目的:观察膏摩疗法对大鼠骨骼肌急性钝挫伤修复过程中炎症、氧化应激和血管生成的影响，探讨膏摩疗法治疗骨骼肌损伤的作用机制。方法:将42只成年雄性SD大鼠随机分为对照组(6只)、膏摩组(18只)、模型组(18只)，膏摩组和模型组均采用自制打击器建立腓肠肌急性钝挫伤模型，膏摩组和模型组按造模后时间分为第1天、第3天和第7天三个亚组，每亚组6只大鼠。膏摩组于造模2 h后开始膏摩治疗，由专人在损伤局部涂抹消炎止痛膏，并运用食指摩法，推拿手法均匀和缓，每次5 min，每日2次(间隔12 h)。模型组和对照组不予处理。分别于造模后第1、3、7天时间点取材，对各组大鼠进行腹主动脉采血后取损伤侧腓肠肌，检测和分析苏木精-伊红(HE)染色、免疫荧光(CD34)染色，以及血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果:HE染色显示，各时间点模型组腓肠肌肌纤维均较对照组肿胀变形，崩塌溶解，大量炎症细胞浸润；各时间点膏摩组较模型组恢复更佳，新生成肌细胞较多，炎症浸润减轻，形态更趋正常。免疫荧光染色显示，模型组与膏摩组各时间点较对照组的红色荧光(CD34)更较明显；与模型组比较，膏摩组各取材时间点则更明显。模型组和膏摩组各时间点的SOD和MDA含量均较对照组明显升高( P<0.05或 P<0.01)，其中第1天和第3天膏摩组的SOD含量较同时间点模型组明显升高( Z1＝－2.882， P1＝0.004； Z3＝－2.882， P3＝0.004)，第7天膏摩组SOD含量与模型组比较，差异无统计学意义( Z7＝－1.992， P7＝0.55)；而膏摩组各时间点的MDA含量均低于同时间点模型组( Z1＝－2.887， P1＝0.004； Z3＝－2.089， P3＝0.037； Z7＝－2.722， P7＝0.006)。 结论:膏摩疗法可有效减轻骨骼肌损伤后的局部炎症反应，减少氧化应激损害，加快局部血管生成，进而加速受损组织的修复。

目的:探讨体外冲击波通过调控胰岛素样生长因子(IGF)-1和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的水平促进大鼠骨骼肌钝挫伤后修复的可能作用机制。方法:按随机数字表法将66只雄性成年SD大鼠分为正常组、模型组和治疗组，自制重物打击装置进行骨骼肌钝挫伤造模。正常组大鼠不作任何处理；模型组大鼠造模后不行体外冲击波治疗；治疗组大鼠于造模后24 h采用体外冲击波治疗，设定体外冲击波刺激能流密度0.14 mJ/mm 2，频率10 Hz，冲击500次，间隔4 d后再次体外冲击波治疗。分别于造模后1、3、5、7 d，对各组大鼠腓肠肌进行取材。采用HE染色观察肌纤维排列情况，采用免疫组化及免疫印迹(western blot)检测和分析肌肉生长抑制素(Myostatin)、成肌分化抗原(MyoD)1、IGF-1、p-AKTs473的蛋白表达情况。 结果:①HE染色显示，模型组较正常组肌细胞排列间隙增大，治疗组可见较多新生单核或多核肌管；相同时间点比较，治疗组骨骼肌再生修复作用均优于模型组；②免疫组化显示，与正常组相比，模型组各时间点的Myostatin表达量均明显增加( P<0.05)，且治疗组较模型组的表达均有明显下降( P<0.05)，至7 d时治疗组与正常组的组间差异无统计学意义( P>0.05)；③免疫印迹检测，模型组在第1天和第3天时的MyoD1表达明显高于同时间点的正常组( P<0.01)，治疗组各时间点的表达亦明显高于模型组( P<0.01)；模型组的IGF-1和p-AKTs473的表达均高于同时间点的正常组( P<0.05)，且治疗组的表达量较模型组显著增加( P<0.01)。 结论:体外冲击波可能通过调控IGF-1及p-AKT水平促进骨骼肌损伤的再生修复。

目的:观察不同时间点?法按摩器对骨骼肌损伤家兔局部组织形态，以及骨骼肌组织及血清中TNF-α、IL-1β水平的影响，探究?法作用于骨骼肌损伤的时间效应机制。方法:72只新西兰兔按随机数字表法分为空白组、模型组、?法治疗组，每组24只，每组按损伤时间点分为1、3、5、7、9、11 d亚组，每组4只。模型组、?法治疗组采用钝挫伤法建立股四头肌损伤模型。?法治疗组各亚组采用自制?法按摩器进行?法干预3 d，2次/d，3 min/次。干预完成后24 h，采用HE染色观察骨骼肌形态学变化，ELISA法检测血清和受损骨骼肌中TNF-α、IL-1β水平。结果:与空白组比较，模型组炎症细胞浸润明显，水肿严重，肌纤维断裂；1 d?法治疗组炎症细胞浸润加剧，肌细胞凋亡，肌纤维断裂坏死更严重；7 d?法治疗组炎症明显改善，和正常健康肌肉组织相差较小。造模后，3 d模型组骨骼肌组织中TNF-α和IL-1β水平及血清TNF-α水平高于1 d模型组（ P<0.05）。与空白组比较，模型组各亚组及?法治疗组各亚组骨骼肌组织及血清中TNF-α和IL-1β水平升高（ P<0.01）；1 d?法治疗组骨骼肌组织TNF-α和IL-1β水平及血清TNF-α水平高于1 d模型组，3、5、7、9、11 d?法治疗组骨骼肌及血清TNF-α和IL-1β水平低于模型组亚组（ P<0.05）。与7 d?法治疗组比较，1、3、5 d?法治疗组骨骼肌和血清IL-1β及血清TNF-α水平升高（ P<0.05），1、3 d?法治疗组骨骼肌TNF-α水平升高（ P<0.05）。 结论:家兔骨骼肌损伤后1 d处于急性炎症期，此时不适宜用?法治疗；损伤后7 d开始实施?法治疗可减轻炎症反应，加快骨骼肌修复速度，提高功能恢复质量。

牵拉伤、钝挫伤以及失神经支配损伤等常见损伤都可以造成骨骼肌的损害,若修复不完全则容易形成瘢痕,影响肌肉功能.骨骼肌损伤在中医学中属于"筋伤"的范畴,推拿作为传统治疗筋伤病的重要方式之一,在治疗骨骼肌损伤中有广泛的应用.近些年逐渐开展了关于推拿修复骨骼肌损伤机制的研究,通过文献总结,发现推拿可通过磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、Notch、Wnt及过氧化物酶体增殖因子活化受体(PPAR)信号通路对骨骼肌的修复产生影响.推拿以肌卫星细胞为重点,通过促进如成肌调节因子(MRFs)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等正向调节因子的表达,抑制如转化生长因子-β(TGF-β)、生长分化因子-8(GDF-8)、结缔组织生长因子(CTGF)等负向调节因子的表达,以及下调肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)等炎性因子的浓度,来发挥促进肌纤维重塑、防止细胞外基质过度沉积、减轻炎症反应以及减缓骨骼肌纤维化的作用.除此之外,推拿还可以通过促进细胞合理自噬、修复细胞膜、调节氧化应激及脂肪代谢等反应促进组织修复.本文聚焦于推拿修复骨骼肌损伤的机制,以期为进一步研究提供参考.

目的:建立可靠、稳定、符合临床实际的大鼠骨骼肌钝挫伤模型.方法:通过170g重物,70cm高度,用底部直径0.5cm弹簧缓冲聚合式打击部,以引导下落的撞击方法,连打5次,建立大鼠腓肠肌钝挫伤模型.分别于造模后0h、12h、24h、3d、7d、14d,采用CatWalk分析系统评估大鼠步态改变;HE染色观察大鼠局部组织病理学改变,透射电子显微镜观察局部组织超微结构的改变.酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测局部组织肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量变化.结果:①CatWalk步态参数:与空白组相比,模型组的平均速度与最大速度变化率均明显下降,差异具有显著性意义(P＜0.001);与健康侧肢体组相比:受伤侧肢体组肢体的最大接触面积、足印面积和站立相持续时间均明显减少,差异具有显著性意义(P＜0.05).②HE染色:观察到3d后大量炎症细胞浸润,肌纤维大量溶解坏死,14d尽管瘢痕组织仍然存在,但HE染色上的组织修复与空白组几乎没有区别.③超微结构:打击后0h部分肌浆网出现空泡现象,3d肌纤维和部分肌浆网溶解,炎症反应加重,到14d基本恢复正常.④TNF-α表达水平:0h开始至12h这段时间内,TNF-α含量即开始逐渐升高达到高峰,并在损伤后12-72h一直保持较高水平,与空白组相比差异具有显著性意义(P＜0.05),到14d基本恢复正常水平.结论:以锤重170g、70cm高度、底部带弹簧缓冲装置的直径0.5cm圆钝型打击头,连打5次,可对大鼠骨骼肌造成中度损伤,其自然恢复时间至少14d,适用于大鼠骨骼肌钝挫伤模型的建立,可为今后大鼠骨骼肌钝挫伤模型提供参考依据.

目的 观察推拿法对家兔骨骼肌钝挫伤后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)以及Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)表达的影响,探讨推拿法对骨骼肌钝挫伤的修复作用机制.方法 将15 只健康成年新西兰兔随机分为空白组、模型组和推拿法组,每组5 只.使用自制改良重力锤打击装置对模型组和推拿法组家兔建立骨骼肌钝挫伤模型.推拿法组家兔于造模成功后第7 天给予法干预,滚动频率 140次/min,2 次/d,3 min/次,连续干预3d.干预结束后第3 天进行取材,HE和Masson染色观察股四头肌病理形态,Western blot法检测股四头肌组织中MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、COL-Ⅰ表达情况.结果 HE染色显示,模型组肌细胞形态大小不均,细胞边界模糊,间隙显著增宽,结缔组织增多,炎细胞浸润明显;推拿法组肌细胞结构相对完整,见少量炎细胞浸润,结缔组织减少.Masson染色显示,模型组肌纤维形态多样且不规整,间隙增宽,部分肌纤维融合成片状,胶原纤维沉积明显;推拿法组肌纤维结构、形态变化及胶原纤维增生程度均明显轻于模型组.模型组家兔股四头肌组织中 MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、COL-Ⅰ蛋白相对表达量均明显高于空白组(P 均<0.05),推拿法组家兔股四头肌组织中MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、COL-Ⅰ蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05).结论 推拿法能通过下调MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、COL-Ⅰ的表达,抑制胶原蛋白沉积,调控细胞外基质的生降平衡,进而抑制骨骼肌纤维化,促进骨骼肌损伤修复.

目的:观察巨刺干预对骨骼肌钝挫伤大鼠肝细胞生长因子(HGF)的影响,探讨巨刺治疗骨骼肌钝挫伤的机制.方法:将SD大鼠54只随机分为空白组(6只)、模型组(24只)、巨刺组(24只),模型组与巨刺组再分为1、3、5、7d4个亚组,每亚组6只.空白组不做处理,模型组与巨刺组采用自制打击装置建立骨骼肌钝挫伤模型.损伤后24 h,巨刺组选取健侧"足三里"及患侧阿是穴对应的健侧处进行电针干预,每次15 min,每天1次,4个亚组分别治疗1、3、5、7 d;模型组不干预,4个亚组分别在损伤后1、3、5、7 d取材.HE染色观察大鼠腓肠肌形态变化,免疫组化检测增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞率,Western blot检测HGF和PCNA表达量.结果:①HE显示,损伤后1 d,巨刺组腓肠肌炎性细胞少于模型组;损伤后3、5 d,巨刺组成肌细胞及肌管多于模型组;损伤后7 d,巨刺组新生肌细胞多于模型组.②免疫组化结果显示,损伤后1、3、5 d,巨刺组PCNA阳性细胞率均显著高于模型组(均P<0.001);损伤后7 d,巨刺组PCNA阳性细胞率显著低于模型组(P<0.001).③免疫印迹结果显示,损伤后1、3、5 d,巨刺组HGF和PCNA蛋白表达量均显著高于模型组(均P<0.05);损伤后7 d,巨刺组中HGF和PCNA表达量显著低于模型组(均P<0.05).结论:巨刺可调控骨骼肌钝挫伤大鼠HGF的表达,促进损伤骨骼肌肌卫星细胞激活、增殖、迁移和分化,加快骨骼肌损伤修复进程.

本研究旨在探索巨噬细胞在骨骼肌损伤修复中的作用及其机制.将小鼠随机分为损伤组、未损伤对照组、剔除组和剔除对照组.损伤组和剔除组小鼠用钝物击打构建骨骼肌挫伤模型,剔除组和剔除对照组小鼠用氯膦酸盐脂质体腹腔注射构建巨噬细胞剔除模型.骨骼肌钝挫伤后1、3、7和14d取双侧腓肠肌,HE和Masson染色观察损伤骨骼肌再生和纤维化瘢痕愈合过程,real-time PCR及Western blotting检测骨骼肌中炎症因子、趋化因子和氧化应激因子表达变化.结果显示,骨骼肌损伤后14d,损伤组组只存在少量再生肌纤维,而剔除组存在大量再生肌纤维,两组肌纤维直径差异具有显著性(P＜0.05).伤后14d,剔除组胶原纤维面积所占百分比显著高于损伤组(P＜ 0.01).与未损伤对照组相比,损伤组多种促炎细胞因子、趋化因子和氧化应激因子表达均显著上调.与损伤组相比,剔除组中多种促炎细胞因子、趋化因子和氧化应激因子的表达在损伤后期(损伤后7～14 d)均显著增加.以上结果提示,骨骼肌损伤修复过程中多种炎症因子、趋化因子和氧化应激因子表达上调,剔除巨噬细胞后,上述因子的表达在损伤后期进一步上调,且骨骼肌再生能力受损,纤维化修复加剧.这些结果表明巨噬细胞在骨骼肌损伤修复过程中发挥了重要作用,炎症和氧化应激可能参与了剔除巨噬细胞损害骨骼肌再生这一过程.

目的:观察超早期推拿对骨骼肌急性钝挫伤模型大鼠肌细胞膜修复相关蛋白dysferlin表达的影响,探寻dysferlin在骨骼肌钝挫伤肌细胞膜修复中的作用机制.方法:SD大鼠55只,随机分为正常对照组(n=5)、自然恢复组(n=25)、推拿组(n=25).根据推拿治疗的天数计时,自然恢复组和推拿组分别在ld、2d、3d、5d、7d五个时间点处死,每亚组每个时间点5只,在腓肠肌标记的区域内取肌肉组织,HE观察组织的形态变化,运用Western blot检测蛋白dysferlin的表达情况,并进行统计学分析.结果:HE结果显示,与正常对照组相比,骨骼肌钝挫伤后,1d和2d肌纤维出现肿胀;3d出现炎性细胞浸润且自然恢复组比推拿组更加严重;5d炎性细胞浸润更加明显;7d推拿组炎性细胞较5d明显减少,结缔组织形成较少,7d自然恢复组有大量的结缔组织填充在肌纤维之间.WB结果显示:dysferlin在模型组中比在正常对照组中的表达明显增多;各个相应时间点推拿组较自然恢复组表达量明显增多(P＜0.05),且随着时间的推移dysferlin在推拿组各亚组、自然恢复组各亚组中的表达量呈逐渐上升趋势.结论:在骨骼肌急性钝挫伤模型大鼠腓肠肌修复过程中,超早期推拿可增加膜修复蛋白dysferlin的表达,促进破裂的肌细胞膜及时修复,可能有利于损伤肌细胞的修复,从而帮助受损的骨骼肌修复.

目的:本研究通过观察SD大鼠骨骼肌急性钝挫伤修复过程中自噬相关因子的表达变化,探讨骨骼肌损伤修复可能的生物学机制.方法:30只SD雄性大鼠,随机选取6只作为对照组,其余24只用打击器打击后建立腓肠肌急性钝挫伤模型,然后随机分为4组(n=6),各组分别在造模前及造模后3d、5d、7d、14 d取材,HE染色观察损伤部位腓肠肌形态学变化,透射电镜观察损伤部位腓肠肌超微结构变化,Westem blot检测腓肠肌自噬相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、泛素结合蛋白P62表达水平,RT-PCR检测腓肠肌自噬相关基因(atg) atg7、atg10、atg12、atg16L1 mRNA表达水平.结果:HE染色显示:与对照组相比,骨骼肌损伤后5d炎细胞浸润达到高峰,7d可见明显的新生肌细胞,14 d损伤已初步愈合.电镜观察显示:与对照组相比,损伤后3d,5d,7d线粒体肿胀明显、空泡化增多,Z线从消失到飘移增粗,肌质网扩张程度逐渐好转,14 d接近对照组水平.Western blot显示:骨骼肌损伤在自然恢复3d、5d、7d、14 d过程中,LC3-Ⅱ与P62总体呈现先升高后降低的趋势,其中3d、5d、7d组LC3-Ⅱ表达较对照组与14 d组明显升高(P＜0.01),同样损伤后第3天P62表达达到高峰(P＜0.01),14 d恢复至正常水平. RT-PCR显示:骨骼肌损伤自然恢复3d、5d、7d、14 d过程中,atg10 mRNA表达呈现先降低后升高的趋势,其中3d、5d、7d组atg10 mRNA表达较对照组与14 d组明显降低(P＜0.01);atg7、atg12、atg16L1 mRNA表达总体呈现先升高后降低的趋势,其中3d、5d、7d组表达较对照组与14d组显著升高(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01).结论:骨骼肌急性钝挫伤后,自噬相关因子表达随损伤的修复而呈现规律性变化,提示自噬参与骨骼肌损伤的修复,推测骨骼肌急性钝挫伤的修复速度可能与细胞自噬水平有关.