B细胞活化因子(B-cell activating factor，BAFF)和增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand，APRIL)在免疫疾病领域的研究已持续多年，且已取得许多研究成果。两者共有的特异性受体跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子[transmembrane activator and calmodulin ligand(CAML)interactor，TACI]因在调节B细胞增殖，浆细胞分化及抗体类别转换方面的重要作用越来越受到重视。现就TACI自身特点，生理功能及其在免疫疾病中的研究进展进行综述。

目的 观察 Beclin 1 野生型、突变型质粒对成骨细胞自噬-凋亡表达的影响.方法 采用原代分离培养的大鼠颅骨成骨细胞,构建Beclin 1 突变型质粒转染成骨细胞(MUT)和野生型质粒转染成骨细胞(WT),使用自噬激活剂rapamycin(Rapa)、自噬抑制剂Baf-A1(Baf)和Beclin1/Bcl2 结合抑制剂mifepristone(Mif)干预细胞,分为NC组、Beclin1 WT组、Beclin1 WT+Baf-A1 组、Beclin1 WT+mif组、Beclin1 Mut组、Beclin1 Mut+Rapa组.使用免疫共沉淀检测Beclin1-Bcl2 复合物结合水平,通过MDC染色、溶酶体染色、流式检测、线粒体膜电位检测、Hoechest染色、免疫荧光、WB分别检测成骨细胞的自噬和凋亡表达情况.结果 免疫共沉淀检测:与NC组相比,MUT组中Beclin1-Bcl2 复合物水平显著降低(P＜0.05);MDC染色显示:相对于NC组,WT细胞中溶酶体染色明显增加;细胞凋亡方面:与NC组相比,WT组、WT+Mif组细胞凋亡率显著上升,MUT细胞凋亡率低于WT细胞,比较差异具有统计学意义;JC-1检测显示:与NC组相比,WT细胞的线粒体跨膜电位异常改变,而MUT细胞样本的跨膜电位表达活跃.结论 ①Beclin 1 的过表达可以抑制Beclin 1-Bcl2 复合物的生成;②Beclin 1 是参与自噬的重要基因,适度的Bcilin 1 表达有利于维持细胞群的代谢平衡,Beclin 1 的过表达对细胞自噬无明显影响;③Beclin 1 过表达能抑制成骨细胞凋亡.

目的 探讨深部浸润型子宫内膜异位症(DIE)与正常子宫内膜组织中白介素5(IL-5)、TNFRSF13B表达的差异.方法 选取2015年12月-2016年12月襄阳市中心医院妇科15例因DIE行手术治疗的患者为实验组,同期15例因输卵管再通行腹腔镜或开腹手术的患者作为对照组.选取基因芯片、实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组织化学、Western blotting等方法检测IL-5及TNFRSF13B的表达.结果 KEGG信号通路分析结果显示涉及免疫应答的hsa04672 (intestinal immune network for IgA production)通路在DIE中高表达,故对于主要涉及的IL-5、TNFRSF13B基因进行进一步分析.实时荧光定量PCR显示,实验组IL-5、TNFRSF13BmRNA相对表达水平高于对照组(P＜0.05).ELISA显示实验组患者腹腔液及腺上皮细胞上清液中IL-5表达水平均高于对照组(P＜0.05).免疫组织化学及Western blotting显示,实验组TNFRSF13B表达水平高于对照组(P＜0.05).结论 IL-5及TNFRSF13B在DIE微环境中高表达,可能与DIE患者体内免疫机制异常有关,促使炎症形成而偏向免疫耐受,促使异位内膜腺上皮细胞在腹腔中种植生长.

目的 探讨跨膜蛋白(TMEM)16A氯通道对心肌缺血再灌注后损伤大鼠乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)的影响.方法 选择SD大鼠分离与培养心肌细胞,分为A组(于常氧条件下培养心肌细胞3 h)、B组(心肌细胞未经任何处理,采用缺氧2 h、复氧1 h进行心肌缺血再灌注处理)、C组(采用TMEM16A氯通道激活剂1 mmol/L预处理20 min,再进行处理)、D组(采用TMEM16A氯通道抑制剂1 mmol/L预处理20 min,再进行处理),观察心肌细胞形态与存活情况,测定LDH和CK-MB、活性氧(ROS)表达水平,采用Western印迹方法测定活化型半胱天冬酶(cleaved caspase)-3、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)表达水平.结果 实验前各组细胞存活率均在95％以上,实验结束后A组、B组、C组、D组细胞存活率分别为(93.44±4.39)％、(51.49±5.22)％、(34.29±5.32)％和(78.29±7.21)％,各组间对比差异有统计学意义(P<0.05).B组、C组、D组CK-MB与LDH活性均明显高于A组(P<0.05),D组CK-MB与LDH活性明显低于B组、C组(P<0.05).B、C组ROS水平明显高于A组(P<0.05),D组ROS水平与B、C组相比明显减少(P<0.05),但与A组相比差异依然有统计学意义(P<0.05).B、C组cleaved caspase-3、p-Akt相对表达水平明显高于A组(P<0.05).结论 TMEM16A氯通道关闭能降低心肌缺血再灌注后损伤大鼠LDH和CK-MB活性,降低ROS水平,抑制cleaved caspase-3/p-AKT信号通路激活,对心肌缺血再灌注后有良好的保护作用.

背景:软骨细胞自噬水平下降是骨关节炎发病的重要机制之一.自噬抑制基因跨膜蛋白208在晚期膝骨关节炎患者软骨组织中表达升高,该基因可能通过抑制软骨细胞自噬促进骨关节炎发展.目的:通过体外骨关节炎模型,观察软骨细胞跨膜蛋白208基因表达对自噬和线粒体功能的影响.方法:软骨组织来源于膝关节表面置换患者术中废弃软骨,非负重面轻度病变软骨(OuterbridgeⅠ-Ⅱ级)作为早期组,负重面重度病变软骨(OuterbridgeⅢ-Ⅳ级)作为晚期组,检测不同软骨组织跨膜蛋白208含量.实验方案符合北京大学第一医院对研究的相关伦理要求,软骨组织供者及其家属在充分了解治疗方案的前提下签署了"知情同意书".取第4代人正常关节软骨细胞,通过白细胞介素1β刺激人正常软骨细胞诱导骨关节炎体外模型;另外加入自噬激活剂雷帕霉素或自噬抑制剂3-MA预处理软骨细胞后,再加入白细胞介素1β刺激12,24,48 h,观察软骨细胞状态.Real Time PCR检测不同病变软骨组织跨膜蛋白208基因的表达;Western Blot检测自噬相关蛋白轻链蛋白3B、P62表达评价自噬水平;AnnexinV-FITC法评估软骨细胞的凋亡情况;MitoSOX Red dye和JC-1染料荧光显色评价线粒体损伤情况.结果与结论:①骨关节炎患者重度退变软骨组织跨膜蛋白208表达升高;②用白细胞介素1β刺激软骨细胞12,24和48 h后,软骨细胞跨膜蛋白208表达水平先降后升,自噬水平先升后降,凋亡水平逐渐升高,线粒体损伤逐渐加重;③雷帕霉素能明显降低跨膜蛋白208的表达量,提高自噬水平,降低白细胞介素1β刺激后软骨细胞的凋亡和线粒体损伤;④结论:跨膜蛋白208可抑制软骨细胞自噬,其表达增高可能导致软骨细胞应激状态下的损伤增加.

目的 筛选原发性骨性关节炎(OA)膝关节软骨细胞中差异表达的环状RNA(circRNA)及miRNA,并分析其生物学功能、相关代谢通路及相互作用.方法 首先用GeneSpring software V13.0软件筛选出5例OA及5例正常对照的膝关节软骨细胞差异表达的CircRNA,然后对差异表达的CircRNA进行基因本体论(GO)及代谢通路分析(采用KEGG通路数据库);将OA和正常对照膝软骨细胞的miRNA原始数据(下载自ArrayExpress,获取号为:E-MTAB-3514)进行对数转换,然后使用Quantile方法对数据进行标准化处理,以P<0.05,OA和正常对照膝软骨细胞的miRNA差异倍数≥2或≤0.5为筛选条件,用R包limma中的经验贝叶斯模型(eBayes)筛选差异表达的miR-NA;用miRror工具进行差异miRNA的靶基因预测,使用KOBAS软件对找到的靶基因进行GO及代谢通路注释富集分析.用miRanda软件对0A膝软骨细胞差异表达的miRNA进行miRNA-circRNA相互作用预测分析.结果 与正常软骨细胞比较,OA膝关节软骨细胞中共筛选出1380个表达差异的circRNA,其中215个差异circRNA表达上调,1165个表达下调.分子功能层面,差异表达的circRNA主要影响GTP酶激活剂活性、腺苷核糖核苷酸结合、钙通道调节剂活性;细胞组成层面,差异表达的circRNA主要影响细胞外基质成分、带状胶原纤维、纤维状胶原蛋白三聚体;生物学过程层面,差异表达的circRNA主要影响细胞成分形态发生、软骨细胞发育和肢体发育.差异表达的circRNA相关代谢通路与糖原生物合成、补体和凝血级联、PDGF信号途径、胶原纤维组装和其他多聚体结构有关.与正常软骨细胞比较,OA膝关节软骨细胞中共筛选出差异表达miRNA 24个,其中上调表达及下调表达的miRNA各12个.生物学过程层面,差异表达的miRNA主要参与含核碱基的化合物生物合成过程、细胞质翻译终止、神经生长和细胞发育.细胞组成层面,主要影响细胞内部分、翻译释放因子复合体、膜结合的细胞器、核转录抑制因子复合物;在细胞组成层面,差异表达的miRNA主要影响有机环状化合物结合、核酸结合和杂环化合物结合;差异表达的miRNA主要与蛋白质泛素化、白细胞跨内皮迁移、泛素蛋白酶体途径、基因表达和蛋白质代谢有关.与has-miR-762相关的circRNA有71个,与has-miR-18a-3p相关的circRNA有25个,与has-miR-136-5p相关的cir-cRNA有5个,与has-miR-3131相关的circRNA有17个,与has-miR3-189-3p相关的circRNA有29个.结论 OA膝关节软骨细胞中差异表达的circRNA有1380个,其中215个上调表达,1165个下调表达,差异表达的circRNA主要影响GTP酶激活剂活性、腺苷核糖核苷酸结合等分子功能,细胞外基质成分、带状胶原纤维等细胞成分,糖原生物合成、补体和凝血级联等相关代谢通路.OA膝关节软骨细胞差异表达miRNA 24个,其中上、下调表达的miR-NA各12个,差异表达的miRNA主要参与含核碱基的化合物生物合成过程、细胞质翻译终止等分子功能,细胞内部分、翻译释放因子复合体等细胞成分,蛋白质泛素化、白细胞跨内皮迁移等相关代谢通路.circRNA和miRNA共同通路有Cell adhesion molecules pathway、Circadian entrainment pathway;circRNA-miRNA相互作用网络中,has-miR-762、has-miR-18a-3p、has-miR-136-5p与circRNA关系最为密切.

目的 研究胰腺癌微环境中肿瘤相关中性粒细胞(tumor associated neutrophil,TAN)释放增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)对胰腺癌细胞增殖的影响.方法 ①采用ELISA法检测HL-60细胞分化产生的类中性粒细胞和TAN的APRIL表达.②采用蛋白印迹法验证胰腺癌PANC-1细胞中APRIL受体B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)和跨膜激活剂及钙调亲环素配基相互作用因子(trans-membrane activator and CAML interactor,TACI)的表达.③将胰腺癌PANC-1细胞与TAN进行共培养,并分为PANC-1对照组(简称对照组)、PANC-1+TAN处理组(简称PANC-1 +TAN组)、PANC-1+TAN+APRIL抗体处理组(简称PANC-1+TAN+APRIL组)和PANC-1+人工重组APRIL蛋白(rAPRIL)处理组(简称PANC-1+ rAPRIL组),采用CCK8法测定TAN释放APRIL对PANC-1细胞增殖活性的影响.结果 ①TAN细胞组培养基中APRIL含量高于中性粒细胞组[(556.20±84.38) pg/mL比(377.17±57.07)pg/mL,P=0.038].②PANC-1细胞表达APRIL的受体BCMA和TACI.③PANC-1+TAN组和PANC-1+rAPRIL组的PANC-1细胞活性[(126.80±1.42)％、(168.95±12.54)％]明显高于对照组[(100±0.00)％,P=0.034、P＜0.001],PANC-1+TAN组的PANC-1细胞活性显著高于PANC-1+TAN+APRIL组[(86.29±±12.20)％,P=0.003]而显著低于PANC-1+rAPRIL组(P-0.002),PANC-1+rAPR1L组PANC-1细胞活性显著高于PANC-1+TAN+APRIL抗体组(P＜0.001).结论 胰腺癌微环境下TAN释放APRIL增加,进而促进胰腺癌PANC-1细胞的增殖活性,为胰腺癌进展的机制研究和治疗方法的探索提供了新的思路.

研究发现人偏肺病毒入胞过程有脂筏的参与,而EGFR是定位于胞膜脂筏上的一种跨膜糖蛋白,在多种病毒的感染中发挥重要作用,该文主要探索表皮生长因子受体(EGFR)在人偏肺病毒(hMPV)感染中的作用及其相关机制.利用人支气管上皮细胞16HBE,用Western blot检测细胞感染hMPV特定时间后EGFR的活化情况.使用EGFR的激活剂和抑制剂改变EGFR的表达和活化水平后再感染hMPV,实时荧光定量PCR检测病毒滴度的变化.结果显示,hMPV入胞5 min就可观察到EGFR磷酸化水平明显增高,15 min时达到最大值.活化剂预先激活EGFR可以促进病毒入胞,而抑制EGFR则可降低病毒的滴度.该研究阐述了hMPV入胞可以激活EGFR,且EGFR的活化会促进病毒入胞.

E-钙黏蛋白(E-cadherin)是一种由CDH1基因编码的跨膜糖蛋白,在维持细胞黏附中起着至关重要的作用.由于E-钙黏蛋白参与调节细胞增殖、侵袭和迁移等信号通路,E-钙黏蛋白缺失可导致胃上皮细胞功能障碍,促进胃癌发生、发展.全文就E-钙黏蛋白在胃癌发生发展中的作用及临床应用价值等内容,总结了E-钙黏蛋白的生物学功能及其在胃癌发生、侵袭、转移和耐药中的调控作用,同时揭示了E-钙黏蛋白在胃癌早期诊断、预后、治疗等方面的应用,以及E-钙黏蛋白激活剂作为抗肿瘤药物的开发现状等,为胃癌的精准治疗提供新思路.

缺血性脑卒中可导致神经细胞死亡或永久性神经功能缺损,是目前世界致死和成人致残的主要原因[1].缺血性卒中发生后,神经细胞被剥夺氧和能量,不能维持其正常的跨膜离子梯度和稳态,从而导致细胞出现如兴奋性毒性、氧化应激、炎症、细胞凋亡等复杂病理生理过程,且相互关联,在正反馈回路中相互触发,最终导致神经细胞死亡[2].目前,重组组织型纤溶酶原激活剂(tPA)仍是美国食品及药物管理局(Food and Drug Administration,FDA)批准的唯一对缺血性脑卒中有效的治疗药物,但因治疗时间窗限制获益人群甚少[3],导致受损伤的脑组织不能及时得到血氧供应.开发新型神经细胞保护治疗药物势在必行,经研究发现二十二碳六烯酸(DHA)对脑缺血事件引起的损伤具有神经保护特性.