目的:基于生物信息学方法筛选肾透明细胞癌关键基因，识别可能的微RNA（miRNA）-mRNA作用轴，探讨相关基因在肾透明细胞癌组织和细胞中的表达。方法:选取基因表达综合（GEO）数据库基因表达谱GSE40435、GSE71302数据集，肾透明细胞癌TCGA-KIRC数据集来自癌症基因组图谱（TCGA）数据库。采用R软件筛选差异表达的mRNA和miRNA，并对mRNA进行功能富集分析。采用STRING数据库和Cytoscape软件进行蛋白质互作分析。采用Oncomir数据库筛选预后相关的差异表达miRNA。采用TargetScan和miRDB靶基因预测工具筛选miRNA可能调控的靶基因。收集2021年6月至12月山西医科大学第一医院收治的34例肾透明细胞癌患者的组织样本及临床资料，并选择正常肾细胞株293T和肾透明细胞癌细胞株786O。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测基因的相对表达量；蛋白质印迹法、免疫组织化学染色法检测目的蛋白的表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证基因间的靶向关系。结果:差异分析筛选得到1 351个差异表达mRNA和50个差异表达miRNA。功能富集分析提示肾透明细胞癌中脂肪酸代谢、异生物质代谢等途径被抑制，细胞凋亡、免疫应答途径被激活。蛋白质互作分析提示肾透明细胞癌中信号转导、蛋白泛素化等途径起到关键作用。筛选结果显示miRNA-224-5p（miR-224-5p）与肾透明细胞癌进展关系最紧密，且在肿瘤组织中高表达，其预后相关靶基因为NEDD4L。肾透明细胞癌组织与癌旁组织的NEDD4L mRNA相对表达量分别为0.138±0.103、1.000±0.026（ t＝46.23， P<0.05）；miR-224-5p相对表达量分别为1.000±0.043、0.129±0.108（ t＝45.28， P<0.05）。不同分级及分期肾透明细胞癌组织NEDD4L mRNA、miR-224-5p的表达差异均有统计学意义（均 P<0.05）。NEDD4L蛋白在肾透明细胞癌中表达降低。293T与786O细胞中NEDD4L基因相对表达量分别为1.000±0.125、0.210±0.044 （ t＝17.52， P<0.05）；miR-224-5p基因相对表达量分别为0.209±0.049、1.000±0.234（ t＝10.609， P<0.05）。转染后的293T细胞样本中，miRNA模拟物组与阴性对照组的NEDD4L mRNA相对表达量分别为0.236±0.062、1.000±0.024，差异有统计学意义（ t＝43.56， P<0.05）。NEDD4L蛋白在miRNA模拟物组中表达降低。双荧光素酶报告基因实验提示NEDD4L是miR-224-5p的直接靶基因。 结论:在肾透明细胞癌中，miR-224-5p靶向调节NEDD4L表达，这一机制可能与肾透明细胞癌的发生、发展有关。

目的:评价c-CBL过表达对神经病理性痛大鼠脊髓星形胶质细胞活化的影响及其与Kindlin-1的关系。方法:清洁级健康雄性SD大鼠18只，10~12周龄，体重250~280 g，采用随机数字表法分为3组( n＝6)：假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)和c-CBL过表达组(c-CBL组)。采用坐骨神经慢性压迫性损伤法制备大鼠神经病理性痛模型。于制备模型前1 d时c-CBL组鞘内注射c-CBL过表达载体10 μl，S组和NP组鞘内注射空载载体10 μl。分别于制备模型前1 d(T 0)、制备模型1、4和7 d(T 1~3)时测定大鼠机械缩足反应阈和热缩足反应阈。T 3时痛阈测定结束后处死大鼠取L 4~6脊髓，采用Western blot法检测脊髓Kindlin-1、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、TNF-α和IL-Iβ的表达。采用免疫共沉淀法检测Kindlin-1与c-CBL共表达情况。 结果:与S组比较，NP组和c-CBL组T 2，3时机械缩足反应阈降低，热缩足反应阈缩短，NP组脊髓Kindlin-1、GFAP、TNF-α和IL-1β表达、c-CBL组脊髓c-CBL表达上调( P<0.05)；与NP组比较，c-CBL组T 2，3时机械缩足反应阈升高，热缩足反应阈延长，c-CBL组背髓Kindlin-1、GFAP、TNF-α和IL-1β表达下调，c-CBL表达上调( P<0.05)。免疫共沉淀结果显示：NP组Kindlin-1与c-CBL存在蛋白交互共表达。与NP组比较，c-CBL组脊髓Kindlin-1与c-CBL共表达增强。 结论:c-CBL过表达可通过下调脊髓Kindlin-1表达，抑制星形胶质细胞活化，进而减轻炎症反应，缓解大鼠神经病理性痛。

泛素化酶DNA损伤特异性结合蛋白2(DDB2)是一种DDB1-CUL4相关因子(DCAF),属于泛素连接酶E3的亚家族.DDB2通过与DCAF相结合,形成泛素连接酶复合体,从而特异性识别靶蛋白底物,使底物泛素化并降解.其通过多种途径影响肿瘤的发生、发展,如DNA损伤修复、细胞周期调控及细胞凋亡、细胞侵袭与转移、细胞早衰、细胞增殖生长、肿瘤干细胞的群体化等.文章就DDB2影响肿瘤发生、发展的机制和对肿瘤治疗及预后判断的关系作一综述.

炎性肠疾病是一种慢性胃肠道功能紊乱的炎症性疾病.泛素化是一类重要的蛋白质翻译后修饰方式.近年来关于泛素化去泛素化系统在炎性肠疾病发生和发展中的作用已成为研究热点.目前蛋白泛素化修饰调控炎性肠疾病过程所需的E3泛素连接酶中,分子生物学研究较为清楚的有环指蛋白183(RNF183)、环指蛋白20(RNF20)、Itch和锌指蛋白A20.其中RNF183可靶向核因子κB抑制蛋白α(IκBα)泛素化降解促进NF-κB活化;RNF20促进组蛋白H2 B单泛素化从而下调相关炎症因子的转录;Itch促进维甲酸核孤儿受体γt泛素化降解抑制IL-17介导的肠炎;A20以其特有的泛素化和去泛素化双重活性影响炎性肠疾病的发展.本文综述了以上分子在炎性肠疾病发生、发展和转归中的作用及调控机制.

目的 评价Iduna蛋白过表达对氧糖剥夺新生大鼠海马神经元损伤时多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)∕凋亡诱导因子(AIF)通路的影响.方法 出生24 h健康SD大鼠,处死分离和培养海马神经元.采用随机数字表法分为4组(n=40):对照组(C组)、氧糖剥夺组(O组)、阴性对照慢病毒组(NL组)和Iduna蛋白过表达组(IO组).采用无糖培养基+低氧环境的培养方法制备海马神经元氧糖剥夺模型,NL组模型制备前48 h时加入阴性对照的慢病毒,IO组模型制备前48 h时加入成功构建的Iduna过表达慢病毒,C组神经元正常培养,不处理,培养24 h.采用MTT法检测神经元存活率,比色法检测神经元LDH漏出率,彗星实验法检测神经元彗尾DNA含量,Western blot法检测神经元总蛋白PARP-1、细胞色素c(Cyt c)和细胞核蛋白凋亡诱导因子(AIF)的表达.结果 与C组比较,余3组神经元存活率降低,LDH漏出率和彗尾DNA含量升高,PARP-1、AIF和Cyt c表达上调(P<0.05);与O组比较,IO组神经元存活率升高,LDH漏出率和彗尾DNA含量降低,PARP-1、AIF和Cyt c表达下调(P<0.05),NL组差异无统计学意义(P>0.05);与NL组比较,IO组神经元存活率升高,LDH漏出率和彗尾DNA含量降低,PARP-1、AIF和Cyt c表达下调(P<0.05).结论 Iduna蛋白过表达通过抑制PARP-1∕AIF通路减轻氧糖剥夺新生大鼠海马神经元损伤.

目的:探讨胰腺癌中E3泛素连接酶亚单位Ring1B、组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)及细胞周期调节因子P16表达与及其与患者预后的关系.方法:用免疫组化法检测85例胰腺癌患者手术标本(癌组织与癌旁组织)中LSD1、Ring1B与P16蛋白的表达及分布,并选取其中6对癌组织和癌旁组织,用qRT-PCR和Western blot法检测mRNA和蛋白表达;分析三者在胰腺癌组织中表达的相关性,及其与患者生存的关系.结果:免疫组化结果显示,Ring1B与LSD1蛋白主要表达于细胞浆,P16主要表达于胞核;Ring1B与LSD1在胰腺癌组织中表达明显高于癌旁组织,而P16的表达明显低于癌旁组织(均P＜0.05);在胰腺癌组织中Ring1B、LSD1的表达与P16的表达均呈负相关(r=-476;r=-0.673,均P＜0.05).qRT-PCR结果显示,胰腺癌组织中Ring 1B和LSD1的mRNA的平均相对表达量均明显高于癌旁组织(8.908vs.1.947;7.126 vs.1.940,均P＜0.05),P16的mRNA的平均相对表达量明显低于癌旁组织(1.269vs.5.237,P＜0.05);Western blot结果显示,三者的蛋白表达趋势与mRNA表达一致.生存分析显不,Ring1B、LSD1高表达患者生存率均分别低于其低表达患者(x 2=8.958,P=0.012;x 2=8.856,P=0.010),而P16高表达患者生存率高于其低表达患者(x 2=7.867,P=0.024).结论:胰腺癌组织中Ring 1B与LSD1表达升高,P16表达降低;Ring1B、LSD1可能分别通过组蛋白泛素化和去甲基化调控P16的表达,从而影响胰腺癌预后.

目的 分析shRNA介导黑素瘤A375细胞Cbl-b基因沉默前后差异表达蛋白.方法 使用非标记定量蛋白质组学技术鉴定分别用Cbl-b shRNA慢病毒载体(Cbl-b shRNA组)和对照慢病毒载体(对照组)转染的A375细胞的差异表达蛋白.采用生物信息学方法对筛选的差异蛋白进行基因本体富集及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.Western印迹验证差异蛋白(EphA2、GSK3β)表达和Cbl-b shRNA沉默后两组p-AKT表达.采用SPSS 23.0软件进行统计分析,两组间蛋白丰度比较采用两样本t检验.基因本体及KEGG富集分析结果采用Fisher精确概率法检验.结果 共鉴定3 449种蛋白,筛选出Cbl-b shRNA组和对照组差异表达蛋白74个.与对照组相比,Cbl-b shRNA组52个蛋白表达上调,22个下调.差异蛋白基因本体富集分析发现前5位显著富集生物学过程为整合素介导细胞黏附、单一生物代谢过程、整合素介导细胞黏附调节、蛋白质靶向线粒体调节、核酸代谢过程;前5位显著富集分子功能为DNA结合、2,2铁硫簇合物结合、信号受体活性、钙黏蛋白结合、细胞黏附分子结合;前5位显著富集的细胞组分为核小体、DNA包装复合体、光感器连接纤维、DNA-蛋白质复合体、胞外区部分.京都基因与基因组百科全书通路富集分析发现,前5位与黑素瘤相关的显著富集通路包括叶酸生物合成、轴突导向、细胞外基质受体相互作用、黏合连接、Wnt信号通路.Western印迹检测显示,Cbl-b shRNA组EphA2相对表达水平降低(0.369,以对照组表达水平为1计算),GSK3β表达增加(3.524),该结果与蛋白质组学检测结果一致;p-AKT相对表达水平降低(0.453).结论 Cbl-b可能通过多种生物学通路参与黑素瘤发病;EphA2/PI3K/AKT信号通路可能是Cbl-b参与黑素瘤形成的重要机制之一.

目的 研究晚期非小细胞肺癌(NSCLC)老年患者外周血中泛素连接酶(FBW7)和髓样细胞白血病基因-1(MCL-1)的表达水平与使用埃克替尼预后的相关性. 方法 选择76例60岁以上的表皮生长因子受体(EGFR)突变敏感并且接受埃克替尼靶向治疗的晚期NSCLC老年患者,采用实时荧光定量PCR(RT-QPCR)检测每位患者外周血中FBW7和MCL-1基因表达水平,对两者的表达与临床病理因素、患者的总生存期(OS)、无进展生存期(PFS)相关性进行统计分析. 结果 FBW7和MCL-1的表达呈负相关(r=-0.37,P＜0.001).外周血中FBW7高表达、MCL-1低表达的患者可以获得更高的有效率(P＜0.001),更长的总生存期和无进展生存期.Cox回归分析发现外周血中FBW7和MCL-1的表达水平是影响OS和PFS的独立因素. 结论 FBW7高表达、MCl-1低表达的NSCLC患者更能从埃克替尼靶向治疗中获益,两者可作为埃克替尼疗效预判的指标,为临床埃克替尼应用提供支持和参考.

目的 研究泛素连接酶FBW7在影响胶质瘤对替莫唑胺敏感性中的作用,并初步探讨其机制.方法 构建FBW7过表达慢病毒,设对照组、替莫唑胺组、FBW7过表达组、FBW7过表达+替莫唑胺组,不同干预方法处理细胞株U251后,分别于36、72 h用相差显微镜及四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法分析各组细胞抑制率的差异;流式细胞术检测各组细胞周期和凋亡率.结果 两个时间点各组U251细胞存活数量均较对照组增加,与对照组相比,36 h替莫唑胺组、FBW7过表达组、FBW7过表达+替莫唑胺组细胞抑制率分别为(17.6±0.8)％、(10.4±0.6)％、(18.6±0.6)％(F=67.02,P<0.01),72 h的抑制率分别为(25.1±0.4)％、(16.7±0.7)％、(29.0±0.9)％(F=74.61,P<0.01),72 h FBW7过表达联合替莫唑胺组较替莫唑胺组抑制率更高(P<0.01);72 h后3个治疗组的细胞周期G2/M阻滞比例和细胞凋亡率较对照组均增高(F=41.63,P<0.001;F=42.30,P<0.01),并且FBW7过表达+替莫唑胺组中两者的增高程度较替莫唑胺组更显著(P<0.05,P<0.01).结论 FBW7增加胶质瘤细胞对替莫唑胺治疗的敏感性,该增敏作用与FBW7诱导的细胞G2/M期阻滞和凋亡率增加有关.

由于卵母细胞中转录水平的改变不显著,因此翻译后修饰如泛素-蛋白酶系统(UPS)可能起到重要的调控作用.其核心成员F-BOX在UPS中负责特异性识别底物,以帮助泛素系统泛素化并降解目的蛋白.F-BOX蛋白广泛存在于生殖细胞及胚胎中,但对其底物功能的研究却十分缺乏.有研究报道,F-BOX蛋白通过对上皮细胞间质转化(EMT)、细胞信号转导及细胞增殖与凋亡中的关键蛋白进行泛素化,参与到卵母细胞的发育和成熟、卵母细胞-胚胎转化(OET)及早期胚胎发育的进程中,其还可以调控体内雌孕激素的水平.本文通过介绍F-BOX在UPS中的作用,综述其在卵母细胞、OET和胚胎发生发展中的生物学作用,及其对雌孕激素水平的调控,以期F-BOX可以作为潜在的干预靶点,为人类生殖健康和计划生育的研究提供新的思路.