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铁硫簇结合蛋白1的磁感应能力
编辑人员丨2024/7/20
目的 探究铁硫簇结合蛋白1(ISCA1)磁场刺激后对细胞钙内流的影响.方法 ① 制备携带ISCA1基因的质粒、携带Magneto 2.0序列的质粒和空载质粒,且3种质粒均携带mCherry基因,包装成慢病毒感染HEK293A细胞,荧光显微镜观察慢病毒感染效率.②免疫共沉淀技术检测ISCA1与隐花色素1(CRY1)和CRY2蛋白之间的结合.③在磁场(40 mT,0.1 Hz,90%占空比)条件下,活细胞钙成像技术检测高表达ISCA1或Magneto 2.0细胞的钙内流.结果 ①在HEK293A细胞中观察到红色荧光,表明慢病毒转染成功.②外源ISCA1蛋白与内源CRY1或CRY2蛋白不结合.③与加磁前相比,加磁后Magneto 2.0组细胞的绿色荧光强度增加(1.8±0.5)倍(P<0.05),即发生显著的钙内流;而ISCA1组及细胞对照组细胞的绿色荧光强度与加磁前相比无显著差异.结论 外源高表达ISCA1的细胞在此磁场条件刺激后未引起细胞钙内流,无明显磁感应性.
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编辑人员丨2024/7/20
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shRNA介导黑素瘤A375细胞Cbl-b基因沉默前后蛋白质组学分析
编辑人员丨2023/8/6
目的 分析shRNA介导黑素瘤A375细胞Cbl-b基因沉默前后差异表达蛋白.方法 使用非标记定量蛋白质组学技术鉴定分别用Cbl-b shRNA慢病毒载体(Cbl-b shRNA组)和对照慢病毒载体(对照组)转染的A375细胞的差异表达蛋白.采用生物信息学方法对筛选的差异蛋白进行基因本体富集及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.Western印迹验证差异蛋白(EphA2、GSK3β)表达和Cbl-b shRNA沉默后两组p-AKT表达.采用SPSS 23.0软件进行统计分析,两组间蛋白丰度比较采用两样本t检验.基因本体及KEGG富集分析结果采用Fisher精确概率法检验.结果 共鉴定3 449种蛋白,筛选出Cbl-b shRNA组和对照组差异表达蛋白74个.与对照组相比,Cbl-b shRNA组52个蛋白表达上调,22个下调.差异蛋白基因本体富集分析发现前5位显著富集生物学过程为整合素介导细胞黏附、单一生物代谢过程、整合素介导细胞黏附调节、蛋白质靶向线粒体调节、核酸代谢过程;前5位显著富集分子功能为DNA结合、2,2铁硫簇合物结合、信号受体活性、钙黏蛋白结合、细胞黏附分子结合;前5位显著富集的细胞组分为核小体、DNA包装复合体、光感器连接纤维、DNA-蛋白质复合体、胞外区部分.京都基因与基因组百科全书通路富集分析发现,前5位与黑素瘤相关的显著富集通路包括叶酸生物合成、轴突导向、细胞外基质受体相互作用、黏合连接、Wnt信号通路.Western印迹检测显示,Cbl-b shRNA组EphA2相对表达水平降低(0.369,以对照组表达水平为1计算),GSK3β表达增加(3.524),该结果与蛋白质组学检测结果一致;p-AKT相对表达水平降低(0.453).结论 Cbl-b可能通过多种生物学通路参与黑素瘤发病;EphA2/PI3K/AKT信号通路可能是Cbl-b参与黑素瘤形成的重要机制之一.
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编辑人员丨2023/8/6
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聚焦dyHDL/miRNA210结合体-线粒体串话解析"荡涤痰浊"防治动脉粥样硬化理论
编辑人员丨2023/8/5
中医学认为动脉粥样硬化(atherosclorosis,AS)为本虚标实之证,脾气亏虚为其本,痰浊壅滞为其标.基于"痰浊宜荡涤"理论,观察涤痰汤加味方(健脾化痰、荡涤浊滞)防治AS具有临床意义.近年来,高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)与miRNA结合后调控细胞内信号转导干预AS逐渐成为研究热点,经生物信息学预测软件分析发现,HDL所结合的miRNA-210-3p与铁硫簇装配蛋白(ISCU1/2)可靶向结合调控线粒体能量稳态,因此聚焦dyHDL/miRNA210结合体-线粒体串话为挖掘健脾化痰中药防治心血管疾病有效靶点提供新的研究策略及科学依据.
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编辑人员丨2023/8/5
