目的:对1个遗传性抗凝血酶（AT）缺陷症患者所携带的复合杂合突变进行分子机制研究。方法:先证者因“突发晕厥并四肢抽搐一天”于2018年11月就诊于温州医科大学附属第一医院。采集先证者及其家系成员（共3代9人）外周静脉血并进行家系调查。采用发色底物法检测AT活性（AT：A），免疫比浊法检测AT抗原（AT：Ag）。对SERPINC1基因进行直接测序以确定突变位点。利用多种计算机工具预测突变的保守性和疏水性变化。构建重组质粒表达载体并瞬时转染HEK293T细胞以进行体外过表达研究。采用Western Blotting、ELISA和细胞免疫荧光实验对重组AT蛋白进行体外表征。结果:先证者为一例21岁男性。AT：A为 33%，AT：Ag同步下降，属于Ⅰ型AT缺陷症。基因分析显示先证者在第2和第5外显子分别携带c.318_319insT（p.Asn107*）杂合插入突变和c.922G>T（p.Gly308Cys）杂合错义突变。该两个突变位点在同源物种中均完全保守；疏水性分析表明，p.Gly308Cys突变可能降低氨基酸残基307-313的亲水性。体外表达显示，重组蛋白AT-G308C在转染细胞裂解液和培养上清中的含量分别降低至46.98%±2.94%和41.35%±1.48%；经蛋白酶体抑制剂（MG132）处理后，Western Blotting分析显示在细胞质中的AT-G308C蛋白量恢复到与野生型相似的水平；在细胞裂解液和培养上清中均未检测到重组蛋白AT-N107*。结论:p.Asn107*杂合插入突变和p.Gly308Cys杂合错义突变与该家系先证者AT水平降低有关。p.Asn107*杂合插入突变可能触发无义突变介导的mRNA降解，从而消除异常转录本；p.Gly308Cys杂合错义突变可能通过改变局部残基的疏水性导致AT蛋白在细胞质中发生蛋白酶体依赖性降解。

目的:分析腹膜透析（腹透）置管术围手术期使用抗凝或抗血小板药物对患者发生出血和心脑血管事件的影响。方法:回顾性收集和分析2010年7月1日至2020年12月31日在北京大学第三医院接受腹透置管术患者手术前后的临床资料。根据患者术前是否停用抗凝或抗血小板药物分为停药组和未停药组，比较两组患者基线临床资料、术后出血和心脑血管事件的差异。采用多因素Logistic回归分析法分析腹透置管术围手术期发生出血和心脑血管事件的影响因素。结果:共57例患者被纳入本研究，男性34例，女性23例，年龄（67.37±13.93）岁（范围27~97岁）。停药组37例，未停药组20例。未停药组患者术前3个月内（10/20比3/37， χ2=10.671， P=0.001）及术前6个月内（11/20比3/37， χ2=12.980， P<0.001）发生急性心肌梗死事件的比例显著高于停药组。停药组术前中位停药时间为5.0（2.0，14.0）d（范围1~30 d），术后中位恢复用药时间为4.0（3.0，7.0）d（范围1~14 d）。停药组与未停药组患者术后2周内发生出血（10/37比8/20， χ2=1.011， P=0.315）及心脑血管事件（4/37比0/20，校正后 χ2=0.964， P=0.326）的差异均无统计学意义。多因素Logistic回归分析结果显示，术前停用抗凝或抗血小板药物不是术后发生出血事件的独立影响因素（ OR=0.656，95% CI 0.195~2.206， P=0.496），而术前服用阿司匹林+氯吡格雷为术后出血事件的独立影响因素（ OR=4.038，95% CI 1.044~15.626， P=0.043）。术后4例心脑血管事件均发生在停药组，术前6个月内有不稳定心绞痛病史（ OR=9.764，95% CI 0.928~102.682， P=0.058）、血钙升高（ OR=1.491，95% CI 0.976~2.278， P=0.065）者术后发生心脑血管事件风险有增加趋势。 结论:腹透置管术前是否停用抗凝或抗血小板药物不是患者术后发生出血事件的影响因素，但需关注术前应用阿司匹林+氯吡格雷患者的术后出血风险。术前6个月内有不稳定心绞痛发作及高血钙的患者停药后发生心脑血管事件风险有增加趋势。

蜱是一类体外吸血寄生虫,在吸血过程中蜱会向宿主体内释放多种抗凝血物质以保证血液的供应.其中含Kunitz结构域的丝氨酸蛋白酶抑制剂在抗凝血作用中占主要地位.不同的Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂具有相似的保守序列,但总体结构不同,在凝血级联中通过抑制丝氨酸蛋白酶类的凝血因子而阻断下游凝血因子的活化,以达到抑制凝血的效果.蜱源Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂在凝血系统中的靶点繁多且抑制机制各异.本文对该类蛋白酶抑制剂的抗凝靶点及作用机制进行归纳,有助于抗凝和抗血栓药物的研发,同时进一步解释蜱与宿主间的相互作用以及蜱源抗凝药物的药理作用,为预防蜱对宿主的侵害提供参考资料.

通过对近年来国内外有关地龙研究文献的整理和分析,总结归纳了地龙的品种鉴定、药材质量控制、化学成分、药理作用及地龙人工养殖的最新研究进展.根据2015年版《中国药典》记载,地龙包括参环毛蚓、通俗环毛蚓、威廉环毛蚓及栉盲环毛蚓.目前的研究表明,已有很多学者以地龙线粒体中细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)与16S rDNA基因作为DNA条形码进行地龙品种的鉴别,还运用了X射线衍射Fourier谱法及线粒体中12S rRNA基因作为分子标记来鉴定地龙品种,其鉴定方法还需进一步研究.目前已建立起多种地龙药材质量的控制方法,包括地龙HPLC指纹图、高效毛细管电泳特征图谱、酶活性为指标评价地龙药材质量及以灰关联度模型评价地龙药材质量等方法.地龙主要的化学成分包括蛋白质、氨基酸、酶类、脂类、微量元素、核苷酸等化合物,其主要药理作用有平喘降压、解热镇痛、抗凝血、抗血栓、抗肿瘤、增强免疫等.地龙的主要药效成分包括地龙蛋白、酶类、氨基酸、微量元素等,在有的药理作用中具体哪种成分发挥作用及其作用机制尚未明确,还需进一步深入研究.有关地龙的人工养殖鲜有报道,其养殖技术尚未成熟,规范化人工养殖地龙还处于摸索阶段.目前对地龙的研究还不足,使其具有广阔的研究和开发的前景.本文综述了近年来地龙的研究进展,为地龙的进一步研究提供参考依据.

目的:检测和分析遗传性易栓症的相关基因及其突变位点,为中国人群遗传性易栓症患者的基因突变特点积累资料.方法:对2015年6月至2017年12月在浙江大学医学院附属第二医院就诊的遗传性易栓症疑似患者25例进行血清蛋白C、蛋白S,抗凝因子相关基因蛋白C(基因名PROC)、蛋白S(基因名PROS1)和抗凝血酶Ⅲ(基因名SERPINC1),凝血因子相关基因凝血因子Ⅴ(基因名F5)、凝血因子Ⅱ(基因名F2)、凝血因子Ⅷ(基因名F8)、高型半胱氨酸血症相关因子(CBS、MTHFR)第二代测序分析.利用千人基因组数据库、ESP6500数据库、Genoma数据库、HGMD突变数据库比对突变位点,根据SIFT、Polyphen、MutationTaster、CADD数据库预测突变位点的致病性.结果:25例患者中,发现抗凝因子相关基因PROC突变患者8例,PROS1突变患者2例,SERPINC1突变患者3例;凝血相关基因F5突变1例,F2突变1例,F8突变1例,CBS突变2例,MTHFR突变1例.结论:应用第二代基因测序分析有助于诊断遗传性易栓症相关静脉血栓,指导精准治疗.

目的 了解乙型肝炎肝硬化患者的促凝、抗凝血因子以及临床常规凝血指标的变化,明确其临床意义.方法 选取2017年1月-2018年10月于兰州大学第一医院感染科门诊及住院的乙型肝炎肝硬化患者105例,根据Child-Pugh分级分为3组:A级组(n=42)、B级组(n=39)、C级组(n =24),对所有患者检测常用临床凝血指标如凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT),凝血因子(Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅺ),抗凝血因子抗凝血酶(AT)、蛋白C(PC)、游离蛋白S(FPS).计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验,相关性分析采用Spearman相关分析法.结果 不同Child-Pugh分级的乙型肝炎肝硬化患者PT、APTT差异均有统计学意义(F值分别为55.11、12.09,P值均＜0.001),C级组均显著高于B级和A级组,B级组均显著高于A级组(P值均＜0.05).凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅺ活性在不同Child-Pugh分级的乙型肝炎肝硬化患者中差异均有统计学意义(F值分别为32.52、14.77、38.88、9.24,P值均＜0.001),C级组均显著低于B级和A级组,B级组均显著低于A级组(P值均＜0.05).不同Child-Pugh分级的乙型肝炎肝硬化患者凝血因子Ⅷ活性差异有统计学意义(F=4.44,P＜0.05),C级患者的凝血因子Ⅷ活性显著高于B级和A级,差异均有统计学意义(P值均＜0.05),但A级与B级组间差异无统计学意义(P＞0.05).不同Child-Pugh分级的乙型肝炎肝硬化患者AT、PC、FPS活性组间比较差异均有统计学意义(F值分别为25.90、30.46、15.58,P值均＜0.001),C级组均显著低于B级和A级组,B级组均显著低于A级组(P值均＜0.05).相关分析发现,Child-Pugh分级与凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅺ及抗凝血因子PC、FPS、AT均呈负相关(r值分别为-0.687、-0.460、-0.706、-0.426、-0.723、-0.646、-0.468,P值均＜0.001),其中与凝血因子Ⅱ、Ⅶ、抗凝血因子PC的相关性较强.而凝血因子Ⅱ、Ⅶ与抗凝血因子PC均呈正相关(r值分别为0.851、0.745,P值均＜0.001).结论 乙型肝炎肝硬化患者促凝血因子减少的同时伴有抗凝血因子的减少,而两者的变化有明显的相关性,可能在体内重新形成一种不稳定的平衡,并不是常规认为的低凝状态.

血栓病的干预方式包括抗血小板凝集、抗凝血和溶栓,对应临床应用的分别是抗血小板、抗凝血酶和纤溶酶溶栓药物;纤溶酶是主要的溶栓类药物,主要用于血栓发病后的治疗.纤溶酶种类多来自于生物体,更多来自于微生物的次级代谢.本文从作用方式、安全性和市场开发等方面总结了国内外纤溶酶的类别、研究现状和发展趋势,并对不同产纤溶酶的微生物菌株类别进行了总结,对不同来源的纤溶酶基因和氨基酸序列等信息进行了比较,发现不同物种的纤溶酶基因虽然有差异,但主要是丝氨酸蛋白酶类,氨基酸序列一致性比较高,说明丝氨酸蛋白酶活性功能区域是相对保守的.

目的 观察恶性肿瘤患者体内血浆凝血纤溶情况,探讨凝血纤溶标志物在诊断恶性肿瘤患者血栓中的作用.方法 收集2017年9月至2019年7月间于中国医学科学院肿瘤医院就诊的171例患者,其中肿瘤术后无血栓组患者40例,术前无血栓对照组患者108例,未手术肿瘤血栓患者23例.分别检测凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)、纤溶酶-ɑ2纤溶酶抑制物复合物(PIC)、血栓调节蛋白(TM)、组织纤溶酶原激活物/纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物(t-PAI?C)的水平,并与D二聚体进行比较.结果 TAT、TM、PIC及t-PAI?C在肿瘤术前无血栓组、术后无血栓组及未手术血栓组三组间均具有显著统计学差异(均P<0.05);在恶性肿瘤未手术血栓组患者中,TAT、TM及PIC均高于无血栓组患者(均P<0.05).ROC显示PIC及TAT诊断肿瘤患者血栓的AUC均高于D-D(0.871 vs.0.619;0.788 vs.0.619);且PIC诊断的特异度高于D-D(91.9％vs.82.4％),PIC及TAT诊断的灵敏度均高于D-D(73.9％vs.47.8％,73.9％vs.47.8％).结论 恶性肿瘤患者体内凝血与纤溶活性异常增强,TAT及PIC优于D-D对恶性肿瘤患者血栓的诊断.

血清β-HCG水平反映滋养层细胞是否存活,血清孕酮水平反映卵巢及滋养层细胞的功能,这两种激素的检测在早期先兆流产的诊断中具有重要价值[ 1 ]. 目前,武警湖南总队医院已经将β-HCG和孕酮列为女性门急诊检测项目. 由于临床多采用雅培(Abbott i1000SR)全自动化学发光仪检测样本,需要在离心前使样本充分凝结,这就增加了样本前处理的时间[2] ,检测结果不能2 h内发出,无法满足门急诊检验的需求. 肝素钠是一种比较理想的抗凝剂,一般不会对血中酶类物质产生抑制作用. 笔者采用肝素钠抗凝血浆替代血清检测β-HCG和孕酮,实际使用效果比较满意.

目的 探讨阿加曲班在椎动脉支架置入术中的安全性及对术后再狭窄的影响.方法 前瞻性纳入2013年1月至2017年9月东部战区总医院神经内科行椎动脉支架置入术的患者,利用随机数字表法分为阿加曲班和肝素组.阿加曲班组术中接受阿加曲班抗凝治疗,术后连续使用5d;肝素组在介入手术中进行肝素抗凝,术后使用生理盐水作为安慰剂.术后l、3和6个月时进行临床随访,术后6个月时行数字减影血管造影、CT血管造影或磁共振血管造影检查评估治疗血管的再狭窄.主要终点事件包括术中安全性、术后支架内再狭窄以及随访期间出现的任何临床事件,包括卒中、心血管事件和死亡.主要安全性事件包括各器官出血、过敏反应、肝功能障碍及栓塞事件.采用Kaplan-Meier生存曲线评估随访期间血管事件发生率.结果 共105例患者纳入分析,阿加曲班组53例,肝素组52例.两组围手术期间均未发生出血性事件、过敏反应、肝功能障碍及栓塞事件.两组术前椎动脉狭窄程度、术后残余狭窄程度以及术后6个月狭窄程度差异均无统计学意义,但阿加曲班组术后6个月支架内新增狭窄程度显著低于肝素组(13.56％±26.41％对4.25％±15.76％;P=0.031).两组长期随访期间卒中复发率(P=1.000)及临床事件发生率(P =0.739)差异均无统计学意义.结论 在椎动脉支架置入术中使用阿加曲班抗凝治疗是安全的,术后连续使用阿加曲班抗凝可有效降低术后6个月时的新增支架内狭窄程度.