目的:探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）是否通过调控超快速延迟整流钾电流（ Ikur）参与心房肌细胞的电重塑，以及Src激酶是否参与其中。 方法:将大鼠胚胎心肌细胞株H9c2细胞置于DMEM培养基中，将小鼠心房肌细胞株HL-1细胞置于Claycomb培养基中，于37 ℃ 5% CO 2培养箱中培养。以正常培养的细胞为对照组。予以不同浓度TNF-α干预细胞24 h，分别为TNF-α 25 ng/ml组、TNF-α 50 ng/ml组和TNF-α 100 ng/ml组。为观察Src抑制剂PP1能否逆转TNF-α作用，设置PP1+TNF-α组：先予10 μmol/L的PP1预处理1 h后再加入100 ng/ml TNF-α干预细胞24 h。采用Western blot检测各组细胞中形成 Ikur的主要钾通道蛋白Kv1.5、Src的表达水平。采用全细胞膜片钳检测各组细胞的 Ikur密度。 结果:（1）H9c2细胞中，TNF-α 100 ng/ml组细胞的Kv1.5蛋白表达水平低于对照组及TNF-α 25 ng/ml组（ P均<0.05）。各组细胞间Src蛋白表达水平差异无统计学意义（ P>0.05），但TNF-α 25 ng/ml组、TNF-α 50 ng/ml组及TNF-α 100 ng/ml组细胞磷酸化Src（p-Src）蛋白表达水平均高于对照组（ P均<0.05）。TNF-α 50 ng/ml组及TNF-α 100 ng/ml组细胞 Ikur电流密度均小于对照组（ P均<0.05）。PP1+TNF-α组细胞Kv1.5蛋白表达水平高于TNF-α 100 ng/ml组（ P<0.05）， Ikur电流密度大于TNF-α 100 ng/ml组（ P<0.01）。PP1+TNF-α组细胞Kv1.5蛋白表达水平及 Ikur电流密度与对照组比较差异均无统计学意义（ P均>0.05）。（2）在心房肌细胞株HL-1细胞中，TNF-α 100 ng/ml组细胞Kv1.5蛋白表达水平低于对照组和TNF-α 25 ng/ml组（ P均<0.01）。TNF-α 100 ng/ml组细胞p-Src蛋白表达水平高于对照组（ P<0.05）。各组细胞Src蛋白表达水平差异无统计学意义（ P>0.05）。PP1+TNF-α组细胞Kv1.5蛋白表达水平高于TNF-α 100 ng/ml组（ P<0.05）。 结论:在心房肌细胞中，TNF-α可能通过激活Src激酶降低Kv1.5蛋白表达水平，进而下调 Ikur，参与心房颤动的发生及发展过程。

钾离子的膜通道是心肌细胞膜中亚型最多、其表达受影响因素最多的离子通道,而超快速延迟整流钾电流(Ikur)是仅在心房肌发现的钾通道电流,其离子通道的分子基础是Kv1.5钾离子通道.因此,抑制Kv1.5钾通道电流,可选择性延长心房肌动作电位时程及有效不应期,改善心房肌电重构和组织重构.本文就Kv1.5钾离子通道阻滞剂的结构类型及研究进展进行综述,旨在为新型房颤治疗药物的开发提供思路.

目的 通过研究调脉饮颗粒对心肌细胞动作电位和多种心肌离子通道的作用,探讨调脉饮颗粒抗心律失常的作用靶点.方法 采用全细胞膜片钳技术检测0.1 mg/mL和1 mg/mL调脉饮颗粒对重组表达的人源性心脏离子通道靶点快速延迟整流钾通道(rapidly activating delayed rectifier potassuim channel,Ikr,hERG)、钠通道1.5亚型(sodium channel subtype 1.5,NaV1.5)、钙通道1.2亚型(calcium channel subtype 1.2,L-type,CaV1.2)、慢激活延迟整流钾通道(slowly activating delayed rectifier potassuim channel,IKs,KV7.1)、超快延迟整流钾通道(ultra-rapid delayed rectifier potassium channel,IKur,KV1.5)、瞬时外向钾通道(transient outward potassium channel,Ito,KV4.3)、内向整流钾通道(inward rectifier potassium channel,Kir2.1)、ATP敏感性钾通道(ATP sensitive potassium channel,KATP)、钙通道3.2亚型(calcium channel subtype 3.2,T-type,Cav3.2)、乙酰胆碱敏感性钾通道(acetylcholine-sensitive potassium channel,KAch)、 超极化激活的阳离子电流亚型2(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated ion channel subtype 2,HCN2)和HCN4以及多能干细胞诱导分化心肌细胞(induced pluripotent stem cell dericed cardiomyocyte,IPSC-CM)动作电位和心脏钠钙交换电流(Na+-Ca2+-exchanger,NCX)的作用.结果 0.1 mg/mL调脉饮颗粒显著抑制CaV3.2(18.94％±2.19％)和NCX(28.46％±9.74％)电流,1 mg/mL调脉饮颗粒显著抑制hERG(43.29％±0.09％),CaV3.2(34.72％±0.61％),KATP(38.44％±2.67％),HCN4(30.64％±1.94％)和NCX(64.25％±25.29％)电流,并显著增加KV7.1(34.49％±4.53％)电流(P<0.05);同时调脉饮颗粒可以引起IPSC-CM动作电位时程延长,延长心脏的有效不应期.结论 调脉饮颗粒延长IPSC-CM动作电位时程和对NCX、hERG通道电流的抑制作用可能是其抗心律失常作用的主要机制,抑制CaV3.2钙电流和HCN4窦房结起搏电流,可能起到降低心率的作用,增强KV7.1电流可能抵消抑制hERG通道引起的过度的动作电位时程延长和QT间期延长,其对KATP的抑制作用可能起到心肌缺血的保护作用.

目的:探讨有氧运动(AE)对充血性心力衰竭(CHF)大鼠心室肌细胞钾通道重构的作用及机制.方法:将SD大鼠随机分为假手术组、CHF组、假手术+AE组、CHF+AE组.建立CHF及假手术大鼠模型后,4组大鼠先进行适应性训练1周,假手术组、CHF组进行一般照护8周,假手术+AE组和CHF+AE组给予AE干预8周.各组饲养及训练结束后行超声心动图检测左室射血分数(LVEF)及左室后壁厚度(LVPWD),HE染色、天狼星红染色检测心肌组织形态学及纤维化程度,计算左室质量指数(LVWI),定量分析N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平,实时荧光定量聚合酶链反应检测快速激活延迟整流钾电流(IKr)编码基因KCNH2及慢激活延迟整流钾电流(IKs)α亚基编码基因KCNQ1的mRNA表达水平,Western blot检测KCNH2和KCNQ1蛋白表达水平.结果:与假手术组比较,CHF组大鼠心肌组织损伤严重,LVEF明显降低,LVPWD、LVWI及NT-proBNP水平均明显升高;与CHF组比较,CHF+AE组大鼠心肌组织损伤明显减轻,LVEF明显升高,LVPWD、LVWI及NT-proBNP水平均明显降低(P均＜0.05).与假手术组比,CHF组KCNQ1及KCNH2的mRNA表达水平均明显上调;与CHF组比,CHF+AE组KCNQ1及KCNH2的mRNA表达水平均明显下调(P均＜0.05).与假手术组比,CHF组KCNQ1及KCNH2的蛋白表达水平均明显下调;与CHF组比,CHF+AE组KCNQ1及KCNH2的蛋白水平均明显上调(P均＜0.05).假手术组与假手术+AE组各指标差异无统计学意义.结论:AE参与调控CHF大鼠心肌结构与IKr、IKs离子通道重构.

目的 研究不同年龄小鼠间心房颤动易感性差异,验证心房重构机制与增龄性心房颤动相关性.方法 选取不同年龄段C57B6N小鼠共36只,按年龄分为青年组(3月龄)、中年组(12月龄)、老年组(18月龄),各12只.通过超声心动图记录小鼠左心室参数.通过心内导管技术记录小鼠心脏电生理特征,并同期建立心房颤动/心房扑动诱导模型,比较诱导成功率和平均持续时间.通过膜片钳技术测量3组小鼠的L-型钙离子通道电流密度、超快速延迟整流钾通道(IKur)电流密度.比较3组小鼠心房组织胶原容积分数,实时荧光定量聚合酶链反应法和蛋白质印迹法检测心房细胞Ⅰ型胶原 α1(COL1A1)蛋白和mRNA表达水平.结果 老年组小鼠左心房前后径明显大于青年组[(2.5±0.5)mm比(1.9±0.4)mm](P<0.05).窦性心律状态下,中年组及老年组小鼠心房有效不应期短于青年组[(54±6)、(47±7)ms比(63±8)ms](均P<0.05).中年组及老年组的心房颤动/心房扑动诱导成功率明显高于青年组[58.3％(7/12)、83.3％(10/12)比16.7％(2/12)](均P<0.05).3组心房颤动/心房扑动持续时间比较,差异均无统计学意义(P>0.05).中年组和老年组小鼠的胶原容积分数均明显高于青年组[(3.87±0.22)％、(4.54±2.37)％比(0.72±0.46)％](均P<0.05).老年组小鼠L-型钙离子通道电流最大密度较青年组小鼠显著升高(P<0.05),老年组小鼠IKur离子通道电流最大密度显著低于青年组及中年组小鼠(P<0.05).老年组小鼠COL1A1蛋白及mRNA表达水平均明显高于中年组[(0.96±0.18)比(0.80±0.24)、(2.36±0.51)比(1.03±0.32)](均P<0.05).结论 小鼠心房颤动易感性呈增龄性特点,同时以钙超载为特征的心房电重构以及Ⅰ型胶原增多为特征的心房组织重构同样呈增龄趋势,以此为基础的心房重构增加了小鼠心房颤动的易感性.

目的 探讨转录辅激活因子p300是否参与调控心房肌细胞Kv1.5蛋白的表达.方法 以Western Blot检测细胞和C57BL/6小鼠心房组织p300蛋白、钾离子通道蛋白Kv1.5的表达.HL-1细胞在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)刺激的基础上使用p300抑制剂姜黄素或p300 siRNA干预,观察p300对Kv1.5蛋白表达以及超速延迟整流钾电流(Ikur)的作用.全细胞膜片钳技术检测各组细胞的Ikur和动作电位时程(APD).快速起搏心房观察小鼠心房颤动(房颤)的可诱发性.结果 动物实验显示,与对照组相比,Ang Ⅱ处理组小鼠有着明显更高的房颤诱发率(P＜0.01),心耳组织p300以及Kv1.5蛋白表达明显升高(均P＜0.05),而姜黄素干预后可以明显减少小鼠的房颤诱发率(P＜0.01),并使p300和Kv1.5蛋白表达减少(P＜0.05).细胞实验显示,和对照组相比,Ang Ⅱ处理组HL-1细胞p300以及Kv1.5蛋白表达明显升高(P＜0.05),1kur电流密度上升,APD缩短.在分别用p300抑制剂姜黄素和p300 siRNA干预后表现为p300和Kv1.5蛋白表达减少(P＜0.05),Ikur电流密度下降,APD延长.结论 Ang Ⅱ可通过p300引起心房肌细胞Kv1.5蛋白表达上升,Ikur电流密度上升,引起心房肌细胞电重构.

目的:探讨不同剂量刺槐素对阵发性心房颤动小鼠的作用及其电生理机制.方法:动物实验中,将 48 只 C57/BL6J小鼠随机分为空白组、模型组、胺碘酮组、刺槐素低剂量组(12 mg/kg)、刺槐素中剂量组(24 mg/kg)、刺槐素高剂量组(48 mg/kg),每组 8 只.连续给药 3d后,腹腔注射 0.5 mg/kg盐酸异丙肾上腺素,1 min后给予电刺激(连续单刺激,电压 0.08 V,频率 90 Hz)21 min,测量并统计小鼠心房颤动发作总时间.细胞实验中,选取中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1),通过转染小鼠 Kv1.5质粒,运用膜片钳全细胞记录技术,观察刺槐素对 mKv1.5的作用.结果:动物实验发现,与空白组相比,模型组心房颤动持续时间明显延长(P＜0.01);与模型组相比,刺槐素高剂量组、胺碘酮组心房颤动持续时间明显缩短(P＜0.05).刺槐素呈剂量依赖性抑制小鼠心房颤动发作,半数抑制浓度为 4.235 mg/kg.细胞实验发现刺槐素可抑制中国仓鼠卵巢细胞 Kv1.5通道的峰值电流幅度,并呈电压依赖性地抑制 Kv1.5 通道电流,对 Kv1.5通道的电流稳态激活曲线门控机制无明显作用.结论:刺槐素呈剂量依赖性抑制小鼠心房颤动发作,其机制可能是阻断超快速延迟整流钾通道有关.