下层水肿,黏膜层中肠腺排列紊乱,杯状细胞缺失,可见大量炎性细胞浸润及绒毛脱落的现象.而各给药组均有不同程度的改善;与正常组比较,模型组血清中DAO和D-LA水平均显著上升(P＜0.01),与模型组比较,联合用药高剂量组DAO和D-LA水平及联合用药中剂量组D-LA水平均有所下降(P＜0.05,P＜0.01),与奥沙利铂组比较,联合用药高、中剂量组D-LA水平有所下降(P＜0.05),其余组DAO和D-LA表达水平也有所下降,但差异无统计学意义;与正常组比较,模型组小鼠的VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,各给药组小鼠的VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4 mRNA及蛋白表达水平均有所升高,其中联合用药高剂量组VIP、cAMP、PKA、AQP3和AQP4 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P＜0.05,P＜0.01),联合用药中剂量组cAMP蛋白表达水平升高(P＜0.05);与奥沙利铂组比较,联合用药高剂量组cAMP蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),其余组mRNA及蛋白表达也有所升高,但差异无统计学意义.结论:归芪白术方联合奥沙利铂通过VIP/cAMP/PKA信号通路调节AQP3和AQP4达到保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障的作用.

目的:探究大黄素(Emo)对术后肠梗阻(POI)大鼠胃肠动力、炎症和氧化应激反应的影响及相关机制.方法:将30只健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、针灸治疗组、Emo治疗组和通路干预组,每组6只.通过腹部手术在大鼠中诱导POI模型.对照组和模型组大鼠给予0.9％氯化钠溶液.针灸治疗组给予针刺相应腧穴.Emo治疗组给予Emo 80 mg/kg灌胃.通路干预组给予Emo 80 mg/kg灌胃和血管活性肠肽(VIP)激活剂Prepro VIP 5 nmol/kg尾静脉注射.通过胃排空(GE)和胃肠道转运(GIT)实验来确认胃肠道运动.通过检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平和髓过氧化物酶(MPO)活性来确认炎症反应.通过检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平来证实氧化应激反应.采用HE染色观察组织病理学变化.采用Western blot检测VIP/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)信号通路相关蛋白表达情况.结果:与对照组比较,模型组组织结构受损明显,GE、GIT、SOD、GSH-Px水平降低,TNF-α、IL-1β、MDA、VIP、cAMP、水通道蛋白3(AQP3)、磷酸化PKA(p-PKA)水平和MPO活性升高(均P<0.05).经针灸和Emo治疗后,组织结构损伤得到明显改善,GE、GIT、SOD、GSH-Px水平增加,TNF-α、IL-1β、MDA、VIP、cAMP、AQP3、p-PKA水平和MPO活性降低(均P<0.05).此外,使用VIP激动剂可明显逆转Emo治疗对POI大鼠的影响.结论:Emo可能通过抑制VIP/cAMP/PKA信号通路防止POI大鼠胃肠动力下降,并降低炎症及氧化应激水平.