目的 研究贻贝多糖和人参多糖在大鼠肠道内的降解特性.方法 采用大鼠原位单向肠灌流模型,采用高效液相色谱法(HPLC)测定两种多糖在肠灌流液中的含量.结果 贻贝多糖在十二指肠段全部降解,在空肠段的降解百分率为40.33％±15.65％,在回肠和结肠部位,贻贝多糖降解百分率较低,分别为0.70％±0.49％和0.30％±0.14％.人参多糖在各肠段均有不同程度降解,其中,回肠部位的降解百分率较大,为52.41％±13.14％,结肠部位降解较少,仅为0.68％±0.54％.十二指肠和空肠部位的降解百分率分别为25.19％±17.02％和33.04±15.26％.结论 贻贝多糖及人参多糖均可在肠道发生降解.

目的 建立适于规模化生产的贻贝多糖制备工艺.方法 以厚壳贻贝为对象,对贻贝多糖制备过程中原料筛选、浸提条件、除蛋白质、醇沉等技术环节进行改进和优化.最后利用改进的工艺进行了贻贝多糖的中试制备.结果 厚壳贻贝多糖为白色粉末,多糖平均得率为贻贝干质量的14.1％.MP-A为厚壳贻贝多糖的主要成分,占比约为89.42％,相对分子质量为1 268.15 kD.结论 建立了流程简单、绿色环保、易于放大的贻贝多糖工业化制备工艺,能获得纯度90％左右的贻贝多糖样品.

目的 研究翡翠贻贝多糖对宫颈癌荷瘤裸鼠免疫及抗氧化能力和p53 mRNA表达的影响.方法 24只健康雌性昆明小鼠根据随机数字表法分为3组:对照组(正常健康小鼠,n=8)、宫颈癌模型组(宫颈癌荷瘤裸鼠模型,n=8)和翡翠贻贝多糖组(宫颈癌荷瘤裸鼠模型+翡翠贻贝多糖灌胃给药,n=8).统计不同处理组肿瘤体积和重量,计算肿瘤抑制率.苏木精伊红染色观察肿瘤组织样品的细胞形态.流式细胞术分析外周血CD4+和CD8+T细胞含量.分别使用超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)试剂盒检测血清中SOD活性、LDH活性和MDA含量.通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测不同处理组p53、CDK1和CDK2 mRNA表达水平.通过蛋白质印迹法检测肿瘤组织的白细胞介素-2(IL-2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白质表达水平.结果 与对照组相比,宫颈癌模型组治疗后9、11和13 d肿瘤体积增加,而翡翠贻贝多糖组较宫颈癌模型组裸鼠9、11和13 d肿瘤体积降低,差异均有统计学意义(P<0.05).与对照组相比,宫颈癌模型组肿瘤重量增加,而翡翠贻贝多糖组较宫颈癌模型裸鼠肿瘤重量降低,肿瘤抑制率显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05).翡翠贻贝多糖治疗后,肿瘤细胞显示出大面积的坏死和轻微的液化,坏死组织边缘的细胞分解为颗粒细胞,间质水肿.与对照组相比,宫颈癌模型组CD4+和CD25+细胞百分比增加,而翡翠贻贝多糖组较宫颈癌模型组裸鼠CD4+和CD25+细胞百分比降低,差异均有统计学意义(P<0.05).与对照组相比,宫颈癌模型组SOD活性降低,LDH活性和MDA含量增加,而翡翠贻贝多糖组较宫颈癌模型组SOD活性增加,LDH活性和MDA含量降低,差异均有统计学意义(P<0.05).与对照组相比,宫颈癌模型组p53 mRNA表达水平降低,CDK1和CDK2 mRNA表达水平增加,而翡翠贻贝多糖组较宫颈癌模型组p53 mRNA表达水平升高,CDK1和CDK2 mRNA表达水平增加降低,差异均有统计学意义(P<0.05).与对照组相比,宫颈癌模型组IL-2、TGF-β1和TNF-α蛋白质表达水平增加,而翡翠贻贝多糖组较宫颈癌模型组IL-2、TGF-β1和TNF-α蛋白质表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 宫颈癌荷瘤裸鼠Treg和氧化水平增加,p53 mRNA表达水平降低.翡翠贻贝多糖治疗可以减弱宫颈癌荷瘤裸Treg水平,抗氧化能力和p53 mRNA表达,降低肿瘤生长.

目的 建立液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定大鼠肝微粒体中对乙酰氨基酚含量,研究人参多糖、贻贝多糖、黄原胶对大鼠肝微粒体细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)1A2的体外抑制作用.方法 以格列齐特为内标,建立LC-MS/MS测定大鼠肝微粒体中对乙酰氨基酚含量方法.以α-萘黄酮为阳性对照药,分别将系列多糖溶液、CYP1A2酶的特异性探针底物非那西丁及大鼠肝微粒体进行孵育,LC-MS/MS测定代谢产物对乙酰氨基酚的含量,计算半数抑制浓度(IC50),评价人参多糖、贻贝多糖、黄原胶对大鼠肝微粒体CYP1A2酶的抑制活性.结果 对乙酰氨基酚在10～1000 ng·mL-1内线性良好,精密度试验RSD均＜8.24％,提取回收率为92.53％～103.23％,稳定性试验RSD均＜10.77％.该试验条件下,在大鼠肝微粒体温孵体系中,人参多糖、贻贝多糖、黄原胶对CYP1A2的IC50值均＞100 μmol·L-1.结论 在正常剂量下,人参多糖、贻贝多糖、黄原胶对CYP1A2酶亚型均无抑制作用,可以与其底物联合用药.

[背景]假交替单胞菌属是一种广泛分布于海洋环境的革兰氏阴性细菌,存在于海底沉积物中,能分泌大量的胞外产物形成海洋微生物被膜,从而诱导海洋无脊椎动物的附着.[目的]探究海假交替单胞菌鞭毛蛋白fliC基因对生物被膜形成及厚壳贻贝诱导活性的影响.[方法]通过基因敲除构建海假交替单胞菌fliC-02330基因缺失突变菌,研究突变菌和野生菌菌落形态、生物被膜形成能力、胞外物质以及对厚壳贻贝幼虫附着变态的诱导能力等的差异性.[结果]与野生菌相比,突变菌菌落表型出现褶皱,运动能力下降,形成被膜膜厚增加,以及对幼虫附着变态诱导活性下降.共聚焦扫描发现,fliC-02330基因缺失突变菌胞外多糖含量下降,而蛋白含量上升.[结论]海假交替单胞菌鞭毛蛋白fliC-02330基因缺失促进生物被膜形成,但抑制厚壳贻贝幼虫附着变态.本研究为探究细菌鞭毛蛋白基因与厚壳贻贝幼虫的作用机制,以及后续进一步探索微生物参与海洋无脊椎动物附着变态提供一定的理论依据.