目的:对1个遗传性抗凝血酶（AT）缺陷症患者所携带的复合杂合突变进行分子机制研究。方法:先证者因“突发晕厥并四肢抽搐一天”于2018年11月就诊于温州医科大学附属第一医院。采集先证者及其家系成员（共3代9人）外周静脉血并进行家系调查。采用发色底物法检测AT活性（AT：A），免疫比浊法检测AT抗原（AT：Ag）。对SERPINC1基因进行直接测序以确定突变位点。利用多种计算机工具预测突变的保守性和疏水性变化。构建重组质粒表达载体并瞬时转染HEK293T细胞以进行体外过表达研究。采用Western Blotting、ELISA和细胞免疫荧光实验对重组AT蛋白进行体外表征。结果:先证者为一例21岁男性。AT：A为 33%，AT：Ag同步下降，属于Ⅰ型AT缺陷症。基因分析显示先证者在第2和第5外显子分别携带c.318_319insT（p.Asn107*）杂合插入突变和c.922G>T（p.Gly308Cys）杂合错义突变。该两个突变位点在同源物种中均完全保守；疏水性分析表明，p.Gly308Cys突变可能降低氨基酸残基307-313的亲水性。体外表达显示，重组蛋白AT-G308C在转染细胞裂解液和培养上清中的含量分别降低至46.98%±2.94%和41.35%±1.48%；经蛋白酶体抑制剂（MG132）处理后，Western Blotting分析显示在细胞质中的AT-G308C蛋白量恢复到与野生型相似的水平；在细胞裂解液和培养上清中均未检测到重组蛋白AT-N107*。结论:p.Asn107*杂合插入突变和p.Gly308Cys杂合错义突变与该家系先证者AT水平降低有关。p.Asn107*杂合插入突变可能触发无义突变介导的mRNA降解，从而消除异常转录本；p.Gly308Cys杂合错义突变可能通过改变局部残基的疏水性导致AT蛋白在细胞质中发生蛋白酶体依赖性降解。

蛋白C是一种由肝细胞合成和分泌的维生素K依赖性丝氨酸蛋白酶原 [1]，是机体重要的生理性抗凝物质之一。蛋白C活化后能通过水解活化凝血因子Ⅴ（FⅤa）和活化凝血因子Ⅷ（FⅧa）来抑制凝血酶的产生。遗传性蛋白C缺陷症是由编码蛋白C的基因（PROC）突变引起的导致常染色体显性遗传疾病，纯合或复合杂合突变导致的严重蛋白C缺陷症极其罕见，发病率约为1/400万 [2]，临床可表现为出生后不久发生的新生儿暴发性紫癜；单杂合型遗传性蛋白C缺陷症的发病率在普通人群中为0.14%~0.50% [3]，此类患者静脉血栓形成的风险可增加5~7倍。截至2021年4月，人类基因组突变数据库（HGMD）共列出391种PROC基因突变，其中错义/无义突变290种，小部分缺失突变30种。我们近期收治2例遗传性蛋白C缺陷症患者，并对其进行家系调查和基因突变分析。

蛋白C是一种维生素K依赖性丝氨酸蛋白酶，是抗血栓形成调节系统的核心组成部分，具有抗凝和纤溶特性。蛋白C在体内以酶原形式存在，在内皮细胞表面凝血酶-血栓调节蛋白复合物的作用下激活成活化蛋C（APC） [1]，在蛋白S辅助下，通过灭活活化的凝血因子V和凝血因子Ⅷ来抑制凝血酶的产生，发挥抗凝作用，主要作用部位在微循环 [2]。遗传性蛋白C缺陷症以反复弥散性血管内凝血和出血性皮肤坏死为主要表现，可伴有多器官出血或血栓形成。1981年Griffin等 [2]首次报告，编码蛋白C的PROC基因发生突变可导致蛋白C含量和（或）功能异常，导致血栓性出血性疾病。现报告我院收治的2例遗传性蛋白C缺陷症致新生儿暴发性紫癜患者，旨在提高对该病的临床及基因诊断的认识。

遗传性异常纤维蛋白原血症（CD）是纤维蛋白原（Fg）基因缺陷导致Fg分子结构异常与功能缺陷的一种遗传性疾病，绝大多数为常染色体显性遗传。CD患者临床表现呈多样性，如无症状、出血、血栓形成或既有出血表现又有血栓形成，因此，CD诊断主要依赖实验室检查。CD具有极大诊断价值的凝血功能检查结果为纤维蛋白原抗原/活性比值（PT演算法结果/Clauss法结果）大于1.43，凝血酶时间（TT）延长，凝血酶原时间（PT）和活化部分凝血活酶时间（APTT）通常无异常。根据患者临床表现、凝血功能检查结果，结合家系调查即可明确CD诊断。质谱分析能够快速鉴别CD患者纤维蛋白原缺陷类型，DNA测序能够直接确定其纤维蛋白原缺陷基因位点。

目的:对一个遗传性抗凝血酶（AT）与凝血因子Ⅶ（FⅦ）联合缺陷症家系进行临床特征和基因突变分析，探讨 AT基因和 F7基因突变与疾病发生的关系。 方法:家系调查。收集2018年11月来温州医科大学附属第一医院就诊的先证者及其家系成员血液和临床资料（共3代16人），检测凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）、抗凝血酶活性（AT：A）、抗凝血酶抗原（AT：Ag）、蛋白C活性（PC：A）、蛋白S活性（PS：A）、FⅦ活性（FⅦ：C）及FⅦ抗原（FⅦ：Ag）等指标以明确诊断。提取先证者及其家系成员外周血基因组DNA，用DNA直接测序法分析 AT基因和 F7基因全部外显子、侧翼及5′、3′非编码区，寻找基因异常位点，并通过克隆测序及反向测序进行验证。 结果:先证者（Ⅱ 6）AT：A和AT：Ag明显下降，分别为46%和135 mg/L（参考范围为250~360 mg/L）；其家庭部分成员（父亲Ⅰ 2、小姑Ⅰ 4、堂姐Ⅱ 1、表姐Ⅱ 3、小弟弟Ⅱ 8、侄子Ⅲ 3）AT：A和AT：Ag均降低至正常人的50%左右；其父亲（Ⅰ 2）、小姑（Ⅰ 4）、大弟弟（Ⅱ 7）、小弟弟（Ⅱ 8）、侄子（Ⅲ 3）FⅦ：C分别为45%、50%、48%、47%和48%，而FⅦ：Ag正常。基因分析显示先证者（Ⅱ 6）及其家庭部分成员（父亲Ⅰ 2、小姑Ⅰ 4、堂姐Ⅱ 1、表姐Ⅱ 3、小弟弟Ⅱ 7、侄子Ⅲ 3）AT基因5′非编码区存在rs3138521多态性；其父亲（Ⅰ 2）、小姑（Ⅰ 4）、大弟弟（Ⅱ 7）、小弟弟（Ⅱ 8）、侄子（Ⅲ 3）均存在 F7基因8号外显子c.1091G>A杂合错义突变，导致p.Arg304Gln。 结论:抗凝血酶与凝血因子Ⅶ分别存在rs3138521多态性和c.1091G>A杂合错义突变，可能是导致该家系成员AT与FⅦ联合缺陷的分子机制。

目的:分析1个遗传性抗凝血酶(AT)缺陷症家系的临床表型及遗传学特征。方法:回顾性分析2020年6月"因反复多部位形成静脉血栓"就诊于温州医科大学附属第二医院的1对AT先证者及其家系成员的临床资料。用STA-R全自动血凝分析仪检测先证者及家系成员血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间(TT)；用发色底物法和免疫散色比浊法检测先证者及其家系成员血浆AT活性(AT: A)和AT抗原(AT: Ag)。用PCR扩增先证者及家系成员抗凝血酶基因 SERPINC1的所有外显子及侧翼序列，测序并寻找变异位点；采用生物信息学预测软件对蛋白质功能的影响和蛋白质构象的改变进行分析。 结果:先证者(Ⅱ 2、Ⅱ 10)及其兄弟(Ⅱ 5)和儿子(Ⅲ 1、Ⅲ 8)的PT、APTT、FIB及TT均在正常范围，而AT: A和AT: Ag明显下降，分别为34%、57%、56%、48%、53%和13.51、13.44、18.39、17.36、17.71 mg/dL，其余家系成员均在正常范围。先证者及家系成员测序结果显示均携带 SERPINC1基因第5外显子c.851T>C(p.Met284Thr)杂合错义变异；生物信息学软件预测提示该变异可导致c.851位点编码氨基酸的氢键改变，影响蛋白质的结构。根据美国医学遗传学与基因组学学会变异评级标准指南，该变异评级为致病性变异(PS1＋PM1＋PM5＋PP1＋PP4)。 结论:先证者及其他患者家系成员被确诊为Ⅰ型遗传性AT缺陷症患者， SERPINC1基因c.851T>C(p.Met284Thr)变异是其遗传学病因。

遗传性抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）缺陷症是一种罕见的常染色体显性疾病，由SERPINC1基因突变引起。该病主要表现为体内AT-Ⅲ活性降低，增加静脉血栓及妊娠丢失的风险。目前，我国关于妊娠合并遗传性AT-Ⅲ缺陷症的报道较少，本文报道1例既往有肺栓塞病史、妊娠前确诊为遗传性AT-Ⅲ缺陷症患者，经过妊娠期抗凝治疗于孕39周顺产一活婴，妊娠结局满意；结合文献复习，以提高对妊娠合并遗传性AT-Ⅲ缺陷症的认识。

目的:对1个遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症家系进行实验室表型和基因变异分析，初步探讨其分子发病机制。方法:选取2021年7月17日因"慢性胃炎"就诊于宁波市第二医院的1例遗传性FⅫ缺陷症男性先证者及其家系成员(共3代7人)作为研究对象。检测先证者及其家系成员凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ：C)、凝血因子Ⅸ活性(FⅨ：C)、凝血因子Ⅺ活性(FⅪ：C)、FⅫ活性(FⅫ：C)和FⅫ抗原(FⅫ：Ag)等指标以明确诊断。采用DNA直接测序分析 F12基因的所有外显子、侧翼、5′和3′非翻译区及家系成员相应的变异位点区域，用克隆测序进一步证实所发生的变异。用生物信息学软件分析变异对蛋白功能的影响。 结果:先证者为47岁男性，APTT为180.0 s，明显延长，FⅫ：C和FⅫ：Ag均<1.0%，极度降低。先证者父亲、母亲、弟弟、大儿子及小儿子FⅫ：C和FⅫ：Ag均有不同程度降低。基因分析显示先证者 F12基因第10外显子存在c.1092_1093insC(p.Lys365Glnfs*69)杂合插入变异及第14外显子存在c.1792_1796delGTCTA(p.Val579Hisfs*32)杂合缺失变异，c.1092_1093insC为已报道的致病性变异。其母亲和大儿子携带c.1092_1093insC杂合插入变异，父亲、弟弟和小儿子携带c.1792_1796delGTCTA杂合缺失变异。第1外显子启动子区46C/T多态性分析显示先证者、大儿子和小儿子为46T/T型，其余人均为46C/T型。生物信息学软件分析第579位氨基酸残基为高度保守的位点，变异后增加了一个苯环及周围氨基酸的氢键发生了改变。根据美国医学遗传学与基因组学学会相关遗传变异分类标准和指南，c.1792_1796delGTCTA变异评级为致病性变异(PVS1＋PM2_Supporting＋PM4)。 结论:F12基因母源的c.1092_1093insC(p.Lys365Glnfs*69)杂合插入变异及父源的c.1792_1796delGTCTA(p.Val579Hisfs*32)杂合缺失变异可能是该家系FⅫ水平降低的原因。上述发现丰富了FⅫ缺乏症的基因-表型谱。

目的:探讨1个凝血因子Ⅺ（FⅪ）基因新突变致遗传性FⅪ缺陷症家系临床出血的分子机制。方法:选取2023年2月23日因“腺样体肥大”就诊于山西医科大学附属运城市中心医院的1例遗传性凝血因子Ⅺ缺陷症男性先证者及其家系成员（3代5人）作为研究对象。收集先证者及家系成员的临床资料；检测所有成员相关凝血指标；选取凝血指标异常［活化部分凝血活酶时间（APTT）延长，凝血酶时间（PT）与纤维蛋白原（Fib）正常］者进行APTT纠正实验；选取纠正后罗斯纳指数（RI）小于10%者用一步法检测FⅪ活性（FⅪ：C）、用ELISA法检测FⅪ抗原（FⅪ：Ag）、用Illumina 测序法测定全外显子序列。根据美国医学遗传学与基因组学学会（ACMG）相关变异评级指南对新突变位点进行评级，用生物信息学软件预测新突变对蛋白质结构及功能的影响。结果:先证者及其父亲、女儿的APTT均延长且RI小于10%；进一步检测发现3人FⅪ：C与FⅪ：Ag均降低；Illumina测序发现3人FⅪ第11号外显子存在c.1223dupC（P.Ser409Leufs*32）新的移码突变，先证者父亲FⅪ第11号外显子还存在c.G1253T（p.Gly418Val）错义突变；ACMG对新突变的评级为：致病性变异，c.G1253T为已报道的可能致病变异。结论:FⅪ第11号外显子c.1223dupC（P.Ser409Leufs*32）杂合移码突变可能为该家系致病的主要分子机制。