目的 验证透明质酸寡糖在保湿、舒缓、修护、抑制炎症及抗氧化方面的护肤功效.方法 通过乳猪皮透皮吸收实验检测透明质酸寡糖透皮吸收能力;通过斑马鱼实验验证透明质酸寡糖的保湿和舒缓功效;构建3D表皮皮肤模型检测透明质酸寡糖的修护作用;利用巨噬细胞炎症因子表达实验证明透明质酸寡糖在抑制炎症因子表达方面的作用;以及通过1,1-二苯基-2-苦基肼基自由基(DPPH)清除能力实验揭示透明质酸寡糖的抗氧化功效.结果 透明质酸寡糖皮下透过率高达54%;斑马鱼尾部面积明显增加并且中性粒细胞数量明显减少;丝聚蛋白(FLG)、闭合蛋白 1(Claudin-1)、透明质酸的受体(CD44)、神经酰胺浓度均有提升;炎症因子IL-1β、TNF-α、PGE2表达量下降;自由基清除率高达85.55%.结论 透明质酸寡糖在保湿修护、舒缓抗炎以及抗氧化方面功效显著,为化妆品原料开发与应用提供新的思路与数据支持.

目的 研究基于透明质酸(HA)-己二酸二酰肼(ADH)/RGD寡肽功能化果胶(PAD)的可注射HA-ADH/PAD-RGD水凝胶体系的软骨形成作用.方法 采用腙交联法合成水凝胶.通过分析HA-ADH与PAD-RGD不同质量比(8:2、6:4、4:6)HA-ADH/PAD-RGD水凝胶的形态学、凝胶时间、力学强度、降解时间、细胞增殖和软骨作用等因素,综合评价该水凝胶的特性.结果 质量比从8:2减小到6:4和4:6时,水凝胶时间从(132.8±4.8)s分别增加到(188.7±10.1)s和(328.9±12.6)s(P<0.01),平衡溶胀比(ESR)从32.8±1.5分别依次增大到34.8±2.3和36.4±1.9(P<0.01).经过49 d降解后,8:2、6:4、4:6质量比组水凝胶的剩余质量比依次为85.3％、73.5％和55.9％.另外,随着质量比减小,水凝胶的力学强度不断减小.培养1 d后8:2、6:4、4:6质量比组水凝胶的dsDNA含量分别为(0.7±0.1)μg、(0.6±0.1)μg、(0.6±0.1)μg(P>0.05).培养21 d后,6:4组水凝胶dsDNA含量为(1.9±0.2)μg明显高于8:2组[(1.6±0.1)μg,P<0.05]和4:6组[(1.5±0.1)μg,P<0.05].6:4组水凝胶Ⅱ型胶原基因的表达为2.3±0.2明显高于8:2组(1.3±0.2,P<0.05)和4:6组(1.0±0.1,P<0.05).6:4组糖胺聚糖(GAG)产生量为(16.5±1.4)μg明显高于8:2组[(9.1±1.4)μg,P<0.05]和4:6组[(8.8±1.0)μg,P<0.05].包裹在6:4组水凝胶中软骨细胞胶原Ⅱ型免疫着色的细胞百分比为(83.7±15.7)％,明显高于8:2组[(53.3±9.2)％,P<0.05]和4:6组[(43.9±7.8)％,P<0.05].结论 HA-ADH/PAD-RGD水凝胶具有适宜的凝胶时间,力学强度,良好的组织相容性和细胞相容性,并能增强软骨细胞增殖,维持软骨细胞表型.不同质量比HA-ADH/PAD-RGD水凝胶具有不同性质,6:4质量比水凝胶具有最好的物理化学和生物学性质.

明质酸是一种高分子糖胺聚糖,不同相对分子质量(Mr)的透明质酸具有不同的生物活性.文章主要对近年来低Mr和寡聚透明质酸的制备方法、生物活性及其应用的研究进展进行了综述,为将来进一步研究利用低Mr和寡聚透明质酸提供了理论依据和新思路.检索阅读近几年国内外发表的与低Mr和寡聚透明质酸相关的研究文献,对原始研究论文中的数据和主要观点进行了分析整理并归纳总结.通过分析文献发现,近年来对低Mr及寡聚透明质酸的制备方法和它们在抗氧化、促进骨和血管生成、促进伤口愈合、免疫调节等生物活性研究较多,并且在临床医学、药品、化妆品、保健食品等领域的应用均有研究.LMW-HA和oligo-HA表现出的与普通高MrHA截然不同的生物活性,随着研究的不断深入,其在临床医学、药品、化妆品、保健食品等领域将有更广阔的应用前景.

透明质酸(HA)广泛应用于医学、化妆品、食品等领域.HA的生物活性取决于其分子量(Mw).透明质酸寡糖由于具有重要的生理活性与特殊生理功能,在医药领域具有重要的应用前景.兽疫链球菌因其发酵周期短、生产强度较强的特点,在商业生产HA上具有广泛的应用.为了高效发酵合成透明质酸寡糖和解决发酵过程的溶氧问题,文中通过在兽疫链球菌WSH-24中过表达透明质酸合酶HasA以及优化表达水蛭来源的透明质酸酶LHAase.重组菌株摇瓶发酵24 h,透明质酸寡糖积累至0.97 g/L,比野生菌提高了182.0％.在3L发酵罐中发酵24 h,透明质酸寡糖生产强度为294.2 mg/(L.h),HA积累至7.06 g/L,比野生茵的罐上水平提高了112.4％.文中所构建的发酵合成透明质酸寡糖的兽疫链球菌重组菌株具有重要的应用前景.

目的:使用桃金娘油、透明质酸、褐藻寡糖、花青素4种植物提取液的鼻喷合剂(商品名:毕罗芬)对161例鼻黏膜干燥、糜烂、出血患者进行前瞻性治疗前后的临床观察,了解该制剂在鼻黏膜保湿、糜烂面修复及控制黏膜出血的效果.方法:①诊断:结合患者主诉与鼻内镜检查确定鼻中隔黏膜干燥、糜烂、出血的患者.②病情评定:采用VAS评分法对主观症状的严重程度进行0?10分的评估;采用鼻内镜检查对黏膜病变程度进行0?8分的评估.③鼻内用药:毕罗芬每天2次,每次每侧鼻腔2喷,根据患者用药后自身症状缓解的感受,和(或)鼻内镜检查结果分别给予持续6?8周的治疗.对同时伴有变应性鼻炎的患者或患儿同时给予白三烯受体拮抗剂常规剂量口服.④随访与疗效评定:根据主观症状VAS评分,对全组治疗前后总得分的差异进行统计学处理;根据鼻内镜检查评分,对全组治疗前后总得分的差异进行统计学处理;患者对治疗的自身感受进行评价;医生根据治疗前后主客观评估结果,结合患者对治疗效果的满意度给予最终总体治疗效果的评价.结果:①161例患者治疗前、后主观症状VAS评分比较差异有统计学意义(P＜0.01);②治疗前、后鼻中隔黏膜内镜评分差异有统计学意义(P＜0.01);③患者对使用该药物的依从性、耐受性以及治疗效果满意度较高(95％左右).结论:毕罗芬鼻喷剂可有效缓解与改善干燥性鼻炎、鼻出血以及修复鼻黏膜糜烂.

透明质酸酶是能降解透明质酸及部分糖胺聚糖的一类糖苷酶,可应用于医疗和美容等领域.透明质酸酶也可用于制备小分子糖胺寡糖,许多研究发现小分子糖胺寡糖具有比大分子糖胺聚糖更高的生物免疫活性.为便于研究人员对透明质酸酶进行进一步的基础研究及应用研究,本文介绍了透明质酸和透明质酸酶,梳理了透明质酸酶的分类、结构和催化机理,归纳总结了透明质酸酶的酶活力测定方法、重组表达、酶学性质和应用,展望了透明质酸酶的研究方向.

透明质酸酶能够将透明质酸聚糖降解成具有抗氧化等生物活性的低分子量寡糖.微生物来源透明质酸酶具有酶学性质多样和易于重组表达等特点,是开发透明质酸酶的研究热点.通过基因组测序获得一个潜在的金黄色葡萄球菌来源透明质酸裂解酶基因hylS,将其进行了大肠杆菌BL21(DE3)异源重组表达,并对重组酶进行了酶学特性和酶解产物抗氧化性分析.纯化后的重组酶rHylS的最适pH和温度分别为5.0和45℃;专一性降解透明质酸,比活是(1.6×105±5.4)U/mg;降解透明质酸产生低分子量的不饱和寡糖,属于内切透明质酸裂解酶;酶解产物对ABTS、DPPH、超氧阴离子和羟自由基清除能力显著高于未酶解的高分子量透明质酸,且与浓度呈正相关.金黄色葡萄球菌来源的透明质酸裂解酶HylS酶学性质优良,可用于生产具有抗氧化性低分子量的不饱和透明质酸寡糖.

背景 氧化应激水平过高、长期的炎症状态严重影响糖尿病患者的创面愈合,目前治疗糖尿病皮肤溃疡(DCU)的药物有生物制剂、中药、干细胞疗法等,但由于其缺乏安全性、有效性的充足证据,在临床应用中受到限制,亟需发现新的药物.透明质酸寡糖(o-HA)具有抗氧化性和抗炎性,是治疗DCU的重要方法.目的 观察o-HA对DCU创面愈合作用并探究其对氧化应激核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响.方法 实验时间为2021年4—12月,取6周龄SPF级雄性昆明小鼠90只,留取10只作为正常对照组(NC组),其余经腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病小鼠模型,建模成功的60只糖尿病小鼠按照随机数字表法分为6组,每组10只,即糖尿病模型组(DM组)、重组人表皮生长因子阳性对照组(rhEGF组)、空白基质阴性对照组(matrix组)、低剂量o-HA治疗组(0.5％o-HA组)、中剂量o-HA治疗组(1％o-HA组)、高剂量o-HA治疗组(2％o-HA组).所有小鼠利用全层皮肤切除环形夹板法建立创面模型,NC组和DM组小鼠创面不做任何处理,其他各组每日创面及创周常规消毒后,均匀涂抹各组相应药物于创面及创周,rhEGF组给药1次/d,0.5％、1％、2％o-HA组给药2次/d,连续给药14 d.治疗后第1、7、14天拍照记录DCU小鼠创面愈合情况,利用HE染色、Masson染色、CD34免疫组化染色观察给药14 d后小鼠创面肉芽组织形态变化、胶原纤维生成和新生血管,试剂盒检测给药14 d后小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,Western-blotting检测给药14 d后小鼠创面组织Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、NAD(P)H醌氧化还原酶1(NQO1)的蛋白表达水平.结果 给药第7天,rhEGF组、1％o-HA组创面愈合率高于DM组,0.5％o-HA组、2％o-HA组创面愈合率低于NC组、高于DM组;给药第14天,rhEGF组、0.5％o-HA组、1％o-HA组、2％o-HA组创面愈合率高于DM组(P<0.05).组织形态学显示o-HA软膏干预后创面肉芽组织、胶原纤维、新生血管密度明显增多.rhEGF组、0.5％o-HA组、1％o-HA组、2％o-HA组MDA水平低于DM组,SOD水平高于DM组;0.5％o-HA组、2％o-HA组MDA水平高于NC组(P<0.05).rhEGF组、1％o-HA组Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达水平均高于NC组和DM组;0.5％o-HA组Nrf2、NQO1蛋白表达水平高于DM组,HO-1蛋白表达水平高于NC组和DM组;2％o-HA组HO-1蛋白表达水平高于NC组和DM组,NQO1蛋白表达水平高于DM组(P<0.05).结论 o-HA对DCU小鼠创面有潜在促愈合作用,以1％o-HA软膏愈合效果最好,可加速创面闭合、再上皮化,促进血管新生,影响Nrf2途径,加速创面愈合,具有安全性高、稳定性好的优势,在临床DCU创面修复方面极具潜力.

目的:探讨富血小板血浆+透明质酸钠对软骨细胞增殖的影响.方法:48只新西兰大白兔随机分为空白组、富血小板血浆(Platelet Rich Plasma,PRP)组、透明质酸钠(Hyaluronic Acid,HA)组和富血小板血浆联合透明质酸钠(PRP+HA)组,每组12只.PRP组、HA组和PRP+HA组通过改良Hulth法复制兔左膝骨关节炎模型,空白组仅打开膝关节腔后缝合.改良Hulth法6周可建立标准的骨关节炎模型,PRP组和PRP+HA组于造模后第1周取耳静脉血按Aghaloo法制备富血小板血浆,分别将0.5 mL PRP和0.5 mL PRP+0.5 mL HA行左膝关节腔注射,透明质酸钠组0.5 mL HA左膝关节腔注射,空白组注射等量生理盐水.1周注射1次,连续注射5周后处死实验动物,取相应标本待检.分别对关节软骨行肉眼下Pelletier评分,苏木精-伊红(HE)染色并进行Mankin评分,Masson染色和甲苯胺蓝染色分别观测胶原纤维及蛋白多糖的变化,透射电镜观察软骨细胞形态变化,ELASA检测关节液Ⅱ型胶原羧基端肽(CTX-Ⅱ)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)的表达情况.结果:PRP+HA较单一PRP或HA对兔膝骨性关节炎有更好的治疗效果,可更好地改善Pelletier评分和Mankin评分,差异有统计学意义(P＜0.05);减少软骨组织中蛋白多糖及胶原纤维的降解,差异有统计学意义(P＜0.05);更好保护软骨细胞微观水平结构;减低关节液中CTX-Ⅱ和COMP的浓度,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:富血小板血浆联合透明质酸钠对膝关节骨关节炎软骨病理损伤有一定的保护作用.

透明质酸(Hyaluronic acid,HA)又被称为玻尿酸,是一种广泛存在于动物组织细胞间质液中的天然粘性多糖,其主要单体结构为一个N-乙酰氨基葡萄糖与一个D-葡萄糖醛酸通过β-1,4-糖苷键连接而成的双糖,并由多个双糖结构连接,形成大分子多糖[1]HA因其较强的保水能力,作为保湿功效成分被广泛应用于化妆品中.根据分子量的差异,可以将HA分为高分子 HA(Mw＞200 kDa),低分子 HA(10 kDa＜Mw＜200 kDa)以及HA寡聚糖(Mw＜10 kDa)[2].近年来,有研究者通过调控相关基因的表达,实现了对oligo-HA的直接发酵生产,oligo-HA也开始作为新的原料成分被应用于化妆品中[3].然而,对于oligo-HA的使用安全性尚未完全明确,随着人类社会及科学伦理的发展,动物福利问题越来越受到重视,"3R原则"(replacement,reduction and refinement)的提出为动物替代试验提供了理论基础支持[4].欧盟化妆品动物试验禁令的实施,也使得非动物试验进行安全评估的重要性进一步提升.尽管我国现有的法规中并未完全禁止动物实验,但仍有必要采用替代试验来对化妆品原料的毒理学性质进行评估.