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金耳和毛韧革菌麦角硫因生物合成基因的克隆及生物信息学分析
编辑人员丨1个月前
[目的]探究金耳和毛韧革菌麦角硫因生物合成途径.[方法]利用PCR扩增技术分别克隆金耳和毛韧革菌的麦角硫因合成酶基因Egt1 和Egt2 并利用生物信息学软件分析其功能;高效液相色谱技术鉴定 2 个物种的组氨酸三甲基内盐中间产物、麦角硫因及其含量.[结果]成功克隆得到了 2 个物种Egt1 和Egt2 基因的完整DNA序列.生物信息学分析表明,2 个物种的Egt1均含有EgtD和SAM依赖性甲基转移酶等功能结合域,Egt2 均含有磷酸吡哆醛(LPL)和半胱氨酸脱硫酶的结合位点;Egt1 和Egt2与裂殖酵母和粗糙脉孢菌等模型真菌具有相似的功能域和底物结合位点,表明Egt1 和Egt2 可能与这些模式真菌具有相似的基因功能.高效液相色谱法分析表明,金耳芽孢(JEYB)、毛韧革菌发酵液(ShFJY)、菌丝体(ShJST)及金耳子实体(JEZST)中均含有组氨酸三甲基内盐和麦角硫因,并且金耳子实体麦角硫因含量最高(113.19 μg/g),分别是金耳芽孢、毛韧革菌发酵液和毛韧革菌菌丝体的 7.45 倍、26.14 倍和 27.74 倍.[结论]首次鉴定了金耳和毛韧革菌的Egt1和Egt2基因.推测金耳和毛韧革菌的生物合成途径都是由组氨酸在Egt1 酶催化形成组氨酸三甲基内盐,再由Egt1 酶催化形成海西烯半胱氨酸亚砜,最后由Egt2 酶催化最终形成麦角硫因.
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编辑人员丨1个月前
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4种银耳属多糖的理化特征、微观结构及其抗氧化和抗炎症作用研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 对4种银耳属多糖进行分离纯化,并对其理化特性、微观结构及其抗氧化和抗炎症作用进行研究.方法 采用热水提取法及DEAE-Sepharose CL-6B和Sephadex G-100柱色谱分离纯化银耳属多糖,利用高效空间排阻色谱法(HPSEC)、气相色谱法(GC)和红外光谱法(FTIR)研究理化特性,透射电子显微镜(TEM)研究微观结构,实时荧光定量PCR研究抗炎症作用.结果 分别从金耳、银耳、脑耳和血耳的水提粗提物中分离纯化得到主要多糖TABW-Ⅱ、TFBW-Ⅱ、TEPW-Ⅱ和TSPW-Ⅰ,它们都是均一组分,相对分子质量分别是26×103,11×103,21×103和356×103,均主要由葡萄糖和甘露糖组成.4种银耳属多糖均是线状无分支结构,TSPW-Ⅰ形成更加伸展的链缠绕结构.与维生素C相对比,TSPW-Ⅰ显示出更强的羟自由基和超氧自由基清除作用(P＜0.05),EC50值分别是0.127和0.088 mg·mL-1.TSPW-Ⅰ对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7产生炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和环氧化酶(COX)-2的抑制作用最强(P＜0.05),在150μg·mL-质量浓度下,抑制率均超过95％.结论 血耳主要多糖TSPW-Ⅰ与其他3种银耳属多糖相比拥有不同的糖原组成,相对分子质量大和更加伸展的线状缠绕链结构,同时也表现出最好的抗氧化与抗炎症作用.银耳属多糖都具有抗炎症因子表达的作用,可以作为潜在的抗炎药物开发.
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编辑人员丨2023/8/6
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金耳菌丝及子实体的转录组差异分析
编辑人员丨2023/8/5
为探讨金耳菌丝体时期和子实体时期基因表达变化,利用高通量测序技术进行RNA-Seq分析.差异基因分析显示,两个时期共有10 992个差异表达基因,其中在子实体时期上调、下调的基因数分别为9 988和1 004个.GO功能聚类分析显示,差异表达基因主要富集在催化活性、结合、细胞过程、代谢过程、细胞以及细胞组分.KEGG富集分析表明,差异表达基因参与了氨基酸代谢、碳水化合物代谢、脂类代谢这三大代谢通路,相关基因也大多在金耳子实体时期上调表达,说明金耳子实体发育时期需要一系列代谢反应及其它协同调控,这些代谢相关基因可能在金耳子实体发育时期起着重要作用.通过分析金耳菌丝体和子实体时期基因表达情况,得到了大量基因数据,旨为进一步研究金耳子实体发育机理和功能基因奠定重要的基础.
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编辑人员丨2023/8/5
