目的:分析长链非编码核糖核酸(LncRNA)H19靶向调控miR-19b-3p/性别决定区Y框转录因子9(SOX9)通路对脂肪间充质干细胞(ADMSC)向成骨细胞分化的影响.方法:体外培养人ADMSC细胞并鉴定,将ADMSC细胞分为对照组(常规培养)、H19组(转染LncRNA H19慢病毒过表达载体)、LncRNA-NC组(转染慢病毒空载体)、miR-19b-3p组(共转染LncRNA H19慢病毒过表达载体和miR-19b-3p模拟物慢病毒载体)、miR-NC组(共转染LncRNA H19慢病毒过表达载体和 miR-NC慢病毒载体),检测各组LncRNA H19、miR-19b-3p、SOX9及含锌指的成骨细胞特异性转录因子(Osx)、骨钙素(OCN)和RUN相关转录因子2(RUNX2)表达.观察各组ALP染色和茜素红染色情况,比较细胞增殖活力、ALP活性,分析各组SOX9、BMP-2、OPN 蛋白表达,验证LncRNA H19和 miR-19b-3p的靶向关系.结果:与对照组、LncRNA-NC 组比,H19 组 LncRNA H19 和 SOX9、Osx、OCN、RUNX2 的 mR-NA表达及SOX9、BMP-2、OPN蛋白表达、ALP活性、矿化结节形成量增加,miR-19b-3p表达降低(P＜0.05),与 H19 组、miR-NC 组比,miR-19b-3p 组 LncRNA H19 和 SOX9、Osx、OCN、RUNX2 的 mRNA 表达及SOX9、BMP-2、OPN蛋白表达、ALP活性、矿化结节形成量降低,miR-19b-3p表达增加(P＜0.05).各组细胞24h、48h、72h的吸光度比较,差异无统计学意义(P＞0.05).LncRNA H19和 miR-19b-3p间存在靶向关系.结论:LncRNA H19能负向调控miR-19b-3p,上调SOX9,有助于人ADMSC细胞向成骨细胞分化.

目的:探讨Lnc-CYS1-1在脑胶质瘤恶性进展中的作用及其机制。方法:2020年10月至2021年2月浙江大学医学院附属邵逸夫医院神经外科收集11例脑胶质瘤患者的手术标本(胶质瘤组织和瘤旁组织)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Lnc-CYS1-1在脑胶质瘤组织和细胞株(U251、A172、LN229、SNB19和U87)中的表达及在细胞核与细胞质中的分布。在U251细胞株中应用RNA荧光原位杂交确定Lnc-CYS1-1的空间表达信息。在U251和SNB19细胞株中，转染Lnc-CYS1-1 siRNA作为Lnc-CYS1-1 siRNA组，转染NC siRNA作为对照组；分别应用CCK-8增殖实验、流式细胞术和Transwell实验检测两组胶质瘤细胞的增殖活性、细胞周期、凋亡及侵袭力。采用RNA沉降实验及蛋白质谱分析鉴定筛选与Lnc-CYS1-1结合的差异蛋白，并由蛋白质免疫印迹法(WB)和免疫组织化学染色验证。采用RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验验证Lnc-CYS1-1与原肌球蛋白3(TPM3)的相互作用。分析中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)数据库及临床标本中世界卫生组织(WHO)不同级别脑胶质瘤组织中TPM3的表达情况；对不同TPM3表达组脑胶质瘤患者进行生存分析。结果:在5例胶质瘤组织中，Lnc-CYS1-1的表达水平较相应瘤旁组织中升高( P<0.001)。5种胶质瘤细胞株中Lnc-CYS1-1的表达均较HEB正常胶质细胞上调( P<0.001)。U251细胞中，Lnc-CYS1-1主要分布于细胞质(70%)，细胞核中比例约为30%。U251和SNB19细胞中，qRT-PCR结果显示，Lnc-CYS1-1 siRNA组Lnc-CYS1-1的相对表达水平均较对照组下降(均 P<0.05)；CCK-8增殖实验结果显示，Lnc-CYS1-1 siRNA组的细胞存活率在48 h和72 h均较对照组下降(均 P<0.05)；流式细胞术检测结果显示，Lnc-CYS1-1 siRNA组的G 0/G 1比值和胶质瘤细胞凋亡率均较对照组升高(均 P<0.05)；Transwell实验结果显示，Lnc-CYS1-1 siRNA组通过基质凝胶侵袭的细胞数量均比对照组减少(均 P<0.05)。RNA沉降实验及蛋白质谱鉴定的结果显示，TPM3可能为Lnc-CYS1-1的作用靶点。RIP实验结果显示，与IgG组比较，TPM3免疫沉淀样品组的Lnc-CYS1-1表达水平升高( P<0.001)，Lnc-CYS1-1与TPM3存在相互作用关系。CGGA数据库分析及临床标本免疫组织化学染色验证结果显示，TPM3的表达水平随WHO级别升高而升高；TPM3高表达组(110例)较低表达组(110例)患者的中位生存期短( P<0.001)。 结论:Lnc-CYS1-1在脑胶质瘤组织及细胞中表达上调，敲低Lnc-CYS1-1可明显抑制胶质瘤的增殖、侵袭，诱导细胞凋亡。Lnc-CYS1-1可能通过TPM3在胶质瘤恶性进展中发挥作用。

目的 探究外周血长链非编码核糖核酸(long non-coding ribonucleic acid,lncRNA)H19和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)2水平与脓毒症患者感染程度及预后的相关性.方法 选择邯郸市中心医院自 2020年 2月至 2022年 5月收治的 142例脓毒症患者为研究对象,根据疾病感染程度分为轻度组(61例)、中度组(45例)、休克组(36例),并根据随访结局将所有脓毒症患者分为死亡组(28例)和存活组(114例).检测所有脓毒症患者外周血lncRNA H19、HDAC2水平,并采用序贯器官衰竭评分(sequential organ failure assessment,SOFA)、急性生理与慢性健康评分Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluationⅡ,APACHEⅡ)评估患者预后恢复情况.Pearson分析法分析外周血lncRNA H19、HDAC2水平与SOFA评分、APACHEⅡ评分的相关性;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线预测外周血lncRNA H19、HDAC2水平对脓毒症预后的诊断价值.结果 外周血lncRNA H19水平:轻度组为(1.07±0.25),中度组为(2.67±0.69),休克组为(4.85±1.36);SOFA评分:轻度组为(4.63±0.91)分,中度组为(7.43±1.32)分,休克组为(9.05±1.84)分;APACHEⅡ评分:轻度组为(11.59±2.06)分,中度组为(15.74±3.12)分,休克组为(19.14±3.68)分;HDAC2水平:轻度组为(2.96±0.71)ng/L,中度组为(1.79±0.43)ng/L,休克组为(1.12±0.26)ng/L;存活组外周血 lncRNA H19水平(1.92±0.47)低于死亡组(5.05±1.44)(P＜0.05),HDAC2水平(2.41±0.34)ng/L高于死亡组(0.95±0.16)ng/L(P＜0.05).外周血lncRNA H19水平与SOFA评分、APACHEⅡ评分呈正相关(P＜0.05),外周血HDAC2水平与SOFA评分、APACHEⅡ评分呈负相关(P＜0.05).ROC结果显示,外周血lncRNA H19水平单独诊断脓毒症患者预后的曲线下面积(area under the curve,AUC)为 0.869,灵敏度、特异度分别为 69.23%、91.23%;外周血HDAC2水平单独诊断脓毒症患者预后的AUC为 0.861,灵敏度、特异度分别为 73.08%、86.84%;二者联合诊断脓毒症预后的AUC(0.942)显著大于lncRNA H19单独诊断的AUC(Z=2.453,P=0.014)和HDAC2单独诊断的AUC(Z=2.066,P=0.039).结论 外周血lncRNA H19、HDAC2水平与脓毒症患者感染程度密切相关,且对患者预后具有较高的预测价值.

目的 探讨胃癌组织长链非编码RNA H19(lncRNA H19)、微小核糖核酸141(miR-141)表达变化及其与患者临床病理特征和预后的关系.方法 选择胃癌患者81例,取手术切除的胃癌组织及其配对的癌旁正常组织,采用RT-qPCR法检测lncRNA H19、miR-141表达.比较胃癌组织与癌旁正常组织lncRNA H19、miR-141表达变化,分析胃癌组织lncRNA H19、miR-141表达与患者临床病理特征的关系.采用Spearman相关分析法分析胃癌组织lncRNA H19表达与miR-141表达的关系.以胃癌组织lncRNA H19、miR-141相对表达量的均数为界,将患者分为lncRNA H19、miR-141低表达者与高表达者,采用Kaplan-Meier法分析不同lncRNA H19、miR-141表达与患者术后生存时间和术后5年生存率的关系.结果 胃癌组织lncRNA H19相对表达量明显高于癌旁正常组织,miR-141相对表达量明显低于癌旁正常组织(P均<0.05).胃癌组织lncRNA H19相对表达量与肿瘤直径、浸润深度、TNM分期、远处转移有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、组织分化程度无关(P均>0.05);胃癌组织miR-141相对表达量与肿瘤直径、组织分化程度、TNM分期有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、浸润深度、远处转移无关(P均>0.05).Spearman相关分析显示,胃癌组织lncRNA H19相对表达量与miR-141相对表达量呈负相关关系(r=-0.954,P<0.05).81例胃癌患者中,lncRNA H19低表达者40例、高表达者41例,miR-141低表达者39例、高表达者42例.Kaplan-Meier生存分析显示,lncRNA H19高表达者术后生存时间和术后5年生存率均明显低于ln-cRNA H19低表达者,miR-141低表达者术后生存时间和术后5年生存率均明显低于miR-141高表达者(P均<0.05).结论 胃癌组织lncRNA H19高表达、miR-141低表达,二者表达呈负相关关系;胃癌组织lncRNA H19、miR-141表达与肿瘤的发生、发展有关,有可能成为胃癌诊断和预后判断的潜在生物标志物.

长链非编码RNA(long noncoding RNAs,lncRNAs)是一种广泛分布在人类基因组中没有蛋白编码功能的核糖核酸(ribonucleic acid,RNA),lncRNAs的改变能够使基因出现异常表达进而导致各种疾病状态和生物功能紊乱.最近研究显示lncRNA H19可能在转录前后通过产生小分子RNA(microRNA,miRNA)或者争夺有限的miRNA结合位点等方式发挥功能,进而调控骨关节炎病理变化,但是具体调控机制尚不明确.LncRNA H19在进化过程中具有高度保守性,lncRNA H19可能作为一种骨关节炎潜在的分子标记物并且成为新的治疗靶点.本文总结近年来有关lncRNA H19与骨关节炎相关的文献,阐述目前已知和可能存在的信号通路,为lncRNA H19调控骨关节炎的机制研究以及用于诊断和防治骨关节炎的潜在可能提供理论基础.

目的:探讨长链非编码核糖核酸H19(IncRNA)对人主动脉平滑肌细胞(HA-VSMCs)自噬及表型转化的调控作用.方法:药物诱导HA-VSMCs发生表型转化,检测细胞内成骨相关蛋白RUNX2及平滑肌标志物α-SMA的表达水平,通过茜素红s染色及碱性磷酸酶ALP含量测定实验检测钙化水平,通过检测泛素化连接蛋白LC-3、P62观察自噬水平变化.结果:与正常组相比,钙化诱导HA-VSMCs组lncRNA H19表达量明显升高,成骨相关蛋白RUNX2表达水平增加,平滑肌标志物α-SMA表达下调,自噬被抑制.敲低lncRNA H19后,平滑肌细胞表型转化减缓,钙化程度减弱,自噬水平有所回升.结论:lncRNA H19可促进HA-VSMCs的表型转化及动脉钙化的发生,其机制可能与抑制HA-VSMCs的保护性自噬有关.

目的 探讨外泌体长链非编码RNA H19(lncRNA H19)调控人肺腺癌细胞迁移和侵袭作用及机制.方法 收集确诊肺腺癌并经影像学诊断已发生远处转移患者(转移组)或无远处转移患者(非转移组)以及正常人群(正常对照组)各30例外周血标本,分离单核细胞获得血浆上清液分离外泌体,同时取培养人肺腺癌细胞系A549细胞时收集的培养上清液分离外泌体,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测并比较组间外泌体lncRNA H19 mRNA表达差异.并采用慢病毒介导的lncRNA H19特异性小干扰RNA(shRNA)构建稳定敲低lncRNA H19的人肺腺癌A549细胞模型,荧光素酶验证lncRNA H19通过吸附结合微RNA-7(miR-7),划痕实验、Transwell实验检测稳定敲低lncRNA H19对A549细胞迁移、侵袭能力的影响,蛋白免疫印迹法检测稳定敲低lncRNA H19对miR-7及其下游的信号通路蛋白Kruppel样因子4(KLF4)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平的影响.结果 外泌体被成功分离.与非转移组肺腺癌患者相比,转移组肺腺癌患者外周血外泌体lncRNA H19 mRNA表达增加(P<0.01).A549细胞中,与对照细胞相比,稳定敲低lncRNA H19细胞的外泌体lncRNA H19 mRNA表达减少(P<0.01).细胞划痕实验和Transwell实验显示,敲低lncRNA H19的A549细胞迁移和侵袭的能力下降.野生型lncRNA H19与miRNA-7共转染后A549细胞荧光度值下降(P<0.01),突变型lncRNA H19与miRNA共转染后A549细胞荧光度值未见明显变化(P>0.05).A549细胞中,稳定敲低lncRNA H19后KLF4和VEGF蛋白表达水平均有所下调(P均<0.05).结论 外泌体lncRNA H19可能在肺腺癌细胞迁移和侵袭过程中发挥作用,且这种作用可能与竞争性结合miR-7及KLF4/VEGF信号通路有关.

目的 探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿血浆长链非编码RNA(LncRNA)核糖核酸酶P RNA成分H1(RPPH1)表达水平,分析其与ALL患儿免疫表型的相关性.方法 收集该院2017年12月-2019年12月89例ALL患儿为研究对象(观察组),同时期90例健康体检儿童作为对照(对照组).实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血浆中LncRNA RPPH1水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;流式细胞术(FCM)检测骨髓中免疫表型.分析血浆中LncRNA RPPH1、免疫表型与TNF-α的关系及LncRNA RPPH1水平与免疫表型关系.结果 与健康对照组相比[(1.00±0.25),(0.96±0.23)ng/ml],观察组血浆中 LncRNA RPPH1(2.15±0.69)、TNF-α[(1.83±0.45)ng/ml]水平升高(P＜0.05).ALL患儿危险度结果:低危型27例、中危型18例及高危型44例.与低危型相比,中危型血浆中TNF-α、高危型血浆中 LncRNARPPH1、TNF-α 水平,骨髓中 CD34、HLA-DR、CD5及 CD19阳性率升高(P＜0.05),CD79a 阳性率降低(P＜0.05).与中危型相比,高危型患儿血浆中LncRNA RPPH1、TNF-α水平,HLA-DR阳性率升高(P＜0.05).ALL患儿血浆中LncRNA RPPH1、骨髓中 CD34、HLA-DR、CD19及 CD79a 与血浆中 TNF-α,LncRNA RPPH1 与 HLA-DR、CD19关系密切(P＜0.05).结论 ALL患儿血浆中LncRNA RPPH1高表达,与免疫表型HLA-DR、CD19关系密切,且与临床危险度、炎症细胞因子关系密切,临床上应该受到重视.

目的:探讨LncRNA H19对小鼠主动脉平滑肌细胞(MOVAS)钙化过程中表型转化的调控机制.方法:培养MOVAS细胞系,将细胞分为钙化组与对照组,在钙化组细胞培养基中加入β-甘油磷酸盐(β-GP)14d诱导细胞钙化模型.通过RT-PCR和Western印迹法检测比较两组成骨相关转录因子osterix(OSX)及平滑肌标志物α-SMA的表达水平,检测细胞发生钙化表型转化的程度,通过茜素红染色及碱性磷酸酶(ALP)活性测定检测钙化水平,通过检测wnt1和β-catenin表达水平观察Wnt信号通路的变化.后续通过si-RNA技术对H19表达进行敲减,将细胞分为siNC组、siNC+β-GP组、siH19+β-GP组,通过上述方法比较三组中OSX、α-SMA、wnt1和β-catenin表达差异及钙化情况,进一步研究H19与动脉钙化的相关性及发生机制.结果:与对照组相比,钙化组LncRNA H19表达量明显升高,OSX表达增加,α-SMA表达下调,同时Wnt信号通路的关键蛋白wnt1和β-catenin表达增高(P＜0.05).敲减LncRNA H19后,OSX表达水平较普通钙化组降低,α-SMA表达有所回升,钙化程度减低,Wnt信号通路关键蛋白表达降低(P＜0.05).结论:LncRNA H19可促进MOVAS的钙化表型转化及动脉钙化的发生,其机制可能与激活Wnt/β-catenin/OSX轴有关.