CRISPR/Cas是原核生物在进化过程中获得的一种免疫防御系统,用于抵抗外来遗传物质的入侵,近年来被开发成为高效的基因编辑、基因调控以及分子诊断工具.其可编程靶向机制揭开了利用该系统进行基因组操作的序幕,并允许在活性范围内实现动态调节和控制基因表达.作为现有基因修饰手段中灵活性最强和成本最低的技术之一,已被广泛应用于临床疾病治疗、工农业生产、可持续染料开发和化学品加工等领域.随着对CRISPR/Cas系统的不断深入挖掘和探索,大量研究报道了 gRNA工程改造及优化方法,包括改变间隔序列长度、调节恒定区和可变区的结构、向末端或中间延伸添加额外功能序列及化学合成修饰等,以期降低脱靶突变率,提高作用效率,充分激发CRISPR基因操纵工具在生物医学方面的潜力.基于此,本综述将介绍CRISPR/Cas9和CRISPR/Cas12系统中gRNA工程化设计方法及应用研究的最新进展,分析探讨了当前工程化gRNA技术面临的机遇和挑战,旨在为获得性能更加优异的gRNA提供思路和方向,从而提高利用CRISPR/Cas系统探测人类细胞基因组的能力,进一步为可编程生物学带来更多可能性.

目的 设计一种脑皮质表面影像组学计算方法,为脑影像研究提供丰富的、可靠的脑区局部特征.材料与方法 基于21组重复测量健康被试与222例多动症相关被试的大脑T1WI磁共振数据集提取皮层厚度、灰质体积、平均曲率与皮层表面积四种表面形态指数.使用Desikan-Killiany(DK)脑图谱和球面局部投影,实现三维皮层表面脑区的二维平面化.利用Pyradiomics对四个形态指数分别提取968个二维影像组学特征.结合重复测量数据集与组内相关系数(intra-class correlation coefficient,ICC),以ICC信度值作为影像组学特征评估的标准,综合评价不同形态指数、不同影像组学特征类型与不同脑区间的复测信度差异.结合多动症数据集,预测患者的注意力缺陷指数、过动指数两种症状指标.结果 对于不同形态指标,灰质体积、皮层表面积的影像组学特征可重复性较好,与皮层厚度与平均曲率组差异具有统计学意义(P<0.05).对于不同类型影像组学特征,基于皮层厚度的一阶特征和灰度共生矩阵特征与其他类型特征差异具有统计学意义(P<0.05).对于不同脑区,左右脑内嗅皮层、左右脑颞极与右脑额极提取的特征相较其他区域复测性降低(P<0.05).总体而言本研究提出的表面重建方法所提取的脑影像组学特征均具有较高的可重测性(ICC均值>0.76).在对多动症两种症状指标的预测中发现,左脑海马旁回、额上回与颞上回与多动症症状显著相关(|r|=0.33～0.52,P<0.05).结论 基于DK脑图谱与表面形态学指数构建脑影像组学特征是可行的,所提取的新型特征具有良好的可重复性,并在注意力预测等研究中具有一定的临床价值.

近年来我国医保覆盖率显著提高，医保政策不断推陈出新，传统的人工审核方式已无法满足医疗机构对医保基金高效监管的需求。针对这一情况，北京市某三级甲等医院面向重点监管的药品和诊疗项目，通过构建智能化审核规则、设计审核触发点和违规医嘱拦截等级、设立系统运行前准备制度和持续改善机制，成功建立了医保智能审核系统，实现了对医保基金违规使用行为的事前审核、事中控制。2021年3月，医院正式启用该系统，同年4—9月医院门诊医保拒付金额和数量分别为10 587元和72笔，较2020年同期下降了79.21%和77.50%，有效提升了医保基金监管的质量和效率。

目的:对超早产儿无创机械通气（NIV）治疗中的通气管、鼻塞/罩（以下简称组件）固定方法进行改良，探讨其在超早产儿NIV治疗中的应用效果。方法:根据超早产儿特点及临床需求，循证设计、制作一款新型固定帽，用于固定超早产儿NIV治疗中的组件。选取2019年1—6月解放军总医院第七医学中心超早产儿重症监护病房NIV治疗中的75例超早产儿作为研究组，选取2018年7—12月NIV治疗中的75例超早产儿作为对照组。研究组采用改良方法固定NIV治疗中的组件，对照组采用传统方法进行固定。比较两组患儿NIV相关组件在位情况以及通气压力达标情况，观察两组患儿鼻、面、额部损伤情况以及医护人员对改良固定方法的满意度。结果:研究组超早产儿的NIV相关组件在位率、通气压力达标情况明显优于对照组，鼻、面、额部损伤发生率低于对照组，差异有统计学意义（ P<0.05）。医护人员对固定方法的满意度由50.7%提升至81.3% （ P<0.01）。 结论:改良固定方法能有效提高NIV治疗中相关组件在位率、通气压力达标情况，从而提高通气效果，可以有效降低超早产儿NIV治疗中的鼻、面、额部损伤。

目的:评估县域医疗卫生共同体(以下简称医共体)改革后医保基金支出的变化，为深化医共体改革和加强医保基金管理提供参考。方法:收集云南省临沧市M县2016年至2019年的城乡居民医疗保险数据，采用基于间断时间序列的分段回归模型分析医共体改革前后该县医保基金支出的变化情况。结果:改革后县级医院出院人数呈下降趋势，平均每月减少25.996人；次均住院费用、次均住院统筹基金支出和次均门诊统筹基金支出均呈上升趋势，分别平均每月增加90.931元、50.014元和1.528元。乡镇卫生院次均住院费用、次均住院统筹基金支出和次均门诊统筹基金支出改革后均呈上升趋势，分别平均每月增加31.191元、38.678元和0.085元。医共体外医保基金流向呈持续上升趋势，改革后次均住院统筹基金支出平均每月增长33.005元，次均门诊统筹基金支出平均每月增加4.896元。结论:M县医共体改革后医保基金支出仍需进一步管控，应强化顶层设计和龙头医院引领作用，探索医保总额打包付费支付方式改革，完善区域信息化平台，规范双向转诊制度和加强监管等。

目的:探讨3D打印技术(3DP)在颅颌面多发性骨折治疗中的应用效果。方法:选择2018年9月至2021年1月郑州大学第二附属医院整形外科收治的48例颅颌面多发性骨折患者，术前运用计算机辅助设计，所有患者术前均行颅颌面部三维重建，将数据输入3D打印机，智能化地模拟颅颌面多发性骨折内固定手术，并打印3D模型。利用模型设计复位治疗方法：如设计手术切口，置入固定钛板的长度、定位及数目等，完成内固定置入手术。术前、术前3D模拟复位模型和术后分别测量：额结节至鼻根部点直线距离(双侧Fr-N)，下颌角点至髁突点直线距离(双侧Co-Go)，双侧额结节点直线距离(Fr-Fr′)，鼻根部点至颏下点直线距离(N-Me)，下颌角点至颏下点直线距离(双侧Go-Me)，鼻根部点至眶下点直线距离(双侧N-Or)。对比分析患者术前、术前3D模拟复位模型和术后左右两侧Go-Me/Co-Go、Fr-N/N-Or、Fr-Fr′/N-Me及Or-Or′/N-Me，采用 t检验进行数据分析，各组数据均服从正态分布。 结果:患者术后面部外观对称，颞颌关节功能得到改善，与术前设计吻合度较高，所有患者术后均未发生感染、神经损伤、咬合功能受限等并发症。患者术前与术后左右侧Go-Me/Co-Go比较差异有统计学意义( t＝0.012、0.006， P<0.05)，术前3D模拟复位模型与术后左右侧Go-Me/Co-Go比较差异无统计学意义( t＝0.131、0.167， P>0.05)；患者术前与术后左右两侧Fr-N/N-Or比较差异有统计学意义( t＝0.050、0.044， P<0.05)，术前左右两侧3D模拟复位模型Fr-N/N-Or比较差异无统计学意义( t＝0.155、0.003， P>0.05)；患者术前、术后Fr-Fr′/N-Me比较差异有统计学意义( t＝0.065， P<0.05)，术前3D模拟复位模型与术后Fr-Fr′/N-Me比较差异无统计学意义( t＝0.119， P>0.05)；术前及术后Or-Or′/N-Me比较差异有统计学意义( t＝0.076， P<0.05)，术前3D模拟复位模型与术后Or-Or′/N-Me比较差异无统计学意义( t＝0.079， P>0.05)。 结论:3D打印技术在颅颌面多发性骨折治疗中能够显著提高术中切口定位的精准度、降低手术难度，缩短手术时长，减少感染、损伤重要神经血管等并发症的发生，并能达到较好的修复效果。

目的:评价布洛芬超前镇痛对国人下颌阻生第三磨牙拔除术后疼痛的影响，以期为其临床应用提供参考。方法:采用多中心、随机、双盲、安慰剂平行对照的试验设计。纳入2022年4月至2023年10月于首都医科大学口腔医学院（40例）、首都医科大学附属北京天坛医院（22例）及首都医科大学附属北京朝阳医院（20例）就诊的82例下颌阻生第三磨牙患者，布洛芬组与对照组各41例，分别于术前15 min口服300 mg布洛芬缓释胶囊和安慰剂。两组患者于术后3 d内均按计划服用布洛芬缓释胶囊。通过数字评定量表统计患者在拔牙术后30 min、4 h、6 h、8 h、24 h、48 h、72 h的疼痛评分，并记录术后4~6 d额外镇痛药使用量。结果:82例患者均符合试验方案。试验过程中两组患者均未发生恶心、呕吐、过敏等不良事件。布洛芬组患者术后4、6、8 h的疼痛评分［2.0（1.0，4.0）、2.0（1.0，4.0）、2.0（1.0，4.0）分］均显著低于对照组［分别为4.0（3.0，5.0）、5.0（2.5，6.0）、5.00（2.0，6.0）分］（ Z=-3.73， P<0.001； Z=-3.38， P<0.001； Z=-2.11， P=0.035）。两组患者术后30 min、24 h、48 h和72 h的疼痛评分差异均无统计学意义（ P>0.05）。布洛芬组与对照组分别有26.8%（11/41）和56.1%（23/41）的患者于术后4~6 d额外服用镇痛药，布洛芬组患者术后额外用药量［0.0（0.0，1.0）粒］显著低于对照组［1.0（0.0，3.0）粒］（ Z=-2.81， P=0.005）。 结论:术前15 min口服300 mg布洛芬缓释胶囊，并在术后连续用药3 d的疼痛管理方案可有效降低患者术后疼痛程度及镇痛药物使用总量。综合考量其有效性、安全性和经济性，推荐布洛芬作为围手术期疼痛管理的一线药物，提升患者诊疗的舒适性是切实可行的。

目的:探讨3D Slicer软件在有框架脑立体定向活组织检查(简称活检)术中的应用价值。方法:前瞻性纳入2019年11月至2021年12月于西安交通大学第二附属医院神经外科诊断为颅内占位并行有框架脑立体定向活检术的患者。所有患者术前均利用3D Slicer软件将头颅CT、MRI等多种影像学资料进行多模态配准，重建颅内占位病灶、血管、脑室及脑组织，在三维视窗展示其空间位置关系；设定靶点并计算靶点坐标，模拟最佳的穿刺路径，并根据模拟路径实施穿刺。术后复查头颅CT评估3D Slicer辅助活检取样的准确性和安全性。结果:共纳入22例患者，所有患者3D Slicer重建效果均良好，病灶、血管、脑室、脑沟、脑回显示清晰。根据病灶位置设计穿刺靶点，22例患者中，穿刺靶点定位在额叶者8例、基底核区6例，顶枕区3例、颞叶2例、近侧脑室后角2例、鞍区1例。所有患者均按术前模拟穿刺路径顺利完成手术，术后复查头颅CT显示所有活检取样部位均位于病灶内，取样部位与预设靶点位置均吻合。术后患者均无出血、感染及新发神经功能障碍。术后病理学证实脑胶质瘤11例、淋巴瘤3例、脱髓鞘病变2例、转移性腺瘤2例、生殖细胞瘤1例、室管膜瘤1例、颅咽管瘤1例、坏死性炎性反应1例。结论:3D Slicer能够保障有框架脑立体定向活检术穿刺位置的准确性和穿刺路径的安全性，降低手术风险。

目的:比较重性抑郁障碍患者和精神分裂症患者在眼区基本情绪识别任务(eye basic emotion discrimination task，EBEDT)下的前额叶激活模式。方法:通过近红外光谱脑功能成像(functional near infrared spectroscopy，fNIRS)技术，采用组块设计，比较40例重性抑郁障碍患者、47例精神分裂症患者和55例正常对照者在EBEDT下前额叶氧合血红蛋白(oxyhemoglobin，Oxy-Hb)浓度变化。然后，以受教育年限为协变量，对3组的EBEDT行为学结果和前额叶Oxy-Hb浓度的变化进行协方差分析，统计软件为SPSS 25.0。结果:(1)精神分裂症组EBEDT正确数目[(13.93±7.67)个]显著低于重性抑郁障碍组[(19.26±8.07)个]和正常对照组(21.79±6.36)个](均 P<0.05)；精神分裂症组EBEDT反应时[(3.97±1.77)s]显著长于重度抑郁障碍组[(3.21±1.27)s]和正常对照组[(2.63±0.62)s](均 P<0.05)。(2)在EBEDT任务期，正常对照组在额极区、Broca区和前运动区与辅助运动皮质区(SMA区)激活水平较对照期上升( t＝2.02～3.18，均 P<0.05)，精神分裂症组在额叶眼动区激活水平较对照期上升( t＝2.26，均 P＝0.03)，而重性抑郁障碍组存在广泛前额叶激活水平较对照期下降( t＝－3.47～－2.34，均 P<0.05)。(3)重性抑郁障碍组、精神分裂症组和正常对照组之间EBEDT任务期的激活水平比较，在额极区(ch37)、背外侧前额叶区(ch31)、Broca区(ch49、ch51、ch53)，以及SMA区(ch1、ch47、ch52)，3组之间的激活水平差异有统计学意义( F＝3.23～5.53，均 P<0.05)。进一步两两比较发现，重性抑郁障碍组在以上所有通道的激活水平低于正常对照组，精神分裂症组在Broca区(ch53)和SMA区(ch52)的激活水平低于正常对照组，而重性抑郁障碍组在额极区(ch37)和Broca区(ch49)的激活水平低于精神分裂症组(均 P<0.05)。 结论:在EBEDT下，重性抑郁障碍患者和精神分裂症患者的前额叶激活模式不同。重性抑郁障碍患者存在广泛前额叶激活下降，精神分裂症患者在额叶眼动区激活上升，两者激活水平均低于正常。同时，重性抑郁障碍患者的前额叶激活水平低于精神分裂症患者。

目的:评价术前口服布洛芬的超前镇痛方案对单枚后牙种植体植入术后疼痛的影响。方法:采用多中心、随机、双盲、安慰剂平行对照的试验设计。按照纳排标准收集2022年4月至2024年4月于首都医科大学口腔医学院（40例）、首都医科大学附属北京天坛医院（22例）及首都医科大学附属北京朝阳医院（20例）就诊的要求植入种植体的患者。采用简单随机方法将患者按照1∶1的比例分配至布洛芬组和对照组，每组41例。布洛芬组与对照组分别于术前15 min口服300 mg布洛芬缓释胶囊和安慰剂，并在术后3 d内接受相同的镇痛方案。通过数字评定量表（NRS）统计患者术后30 min和4、6、8、24、48、72 h的疼痛评分，并记录术后4~6 d额外镇痛药使用量。结果:研究共入组82例患者，失访脱落7例（对照组4例、布洛芬组3例），共计75例（对照组37例、布洛芬组38例）患者完成试验，患者均未发生恶心、呕吐等不良事件。布洛芬组患者术后4、6、8 h的疼痛评分［分别为1.0（0.0，2.0）、1.0（0.0，2.0）、1.5（0.0，3.0）分］均显著低于对照组［分别为2.0（1.0，3.0）、3.0（1.5，4.0）、2.0（1.0，4.0）分］（ Z=-1.99， P=0.047； Z=-3.01， P=0.003； Z=-2.10， P=0.036）。布洛芬组与对照组分别有18.4%（7/38）和27.0%（10/37）的患者于术后4~6 d额外服用镇痛药，两者额外服用镇痛药的患者比例差异无统计学意义（χ 2=0.79， P=0.373）；对照组与布洛芬组术后额外用药量分别为［0.0（0.0，1.0）粒］与［0.0（0.0，0.0）粒］，差异无统计学意义（ Z=-0.78， P=0.439）。 结论:布洛芬超前镇痛可有效降低患者种植体植入术后疼痛程度，是一种安全有效的围手术期疼痛管理方案。