目的 建立同时检测阿胶中马、牛、猪、骆驼、羊、鹿 6 种动物皮异源性成分的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法.方法 阿胶粉末加 1%碳酸氢铵溶液超声溶解,滤过,采用胰蛋白酶酶解 15 h.采用UPLC-MS/MS法,以阿胶特征肽段质荷比(m/z)539.8→924.3 和驴源特征肽m/z 570.5→698.1、马源寡肽A m/z 386.4→377.3、牛皮特征肽A m/z 641.2→726.3、猪皮特征肽m/z 774.5→1 035.7、骆驼皮特征肽m/z 603.8→281.8、羊皮特征肽m/z 553.0→450.8、鹿皮特征肽m/z 733.1→962.5 作为检测离子对,电喷雾电离(ESI)离子源、正离子模式进行多反应监测(MRM),对 10 批药用阿胶、6 批食品级阿胶样品进行质量评价.结果 所选各动物源特征肽段均只在对应动物皮胶中检出,方法专属性强;方法 灵敏度符合质量控制要求;酶解重复性、进样精密度及样品稳定性均满足方法学验证要求,结果的RSD均小于 9.0%(n=6).6批食用级阿胶样品中均未检出阿胶成分,判定主要成分为牛皮源、骆驼皮源、马皮源、猪皮源成分.8 批药用阿胶检出阿胶成分,其中 1 批阿胶成分含量偏低,1 批检出马皮源成分;2 批药用阿胶未检出阿胶成分,判定为假冒产品.结论 所建立的 6种动物皮胶检测方法的专属性强、灵敏度高,可用于阿胶鉴别及掺假杂皮胶的检测.

目的:发现马皮特征肽,建立阿胶中马皮源成分专属性的检测方法.方法:采用序列比对技术发现理论马皮胶原蛋白特征肽,利用胰蛋白酶酶切马皮胶样品,通过纳升液相-高分辨质谱确证了马皮特征肽GASGPAGVR.利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QQQ/MS)对马皮特征肽进行检测.色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×150 mm,1.7 μm),流动相为0.1％甲酸溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0～3 min,96％A;3～8 min,96％A→92％A;8～10 min,92％A→50％A;10～12 min,50％A;12～12.1min,50％A→96％A;12.1～15 min,96％A),流速0.3 mL·min-1,柱温40℃,进样量5 μL;离子化模式为ESI+,进行多反应监测,选择马皮特征肽特征分子离子峰m/z 386.25→499.25,m/z 386.25→556.51作为检测离子对.结果:在马皮胶样品中检出了马皮特征肽,在阿胶、牛皮胶、猪皮胶、羊皮胶样品中均未检出马皮特征肽.该方法的检出限度为1％马皮胶的阿胶样品.对10批阿胶样品进行检测,在2批样品中检出了马皮特征肽.结论:所建立的方法经验证,专属性强,可用于阿胶中马皮源成分的检测.

目的:采用细胞色素C氧化酶亚基1(cytochrome C oxidase subunit 1,COⅠ)基因片段序列鉴定的方法鉴别中药阿胶的原料驴皮及其混伪品马皮、骡皮、牛皮.方法:优化DNA提取试剂盒的通用方法进行总DNA的提取,针对马科动物驴的基因序列变异位点优化COⅠ通用引物及PCR扩增条件,PCR扩增产物双向测序,测得的序列与GenBank下载的基因序列Blast比对分析样品的基原;采用Mega 6.0软件计算序列的碱基组成、种内和种间K2P(Kimura-2-parameter)的遗传距离,采用邻接法(neighbor-joining method)构建系统树,进一步对驴皮及其混伪品进行基原鉴别.结果:22份来自马科和牛科动物的驴、马、牛的皮样品的基因序列与GenBank序列Blast比对结果一致性均大于99％.采用邻接法构建的系统树结果显示驴、马、牛的皮样品具有较好的单系性,均分别独立聚为1个分支,可以显著区分;牛科和马科动物样品的K2P种间平均遗传距离均远大于种内平均遗传距离.结论:利用优化后的COⅠ片段扩增引物及PCR反应程序可作为鉴别阿胶原料DNA条形码物种鉴定的有效方法,为阿胶原料的真伪鉴别提供了科学的鉴定方法.

目的:建立以特征肽为检测指标的阿胶糕中阿胶的鉴别方法与马皮、牛皮、羊皮、猪皮源成分的检测方法.方法:采用三氯乙酸沉淀法提取阿胶糕中的蛋白质,胰蛋白酶进行酶解处理,利用超高效液相色谱-三重四级杆质谱法(UHPLC-QQQ MS),电喷雾离子源(ESI),正离子模式下扫描,采用多重反应监测模式,对特征肽目标离子进行检测.结果:经验证,鉴别方法和检查方法均均有良好的专属性,灵敏度高.市售样品测定结果显示,部分样品中检出阿胶成分,有的样品中检出牛皮源成分,有的样品中未检出任何皮源性成分.结论:所建立方法操作简便,专属性强,可用于阿胶糕中阿胶的鉴别和掺假杂皮胶的检测.

目的:建立阿胶中马皮源成分的检测方法,为阿胶药材质量控制提供技术支持.方法:利用高分辨质谱分析方法获得马皮中专属特征肽段,采用胰蛋白酶对阿胶进行酶解,经超高效液相色谱-三重四极杆质谱对马源寡肽段进行检测.电喷雾离子化(ESI),正离子模式下,进行多反应监测,选择马皮特征分子离子峰m/z 386.4(双电荷)→377.3,322.3作为检测离子对.结果:方法学试验考察表明,所建立方法专属性、稳定性、重复性及耐用性均良好,对照物质马源寡肽A线性范围为0.010 86～1.086μg·mL-1,相关系数为0.999 9.以所建立的方法对专项抽验的56批阿胶进行检验,结果28批样品检出马皮源成分.结论:所建立的方法准确可靠,专属性强,可用于阿胶中的马皮源成分的检测.

目的 对近年来胶类中药存在的质量问题进行研究、总结,为相关部门监管政策的制定、标准修订和完善提供参考.方法 对2012年以来,在国家药品抽验中发现的胶类中药存在的质量问题进行汇总,并以此为基础,对生产批次多、市场占有量大的41个含胶中成药品种开展筛查工作,并建立相关的补充检验方法.结果 与结论通过汇总国家以及各省市药品监督管理局的药品质量公告,2012 ～2015年间,阿胶中牛皮投料现象比较严重.2015 ～2017年间,未发现阿胶中牛皮投料问题,但是骡皮和马皮投料问题异常突出.针对市场问题,7家单位完成了41个含胶中成药品种的筛查工作,建立补充检验方法15项,有效地加强了对胶类中药的质量控制,规范了胶类中药的行业次序.

目的 超声辅助快速酶解与串联质谱联用实现准确、高效检测阿胶中的马皮成分,为阿胶质量标准研究提供实验依据.方法 采用超声辅助胰蛋白酶酶解的方法,快速制备阿胶酶解液样品,采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QQQ-MS)对阿胶酶解液进行检测,在电喷雾离子化的正离子模式下,多反应监测模式(MRM),以驴专属肽m/z 691.0→809.4、马专属肽m/z 698.3→809.4为离子对,检测阿胶样品中的马专属肽,以及驴专属肽与马专属肽的相对峰面积比例.结果 采用的方法可在20 min内准确判别阿胶中是否掺有马皮成分,及掺入的马皮成分的比例,马皮成分的检出限为1％.结论 超声辅助快速酶解与串联质谱联用的方法准确可靠、专属性强、检测效率高,可用于阿胶中马皮成分的快速检测.

目的 建立含阿胶中成药阿胶补血口服液、阿归养血颗粒中阿胶类皮源检测方法,包括阿胶的专属性检测方法,以及猪皮源、马皮源、牛皮源掺伪检查研究.方法 采用胰蛋白酶对用0.01 g·mL-1NH4HC03溶解的阿归养血颗粒及阿胶补血口服液中阿胶进行酶解,利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QqQ-MS)对样品进行检测.色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3-C18(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),流动相为体积分数 0.1％甲酸溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0～25 min,95％A→80％A;25～40 min,80％A→50％A),流速0.3 mL·min-1,柱温30℃,进样量5μL;离子化模式为ESI+,进行多反应监测,选择阿胶特征分子离子峰m/z539.8(双电荷)→612.4和m/z539.8(双电荷)→923.8;马源寡肽A特征分子离子峰m/z 386.4(双电荷)→322.3和m/z 386.4(双电荷)→377.3;新阿胶特征分子离子峰m/z 774.5(双电荷)→799.8和m/z 774.5(双电荷)→1 034.6;黄明胶特征分子离子峰m/z 641.3(双电荷)→726.2和m/z 641.3(双电荷)→783.3作为检测离子对.结果 10批市售阿归养血颗粒和10批阿胶补血口服液样品中均可检出阿胶的特征肽段,其中的3批阿归养血颗粒样品和2批阿胶补血口服液样品中同时检出了马皮特征肽.结论 所建立的方法经方法学验证,专属性强,可用于中成药中阿胶的检测及掺伪检查.

目的:研究驴皮胶及常见伪品胶马皮胶和牛皮胶的蛋白凝胶电泳行为.方法:自制3种皮胶,计算出胶率,BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白含量,计算上样量,使上样量为20～30 μg.垂直电泳仪进行SDS-PAGE凝胶电泳,采用考马斯亮蓝及银染法显色.结果:3种皮胶的凝胶电泳行为相似,蛋白成分主要集中在分子量大于25 kDa段上,银染法灵敏度更高,可显示较多条带.结论:3种皮胶分子量分布宽泛,具有共同的条带,进一步可用多肽蛋白质谱鉴定技术对各混合物组分进行更深入分析.