目的:探讨紫杉醇诱发神经痛大鼠脊髓背角超极化活化环核苷酸门控通道4(HCN4)的表达变化及其与γ-氨基丁酸B型(GABAB)受体的关系。方法:清洁级SD雄性大鼠(购自河北医科大学动物实验中心)，69周龄，体重180～220 g。于实验开始第1、3、5、7 d分别腹腔注射紫杉醇2 mg/kg制备神经痛模型，行鞘内置管术成功后，随机数字表法将其分为5组( n＝10)：紫杉醇模型组(P组)，紫杉醇模型＋生理盐水组(N组)，紫杉醇模型＋慢病毒空载体组(BV组)，紫杉醇模型＋HCN4通道慢病毒组(H组)，紫杉醇模型＋ZD7288组(I组)，10只同龄大鼠作为空白对照组(C组)。腹腔注射紫杉醇后15 d鞘内注射药物20 μl：N组注射生理盐水，BV组注射慢病毒空载体(1×10 8 TU/ml)，H组注射HCN4通道慢病毒(1×10 8 TU/ml)。腹腔注射紫杉醇后21 d鞘内注射药物20 μl：I组注射HCN4通道抑制剂ZD7288(30 μg)。腹腔注射紫杉醇前1 d(T0)、注射后第14天(T1)、第21天(T2)时点分别测定50%机械缩足反应阈(MWT)。于T2时点取脊髓背角组织标本，采用免疫组织化学法和蛋白质印迹法(Western blot)法测定HCN4通道和GABAB受体的蛋白表达水平。测量数据采用均值±标准差( Mean± SD)表示，组内比较采用重复测量设计的方差分析，组间比较采用单因素方差分析。 结果:与T0时点[(15.4±2.7)、(14.8±2.1)、(14.6±2.1)、(14.2±2.2)、(15.2±2.1) g]比较，P组、N组、BV组、H组、I组T1时[(4.8±1.3)、(4.7±1.5)、(4.8±1.1)、(5.0±1.3)、(4.8±1.3) g] MWT均降低( t＝11.326、12.177、12.932、11.298、13.449， P<0.05)，差异有统计学意义；与T1时点比较，H组、I组T2时点[(9.9±1.0)、(10.3±1.5) g]MWT均升高( t＝9.389、9.006， P<0.05)，差异有统计学意义。与C组[(14.4±2.6) g]比较，T1时点P组、N组、BV组、H组、I组MWT均降低( t＝10.394、10.009、10.537、10.117、10.335， P<0.05)，差异有统计学意义；与P组[(5.2±1.7) g]比较，T2时点H组和I组[(9.9±1.0)、(10.3±1.5) g]MWT均升高( t＝7.440、7.212， P<0.05)，差异有统计学意义。与C组[(0.24±0.03)、(0.75±0.05) g]比较，T2时点P组脊髓背角HCN4通道蛋白表达(0.86±0.09)升高、GABAB受体蛋白表达(0.25±0.03)降低( t＝14.980、20.325， P<0.05)，差异有统计学意义；与P组比较，T2时点H组、I组脊髓背角HCN4通道蛋白表达(0.13±0.04、0.18±0.03)降低、GABAB受体蛋白表达水平(0.91±0.03、0.79±0.03)升高( t＝16.934、16.473、33.335、28.412， P<0.05)，差异有统计学意义。免疫组织化学法测定蛋白的光密度值与Western blot法测定结果一致。 结论:紫杉醇可通过大鼠脊髓背角HCN4通道蛋白表达水平升高，促使GABAB受体蛋白表达下调，从而诱发神经病理性痛。

目的:评价纹状体超极化激活环核苷酸门控通道(HCN通道)在紫杉醇诱发大鼠神经病理性痛中的作用及其与GABA B受体的关系。 方法:清洁级健康雄性SD大鼠，6～9周龄，体重180～220 g。腹腔注射紫杉醇2 mg/kg，每2 d注射1次，连续7 d，制备神经病理性痛模型，随后行鞘内置管术。选取鞘内置管术成功的大鼠50只，采用随机数字表法分为5组( n＝10)：紫杉醇组(P组)、紫杉醇＋生理盐水组(N组)、紫杉醇＋慢病毒空载体组(BV组)、紫杉醇＋HCN4通道慢病毒组(H组)和紫杉醇＋HCN通道阻断剂ZD7288组(I组)。选取10只同龄大鼠作为空白对照组(C组)。腹腔注射紫杉醇后15 d时，N组鞘内注射生理盐水20 μl，BV组鞘内注射HCN4通道慢病毒空载体1×10 8 TU/ml(20 μl)，H组鞘内注射HCN4通道慢病毒1×10 8 TU/ml(20 μl)，I组鞘内注射ZD728830 μg(20 μl)。腹腔注射紫杉醇前1 d和注射后14、21 d时测定机械缩足反应阈(MWT)。于T 2时取大脑纹状体组织，采用免疫组织化学法和Western blot法测定HCN4通道和GABA B受体表达水平。 结果:与C组比较，P组MWT降低，HCN4通道表达上调，GABA B受体表达下调( P<0.05)；与P组比较，H组和I组MWT升高，HCN4通道表达下调，GABA B受体表达上调( P<0.05)，N组和BV组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:纹状体HCN4通道表达上调可诱导GABA B受体表达下调，参与紫杉醇诱发大鼠神经病理性痛的病理生理机制。

目的:以3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)/蛋白激酶B(Akt)/超极化激活环核苷酸门控离子通道4(HCN4)通路为切入点,探究电针治疗大鼠神经源性尿潴留的分子机制.方法:实验选取SD雌性大鼠,采用改良Hassan Shaker脊髓全断法建立逼尿肌无力型尿潴留大鼠模型,并按随机数字表法随机分为模型组、电针组、PDK1抑制剂组、HCN4阻断剂组、电针+HCN4阻断剂组,每组20只,另取20只大鼠作为假手术组.电针组、电针+HCN4阻断剂组取大鼠"中极""中髎"电针治疗20 min,1次/d,PDK1抑制剂组隔天1次腹腔注射OSU-03012(20 mg/kg),HCN4阻断剂组隔天1次腹腔注射伊伐布雷定(10 mg/kg),以上治疗均持续10 d.多通道生理记录仪检测大鼠尿流动力学指标;肌条实验检测逼尿肌兴奋性;HE染色观察膀胱形态学变化;免疫荧光双染法检测膀胱组织HCN4与酪氨酸蛋白激酶KIT(C-Kit)阳性表达;Western blot法检测膀胱组织PDK1/Akt/HCN4通路蛋白及热休克蛋白27(HSP27)表达.结果:与假手术组相比,模型组大鼠出现排尿功能障碍,漏尿点压力、离体逼尿肌自发收缩频率、膀胱组织C-Kit荧光强度、HCN4+/C-Kit+共表达、HCN4及磷酸化(p)-HSP27/HSP27蛋白表达降低(P<0.05),膀胱最大容量及顺应性、离体逼尿肌收缩时最小张力、膀胱组织PDK1及p-Akt/Akt蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,电针组、PDK1抑制剂组大鼠以上指标均逆转(P<0.05);与电针组相比,电针+HCN4阻断剂组和HCN4阻断剂组大鼠排尿功能障碍严重,漏尿点压力、自发收缩频率、C-Kit荧光强度、HCN4+/C-Kit+共表达、HCN4 及p-HSP27/HSP27蛋白表达降低(P<0.05),膀胱最大容量及顺应性、离体逼尿肌收缩时最小张力、膀胱组织PDK1及p-Akt/Akt蛋白表达升高(P<0.05).HE染色示模型组大鼠膀胱上皮组织脱落、层次紊乱,膀胱壁细胞空泡化、黏膜层及肌层中性粒细胞浸润等病理损伤明显,电针组及PDK1抑制剂组有所减轻,HCN4阻断剂组较模型组加重,电针+HCN4阻断剂组上述病理损伤较电针组严重.结论:电针刺激"中髎""中极"可能通过抑制PDK1/Akt通路活化,促进HCN4介导的逼尿肌兴奋性收缩、排尿电信号活化,从而改善神经源性尿潴留大鼠排尿功能障碍.

目的 评价G蛋白偶联受体35 (GPR35)活化在氧糖剥夺-复氧复糖大鼠皮质星形胶质细胞凋亡中的作用.方法 体外培养大鼠原代皮质星形胶质细胞,接种于6孔板或96孔板,采用随机数字表法分为4组(n=30):对照组(C组)、氧糖剥夺-复糖复氧组(O组)、GPR35抑制剂+氧糖剥夺-复糖复氧组(GO组)和GPR35抑制剂组(G组).采用无糖培养基无氧(95％ N2和5％ CO2)孵育6h,正常培养24h的方法制备氧糖剥夺-复氧复糖损伤模型,GO组和G组在氧糖剥夺前1h向培养基内加入3μmol/L GPR35抑制剂CLD2745687.各组处理结束24h后,采用Annexin V-FITC/GFAP/DAPI免疫荧光染色法确定细胞凋亡率,ELISA法检测细胞质内环磷酸腺苷(cAMP)含量,Flu03/AM免疫荧光法测定胞浆钙离子浓度,采用RT-PCR法检测超极化激活的环核苷酸门控通道2(HCN2) mRNA表达,Western blot法检测Bax和Bcl-2的表达.结果 与C组比较,O组和GO组皮质星形胶质细胞凋亡率升高,胞浆钙离子浓度升高,HCN2 mRNA、cAMP和Bax表达上调,Bcl-2表达下调(P＜0.05);与O组比较,GO组皮质星形胶质细胞凋亡率降低,胞浆钙离子浓度降低,HCN2 mR-NA、cAMP和Bax表达下调,Bcl-2表达上调(P＜0.05);C组与G组各指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 GPR35活化参与了氧糖剥夺-复糖复氧后大鼠星形胶质细胞凋亡的过程.