目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)H19靶向微小RNA(miRNA，miR)-675/EHZ2对结肠癌细胞增殖的影响。方法:收集2013年7月到2018年7月郑州大学附属肿瘤医院结肠癌组织及其对应的癌旁组织各150例，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析LINC00052和miR-330-3p表达水平。待细胞完全贴壁后，采用lncRNAH19 shRNA、lncRNA control shRNA、miRNA Control和miR-675慢病毒感染SW480细胞，感染12 h更换含嘌呤霉素(1 mg/L)的杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养基处理24 h，存活的细胞即为稳定细胞株，分别命名为Lnc Control组、lncRNAH19 KD组、miR-Control组和miR-675组。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析lncRNAH19和miR-675关系以及miR-675的靶基因。在结肠癌细胞株SW480建立lncRNAH19沉默细胞株和miR-765过表达细胞株，采用5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法和细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定不同处理结肠癌细胞的增殖能力。体内异体移植瘤实验分析不同处理对成瘤的影响。采用 t检验分析两组数据的统计学意义。 结果:与癌旁组织lncRNAH19和miR-675[(1.12±0.18)、(1.09±0.17)]比较，结肠癌组织中lncRNAH19表达水平(3.49±0.27)显著增加，miR-675表达水平(0.32±0.11)显著下调，差异均有统计学意义( t＝3.109、2.981， P<0.05)。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞EdU阳性率[(89.44±10.25)%、(85.41±12.33)%]比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞EdU阳性率[(30.14±6.89)%、(41.72±8.32)%]显著下调，差异有统计学意义( t＝2.981、2.981， P<0.05)。CCK-8实验显示，与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞增殖能力比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞能力显著下调，差异有统计学意义( F＝2.441、2.592， P<0.05)。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞体内增殖能力比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞能力显著下调，差异有统计学意义( F＝1.980、2.019， P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶分析显示lncRNAH19能与miR-675互补结合，EHZ2是miR-675的靶蛋白。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞EHZ2蛋白表达水平[(1.19±0.13)、(1.04±0.14)]比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞EHZ2蛋白表达水平[(0.32±0.13)、(0.47±0.13)]显著下调，差异有统计学意义( t＝3.109、3.011， P<0.05)。 结论:lncRNAH19通过靶向miR-675/EHZ2调控结肠癌细胞的增殖。

目的 研究长链非编码RNAH19(lncRNAH19)对高脂应激作用下巨噬细胞脂质蓄积的作用及其机制.方法 采用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育人THP-1细胞来源的巨噬细胞,用H19小干扰RNA(H19 siRNA)处理观察其对脂质蓄积的影响.THP-1细胞分为对照组(常规培养)、ox-LDL组、siRNA阴性对照(NC siRNA)联合ox-LDL处理组、H19 siRNA联合ox-LDL处理组.油红O染色测定细胞中的脂质积聚,酶法测定胆固醇浓度;ATP试剂盒检测细胞ATP含量;比色法检测细胞氧化应激指标、采用ELISA检测细胞上清液中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平.Western blot法检测ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活子1α(PGC-1α)、核因子κB p-p65(NF-κBp-p65)的蛋白表达.结果 敲低H19显著抑制细胞内脂质蓄积,降低总胆固醇(TC)和胆固醇酯(CE)含量,CE/TC比值显著降低.敲低H19显著减轻高脂应激导致的细胞损伤,包括ATP含量增加,氧化应激水平降低并减少MCP-1的水平.敲低H19上调THP-1细胞中ABCA1、PPARα和PGC-1α的蛋白表达,下调NF-κB信号通路.结论 敲低H19通过上调THP-1细胞PGC-1α表达、下调NF-κB信号通路促进胆固醇逆转运、抑制炎症反应进而减缓脂质蓄积.

目的 探究长链非编码RNA H19(LncRNA H19,简称H19)对骨肉瘤顺铂化疗敏感性的影响及相关机制.方法 体外利用间歇浓度梯度递增法在人骨肉瘤细胞系U2OS中构建顺铂抵抗细胞系U2OS-CR,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测H19表达水平变化.转染过表达及干扰H19的质粒,构建U2OS过表达H19(U2OS oeH19)细胞系、U2OS干扰H19(U2OS shH19)细胞系及 U2OS-CR干扰 H19(U2OS-CR shH19)细胞系,MTT检测细胞系顺铂半抑制浓度(IC50值)的变化,Western印迹及RT-PCR技术检测U2OS oeH19及U2OS shH19中上皮间充质转化(EMT)相关分子表达的变化.结果 U2OS-CR细胞系IC50值显著高于亲本细胞U2OS(P<0.05),U2OS-CR细胞系H19表达水平也显著上调(P<0.05).U2OS oeH19细胞系顺铂IC50值相比对照细胞出现显著增高(P<0.05),U2OS shH19及 U2OS-CR shH19细胞系顺铂 IC50值相比对照细胞显著降低(P<0.05).U2OS oeH19细胞相比对照细胞E-cadherin表达下调,N-cadherin、Vimentin表达上调,U2OS shH19细胞E-cadherin表达上调,N-cadherin、Vim-entin表达下调.结论 H19可通过促进骨肉瘤细胞EMT进程诱导其顺铂耐药,针对H19的靶向治疗可能提高骨肉瘤的化疗疗效.

目的 探讨长链非编码RNA H19对胃癌细胞侵袭和迁移的影响,并初步探讨其作用机制.方法 将处于对数生长期的 MKN28细胞分为 MKN28/H19组、MKN28/H19mut 组和空白对照1组,MKN28/H19组、MKN28/H19mut组采用脂质体法转染全长H19 cDNA和突变H19 cDNA(不含第一个内含子),空白对照1组不转染.将对数生长期的BGC-823细胞分为BGC-823/siH19组、BGC-823/NC组和空白对照2组,BGC-823/siH19组、BGC-823/NC组同法分别转染H19 siRNA、H19 siRNA无关序列,空白对照2组不转染.各组均转染12 h.采用实时荧光定量PCR法检测各组H19相对表达量;采用Tranwell细胞侵袭试验观察各组细胞侵袭能力(以下室OD570值表示);采用Tranwell细胞迁移试验观察各组细胞迁移能力(以下室OD570值表示);采用Western blotting法检测各组H19共结合蛋白CPT1C相对表达量.结果 转染12 h后MKN28/H19组H19相对表达量、侵袭能力、迁移能力、CPT1C相对表达量均高于MKN28/H19mut组、空白对照1组(P均<0.05),MKN28/H19mut组上述指标与空白对照1组相比,P均>0.05.转染12 h后BGC-823/siH19组H19相对表达量、侵袭能力、迁移能力、CPT1C相对表达量均低于BGC-823/NC组、空白对照2组(P均<0.05),BGC-823/NC组上述指标与空白对照2组相比,P均>0.05.结论 上调胃癌细胞H19表达可以提高胃癌细胞侵袭和迁移能力,下调胃癌细胞H19表达可以抑制胃癌细胞侵袭和迁移能力.H19可能是通过调节CPT1C蛋白表达调节胃癌细胞侵袭和迁移能力.

作为最早被鉴定的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)之一,H19在动物机体内发挥着广泛的作用,不仅可以作为肿瘤抑制因子和致癌基因参与疾病的发生过程,还参与对哺乳动物胚胎各组织生长发育的调控.其中,H19对哺乳动物肌肉组织(包括骨骼肌和心肌)发育的调控受到广泛关注.目前研究发现,H19可通过顺式调控Igf2促进骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells,SMSCs)的成肌分化和肌肉的生成;H19也可反式作用于靶标基因参与肌肉生长发育过程,如作为“分子海绵”结合let-7、miR-106、miR-29等,影响肌肉细胞中葡萄糖的摄取、心肌细胞增殖和肌腱修复等过程,或作为染色质修饰因子结合MBD1蛋白促进胚胎发育和肌肉再生.本文综述了H19对哺乳动物肌肉生长发育调控的研究进展,以期为进一步阐明肌肉生长发育的分子调控机制提供参考.

目的 约20％人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)阳性乳腺癌患者可针对性的采用其靶向药物赫赛汀(trastuzumab,TZB)治疗,但耐药性的产生严重影响了TZB的疗效,本研究探讨长链非编码RNA H19(H19)对人乳腺癌细胞BT-474 TZB抵抗的影响及可能的相关机制.方法收集德州市第二人民医院2016-04-01-2017-03-31收治的乳腺癌患者肿瘤组织及相应癌旁组织(距癌组织>5 cm)各37例,荧光定量PCR(qPCR)技术检测组织H19及mRNA表达水平,并分析肿瘤组织H19及HER2表达的相关性.间歇浓度梯度诱导法构建BT-474 TZB抵抗细胞系(BT-474 TR),并利用慢病毒转染介导的H19小干扰RNA(siRNA)载体在BT-474 TR细胞中构建稳定干扰H19表达的细胞系及相应的空白对照细胞系(BT-474 TR-siH19及BT-474 TR-对照组),CCK-8法检测各组细胞TZB半抑制浓度(IC50)值,qPCR检测细胞H19及HER2 mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测细胞HER2及上皮间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关分子蛋白表达水平.结果乳腺癌组织中H19表达量为0.192±0.014,显著高于癌旁组织0.082±0.009,t=40.202,P<0.001;乳腺癌组织中HER2表达量为0.156±0.013,显著高于癌旁组织0.058±0.009,P<0.001,且H19与HER2的表达存呈正相关,r=0.483,P<0.05.BT-474 TR细胞、BT-474亲本细胞、BT-474 TR-siH19细胞和TZB BT-474 TR-对照细胞4组的TZB IC50测定值分别为(142.3±23.5)、(152.9±25.2)、(27.7±3.6)和(73.2±12.9)μg/mL,差异有统计学意义,F=18.15,P=0.0006;BT-474 TR与BT-474、BT-474 TR-siH19与BT-474 TR-对照组间差异有统计学意义,均P<0.05.BT-474 TR细胞H19表达水平为0.239±0.031,显著高于BT-474亲本细胞表达水平0.106±0.009,t=7.136,P<0.001;BT-474 TR细胞HER2 mRNA表达水平为0.127±0.031,显著低于BT-474亲本细胞表达水平0.309±0.035,t=6.742,P<0.001.BT-474 TR-siH19细胞H19表达水平为0.073±0.007,显著低于BT-474 TR-对照组细胞0.226±0.025,t=10.207,P<0.001;BT-474 TR-siH19细胞HER2 mRNA表达水平为0.104±0.017,也显著低于BT-474 TR-对照组细胞0.162±0.028,t=3.069,P<0.05.BT-474 TR细胞HER2蛋白表达水平为0.263±0.037,显著低于BT-474细胞0.681±0.059,t=10.395,P<0.001;BT-474 TR细胞E-cadherin蛋白表达水平为0.162±0.025,显著低于BT-474细胞0.633±0.074,t=10.447,P<0.001;BT-474 TR细胞Snail蛋白表达水平为0.207±0.083,显著高于BT-474细胞0.064±0.011,t=2.958,P=0.021;BT-474 TR细胞Vimentin蛋白表达水平为0.168±0.020,显著高于BT-474细胞0.114±0.012,t=4.011,P=0.008.BT-474 TR-siH19细胞HER2蛋白表达水平为0.082±0.007,显著低于BT-474 TR-对照组细胞0.404±0.028,t=19.324,P<0.001;BT-474 TR-siH19细胞Snail蛋白表达水平为0.078±0.003,显著低于BT-474 TR-对照组细胞0.258±0.021,t=14.697,P<0.001;BT-474 TR-siH19细胞Vimentin蛋白表达水平为0.085±0.010,显著低于BT-474 TR-对照组细胞0.141±0.025,t=3.602,P=0.011;而BT-474 TR-siH19细胞E-cadherin蛋白表达水平为0.525±0.039,显著高于BT-474 TR-对照组细胞0.194±0.034,t=11.081,P<0.001.结论H19在乳腺癌组织中高表达,且与HER2表达呈正相关,体外干扰H19可下调乳腺癌细胞HER2的表达,并可通过抑制EMT进程部分逆转乳腺癌细胞的TZB抵抗.

目的:检测长链非编码 RNA(lncRNA)H19(lncRNA H19)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中的表达水平并初步探讨其临床意义.方法:入选68例NSCLC患者和68例健康体检者,利用实时定量PCR检测血清中H19的表达水平,分析NSCLC患者血清中H19的水平与病理指标的关系.结果:在NSCLC患者血清中lncRNA H19表达水平明显高于正常对照组,两组之间的差异具有统计学意义(P<0.01).NSCLC患者血清中lncRNA H19的表达水平与年龄、性别、病理类型、肿瘤大小及分化程度无关(P>0.05),而与淋巴结转移及 T M N分期有关(P<0.05).结论:NSCLC 患者血清中 lncRNA H19的表达水平增高,lncRNA H19可能参与了NSCLC的病理过程.

目的 检测Let7a微小RNA(miRNA let7a)和长链非编码RNA H19 (lncRNA H19)在甲状腺癌中的表达情况,探讨其与甲状腺癌临床病理特征及预后的相关性. 方法 收集2009-01～2012-01在我院手术的131例甲状腺癌组织和癌旁组织为病例组,另外同期选取122例甲状腺良性肿瘤的正常甲状腺组织作为对照组.采用实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法检测实验组与对照组甲状腺组织中miRNA let7a和lncRNA H19的表达水平.然后进行5年的跟踪随访.通过受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)评估miRNA let7a和lncRNA H19对甲状腺癌的诊断价值.应用Kaplan-Meier方法计算5年累积生存率,预后相关单因素分析采用Log-rank检验,多因素分析采用Cox回归模型,分析rniRNA let7a和lncRNA H19表达水平与甲状腺癌临床病理特征及生存预后的关系. 结果 与甲状腺良性肿瘤组织及癌旁组织相比,甲状腺癌组织中miRNA let7a表达下降,lncRNA H19表达升高(P＜0.05).miRNA let7a和lncRNA H19诊断甲状腺癌ROC曲线下面积(AUC)分别为0.116和0.801,诊断阈值分别为0.87和3.58,敏感度分别为84.0％和72.5％,特异度分别为77.0％和75.4％,约登指数分别为0.610和0.479.niRNAlet7a低表达者和lncRNA H19高表达者5年生存率下降.rniRNAlet7a和lncRNA H19表达水平、肿瘤直径、TNM分期和淋巴结转移是影响甲状腺癌预后的独立风险因素(P＜0.05). 结论miRNA let7a表达水平下调和lncRNA H19表达水平上调与甲状腺癌临床病理特征及生存预后差相关,提示二者之间可能具有调控作用,并在甲状腺癌发生发展过程中有重要作用,可为甲状腺癌早期的无创诊断及治疗靶点的寻找提供重要的理论依据.

目的 探讨长链非编码RNA H19(lncRNA H19)在甲状腺癌中的表达情况及其与临床病理特征和预后的相关性,寻找影响甲状腺癌治疗及预后的新靶点.方法 选取2009年1月～2012年1月从西安交大第二附属医院搜集的131例甲状腺癌组织和癌旁组织为病例组,另外同期选取122例甲状腺良性肿瘤组织作为对照组.采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测lncRNA H19的表达情况.之后进行5年跟踪随访.通过受试者工作特征(ROC)曲线分析评估lncRNA H19对甲状腺癌的诊断价值.应用Kaplan-Meier方法计算5年累积生存率,预后相关单因素分析采用Log-rank检验,多因素分析采用Cox回归模型.结果 与甲状腺良性肿瘤组织及癌旁组织比较,甲状腺癌组织中lncRNA H19表达升高(P＜0.05).lncRNA H19诊断甲状腺癌ROC曲线下面积(AUC)为0.801,诊断阈值3.58,敏感度和特异度分别为72.5％和75.4％,约登指数0.479.肿瘤直径≥1 cm、TNMⅢ+Ⅳ期及有淋巴结转移的甲状腺癌组织中lnc RNA H19表达水平明显高于肿瘤直径＜1 cm、TNM Ⅰ+Ⅱ期及无淋巴结转移的甲状腺癌组织,差异均有统计学意义(P＜0.05).lncRNA H19高表达者5年生存率下降(28.44％).lncRNAH19表达水平、肿瘤直径、TNM分期和淋巴结转移是影响甲状腺癌预后的独立风险因素.结论 IncRNA H19在甲状腺癌组织中高表达,lncRNA H19表达水平上调与甲状腺癌预后差相关,提示其可能是甲状腺癌发生发展的分子调节机制之一,并可为甲状腺癌早期无创诊断及治疗靶点的寻找提供重要理论依据.

目的 探讨长链非编码 RNA(lncRNA)H19促进膀胱癌细胞增殖的分子机制. 方法 ①应用实时定量逆转录PCR(RT-qPCR)分别检测膀胱癌组织中 lncRNA H19和 miRNA-29 c-3p的表达并分析其相关性.②应用 RNA 干扰和细胞转染技术抑制膀胱癌细胞系 T24及5637中H19基因的表达,其后通过细胞增殖实验检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期变化;RT-qPCR检测细胞中 H19的表达变化.③在膀胱癌细胞系T24和5637中共表达miR-29c-3p和 H19,运用荧光素酶报告系统验证 miR-29 c-3 p 对 H19及细胞周期蛋白 D2(CCND2)的靶向作用,应用Western blot检测膀胱癌细胞系 T24与5637中抑制 H19表达后 CCND2的表达变化. 结果 H19在膀胱癌中高表达,miR-29c-3p在膀胱癌中低表达,H19和 miR-29c-3p 的表达为负相关,H19与CCND2的表达为正相关.MiR-29 c-3 p 可同时靶向 H19及 CCND2.在膀胱癌细胞系中过表达miR-29c-3p可以抑制 H19的表达,miR-29c-3p在膀胱癌中起肿瘤抑制作用,而 H19具有促进癌细胞增殖和改变细胞周期的能力,表现为癌基因样作用,抑制膀胱癌细胞系 T24和5637中 H19的表达可以在翻译水平减少CCND2的表达. 结论 lncRNA H19通过与CCND2竞争结合 miR-29 c-3 p,降低 miR-29 c-3 p对CCND2的表达抑制,从而在膀胱癌中发挥肿瘤促进作用.