目的:观察不同时间点?法按摩器对骨骼肌损伤家兔局部组织形态，以及骨骼肌组织及血清中TNF-α、IL-1β水平的影响，探究?法作用于骨骼肌损伤的时间效应机制。方法:72只新西兰兔按随机数字表法分为空白组、模型组、?法治疗组，每组24只，每组按损伤时间点分为1、3、5、7、9、11 d亚组，每组4只。模型组、?法治疗组采用钝挫伤法建立股四头肌损伤模型。?法治疗组各亚组采用自制?法按摩器进行?法干预3 d，2次/d，3 min/次。干预完成后24 h，采用HE染色观察骨骼肌形态学变化，ELISA法检测血清和受损骨骼肌中TNF-α、IL-1β水平。结果:与空白组比较，模型组炎症细胞浸润明显，水肿严重，肌纤维断裂；1 d?法治疗组炎症细胞浸润加剧，肌细胞凋亡，肌纤维断裂坏死更严重；7 d?法治疗组炎症明显改善，和正常健康肌肉组织相差较小。造模后，3 d模型组骨骼肌组织中TNF-α和IL-1β水平及血清TNF-α水平高于1 d模型组（ P<0.05）。与空白组比较，模型组各亚组及?法治疗组各亚组骨骼肌组织及血清中TNF-α和IL-1β水平升高（ P<0.01）；1 d?法治疗组骨骼肌组织TNF-α和IL-1β水平及血清TNF-α水平高于1 d模型组，3、5、7、9、11 d?法治疗组骨骼肌及血清TNF-α和IL-1β水平低于模型组亚组（ P<0.05）。与7 d?法治疗组比较，1、3、5 d?法治疗组骨骼肌和血清IL-1β及血清TNF-α水平升高（ P<0.05），1、3 d?法治疗组骨骼肌TNF-α水平升高（ P<0.05）。 结论:家兔骨骼肌损伤后1 d处于急性炎症期，此时不适宜用?法治疗；损伤后7 d开始实施?法治疗可减轻炎症反应，加快骨骼肌修复速度，提高功能恢复质量。

目的:观察膏摩疗法对大鼠骨骼肌急性钝挫伤修复过程中炎症、氧化应激和血管生成的影响，探讨膏摩疗法治疗骨骼肌损伤的作用机制。方法:将42只成年雄性SD大鼠随机分为对照组(6只)、膏摩组(18只)、模型组(18只)，膏摩组和模型组均采用自制打击器建立腓肠肌急性钝挫伤模型，膏摩组和模型组按造模后时间分为第1天、第3天和第7天三个亚组，每亚组6只大鼠。膏摩组于造模2 h后开始膏摩治疗，由专人在损伤局部涂抹消炎止痛膏，并运用食指摩法，推拿手法均匀和缓，每次5 min，每日2次(间隔12 h)。模型组和对照组不予处理。分别于造模后第1、3、7天时间点取材，对各组大鼠进行腹主动脉采血后取损伤侧腓肠肌，检测和分析苏木精-伊红(HE)染色、免疫荧光(CD34)染色，以及血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果:HE染色显示，各时间点模型组腓肠肌肌纤维均较对照组肿胀变形，崩塌溶解，大量炎症细胞浸润；各时间点膏摩组较模型组恢复更佳，新生成肌细胞较多，炎症浸润减轻，形态更趋正常。免疫荧光染色显示，模型组与膏摩组各时间点较对照组的红色荧光(CD34)更较明显；与模型组比较，膏摩组各取材时间点则更明显。模型组和膏摩组各时间点的SOD和MDA含量均较对照组明显升高( P<0.05或 P<0.01)，其中第1天和第3天膏摩组的SOD含量较同时间点模型组明显升高( Z1＝－2.882， P1＝0.004； Z3＝－2.882， P3＝0.004)，第7天膏摩组SOD含量与模型组比较，差异无统计学意义( Z7＝－1.992， P7＝0.55)；而膏摩组各时间点的MDA含量均低于同时间点模型组( Z1＝－2.887， P1＝0.004； Z3＝－2.089， P3＝0.037； Z7＝－2.722， P7＝0.006)。 结论:膏摩疗法可有效减轻骨骼肌损伤后的局部炎症反应，减少氧化应激损害，加快局部血管生成，进而加速受损组织的修复。

目的:观察超早期推拿对骨骼肌急性钝挫伤模型大鼠肌细胞膜修复相关蛋白dysferlin表达的影响,探寻dysferlin在骨骼肌钝挫伤肌细胞膜修复中的作用机制.方法:SD大鼠55只,随机分为正常对照组(n=5)、自然恢复组(n=25)、推拿组(n=25).根据推拿治疗的天数计时,自然恢复组和推拿组分别在ld、2d、3d、5d、7d五个时间点处死,每亚组每个时间点5只,在腓肠肌标记的区域内取肌肉组织,HE观察组织的形态变化,运用Western blot检测蛋白dysferlin的表达情况,并进行统计学分析.结果:HE结果显示,与正常对照组相比,骨骼肌钝挫伤后,1d和2d肌纤维出现肿胀;3d出现炎性细胞浸润且自然恢复组比推拿组更加严重;5d炎性细胞浸润更加明显;7d推拿组炎性细胞较5d明显减少,结缔组织形成较少,7d自然恢复组有大量的结缔组织填充在肌纤维之间.WB结果显示:dysferlin在模型组中比在正常对照组中的表达明显增多;各个相应时间点推拿组较自然恢复组表达量明显增多(P＜0.05),且随着时间的推移dysferlin在推拿组各亚组、自然恢复组各亚组中的表达量呈逐渐上升趋势.结论:在骨骼肌急性钝挫伤模型大鼠腓肠肌修复过程中,超早期推拿可增加膜修复蛋白dysferlin的表达,促进破裂的肌细胞膜及时修复,可能有利于损伤肌细胞的修复,从而帮助受损的骨骼肌修复.

目的:本研究通过观察SD大鼠骨骼肌急性钝挫伤修复过程中自噬相关因子的表达变化,探讨骨骼肌损伤修复可能的生物学机制.方法:30只SD雄性大鼠,随机选取6只作为对照组,其余24只用打击器打击后建立腓肠肌急性钝挫伤模型,然后随机分为4组(n=6),各组分别在造模前及造模后3d、5d、7d、14 d取材,HE染色观察损伤部位腓肠肌形态学变化,透射电镜观察损伤部位腓肠肌超微结构变化,Westem blot检测腓肠肌自噬相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、泛素结合蛋白P62表达水平,RT-PCR检测腓肠肌自噬相关基因(atg) atg7、atg10、atg12、atg16L1 mRNA表达水平.结果:HE染色显示:与对照组相比,骨骼肌损伤后5d炎细胞浸润达到高峰,7d可见明显的新生肌细胞,14 d损伤已初步愈合.电镜观察显示:与对照组相比,损伤后3d,5d,7d线粒体肿胀明显、空泡化增多,Z线从消失到飘移增粗,肌质网扩张程度逐渐好转,14 d接近对照组水平.Western blot显示:骨骼肌损伤在自然恢复3d、5d、7d、14 d过程中,LC3-Ⅱ与P62总体呈现先升高后降低的趋势,其中3d、5d、7d组LC3-Ⅱ表达较对照组与14 d组明显升高(P＜0.01),同样损伤后第3天P62表达达到高峰(P＜0.01),14 d恢复至正常水平. RT-PCR显示:骨骼肌损伤自然恢复3d、5d、7d、14 d过程中,atg10 mRNA表达呈现先降低后升高的趋势,其中3d、5d、7d组atg10 mRNA表达较对照组与14 d组明显降低(P＜0.01);atg7、atg12、atg16L1 mRNA表达总体呈现先升高后降低的趋势,其中3d、5d、7d组表达较对照组与14d组显著升高(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01).结论:骨骼肌急性钝挫伤后,自噬相关因子表达随损伤的修复而呈现规律性变化,提示自噬参与骨骼肌损伤的修复,推测骨骼肌急性钝挫伤的修复速度可能与细胞自噬水平有关.

目的 观察推拿对大鼠骨骼肌急性钝挫伤修复过程中炎症、氧化应激、细胞自噬相关因子的影响,探讨推拿治疗骨骼肌损伤可能的作用机制.方法 采用随机数字表法将42只成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠分为正常组(n=6)、模型组(n=18)、治疗组(n=18),模型组和治疗组再根据取材的时间点随机分为1d、7d、14d三个亚组(n=6).模型组和治疗组用自备打击器建立腓肠肌急性钝挫伤模型,治疗组于造模48 h后开始推拿治疗,每日1次,每次15 min.各组分别于各自的取材时间点心脏采血后取损伤侧腓肠肌,苏木精-伊红染色(HE)观察损伤部位腓肠肌形态学变化;酶联免疫法(ELISA)检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、C反应蛋白(CRP)、前列腺素E2(PGE2)表达水平;紫外-可见分光光度法检测各组大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)含量;Western blotting检测各组大鼠腓肠肌自噬微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Bcl-2同源结构域蛋白Beclin1、泛素结合蛋白P62表达水平.结果 骨骼肌损伤修复过程中,HE染色显示,各时间点模型组较正常组细胞形态崩塌,肿胀明显,7d和14d亚组有成肌细胞核出现.各时间点治疗组较模型组恢复更好,新生肌细胞较多,形态更趋正常.ELISA结果显示,模型组各取材时间点较正常组同取材时间点血清促炎因子明显升高,但治疗组1d和7d组较模型组同取材时间点显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).紫外-可见分光光度法结果显示,模型组血清SOD和MDA含量较正常组明显升高,治疗组SOD较模型组同取材时间点显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05),MDA较模型组同取材时间点显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blotting结果显示,模型组各取材时间点较正常组腓肠肌LC3(Ⅱ/Ⅰ)、Beclin1明显降低,P62明显升高,而治疗组较模型组同取材时间点LC3 (Ⅱ/1)、Beclin1显著升高,P62显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 骨骼肌损伤后,其炎症及氧化应激水平明显升高,细胞自噬活性明显降低,通过推拿治疗能有效减轻机体炎症反应,降低其氧化应激损害,提高组织细胞自噬活性,从而加速受损组织的修复,这可能是推拿促进骨骼肌损伤修复的机制之一.

目的:研究PI3K/Akt/mTOR信号通路在大鼠急性骨骼肌钝挫伤修复中的作用及变化趋势,探讨骨骼肌损伤修复的可能生物学机制.方法:SD大鼠随机分为正常对照组和损伤后1d组、3d组、5d组、7d组、14 d组,每组各6只,采用自制打击装置建立腓肠肌钝挫伤模型.HE染色观察各组腓肠肌的形态结构;免疫印迹检测各组腓肠肌中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化的蛋白激酶B (P-AktSer473)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(P-mTORSer2448)的蛋白表达量;逆转录实时定量聚合酶链反应检测腓肠肌中成肌分化抗原(MyoD)、肌细胞生成素(MyoG)的mRNA相对表达量.结果:(1)HE染色结果显示:损伤后1d可见肌细胞变性坏死,炎性细胞浸润;损伤后3d和5d可见新生的成肌细胞和肌管;损伤后7d和14 d可见新生肌细胞和胶原纤维.(2)免疫印迹结果显示:与正常对照组比较,损伤后1d、3d、14 d组的各蛋白表达量升高,差异无统计学意义(P＞0.05);损伤后5d组PI3K、Akt、P-AktSer473表达量显著升高(P＜0.01),mTOR和P-mTORSer2448表达量显著升高(P＜0.05);损伤后7d组PI3K、P-AktSer473、mTOR、P-mTORSer2448表达量显著升高(P＜0.05),Akt表达量显著升高(P＜0.01).(3)逆转录实时定量聚合酶链反应结果显示:与正常对照组比较,损伤后1d组MyoD1和MyoG的mRNA表达量显著升高(P＜0.05,P＜0.01);损伤后3d、5d、7d各组MyoD1和MyoG的mRNA表达量显著升高(P＜0.01);损伤后14 d组MyoG的mRNA表达量显著升高(P＜0.05),MyoD1的mRNA表达量升高,但无统计学意义(P＞0.05).结论:PI3K/Akt/mTOR信号通路具有时间规律性地正向调控骨骼肌钝挫伤后的自我修复,可以作为临床治疗及科学研究骨骼肌损伤的靶点.

背景:超过骨骼肌自我再生能力的广泛损伤可导致不可逆的纤维化、瘢痕形成和功能丧失.以往研究证实,脂肪来源干细胞可用于各种肌组织的再生,其对骨骼肌急性损伤后功能恢复的影响鲜有报道.目的:观察同种异体脂肪干细胞移植对骨骼肌急性损伤大鼠骨骼肌再生与功能恢复的作用.方法:从10只SD大鼠皮下脂肪组织中分离脂肪间充质干细胞,进行流式细胞术鉴定和多向分化能力鉴定.将72只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、胶原蛋白组和脂肪间充质干细胞移植组,后3组建立腓肠肌急性钝挫伤模型,胶原蛋白组分5个注射点在腓肠肌肌腹注射共1 mL大鼠胶原蛋白Ⅰ,脂肪干细胞移植组分5个注射点在腓肠肌肌腹注射含1×106个脂肪干细胞的1 mL大鼠胶原蛋白Ⅰ.移植后7,14,28 d,苏木精-伊红染色观察腓肠肌结构并测量腓肠肌纤维横截面积;用张力传感器测量腓肠肌等长收缩肌力;称量腓肠肌湿质量并计算其与体质量比值;Western blot检测腓肠肌组织中Pax7、MyoG、MyoD的表达.结果与结论:①大鼠脂肪干细胞表达CD29和CD90,不表达CD31和CD34,具有成脂、成骨和成软骨分化能力;②在移植后28 d,脂肪干细胞移植组大鼠腓肠肌损伤部位可观察到新生的骨骼肌纤维,4组大鼠腓肠肌损伤部位均未观察到明显的纤维增生;③在移植后28 d,脂肪干细胞组腓肠肌湿质量及其与体质量比值均高于模型组和胶原蛋白组(P<0.01),脂肪干细胞移植组腓肠肌中肌纤维横截面积大于模型组和胶原蛋白组(P<0.01);④移植后7,14,28 d,模型组、胶原蛋白组、脂肪干细胞移植组腓肠肌等长收缩肌力均低于正常对照组(P<0.01),移植后28 d,脂肪干细胞移植组腓肠肌等长收缩肌力高于模型组和胶原蛋白组(P<0.01);⑤移植后14 d,脂肪干细胞移植组腓肠肌组织中Pax7和MyoD的表达高于模型组和胶原蛋白组(P<0.05),移植后28 d,脂肪干细胞移植组腓肠肌组织中MyoD和MyoG的表达高于模型组和胶原蛋白组(P<0.05);⑥结果表明,脂肪干细胞移植到急性受损骨骼肌中能促进肌纤维的再生和功能恢复.

目的:观察巨刺“足三里”和“阿是穴”对急性骨骼肌钝挫伤大鼠的修复作用,探讨巨刺治疗骨骼肌损伤的机制.方法:雄性SD大鼠分为正常组6只、模型组24只、巨刺组24只,模型组与巨刺组再随机分为3、5、7、14d4个亚组,每个亚组6只.采用自制打击装置建立骨骼肌钝挫伤大鼠模型.巨刺组选取健侧“足三里”以及与患侧“阿是穴”相对应的健侧部位进行电针治疗,15 min/次,1次/d,分别治疗3、5、7、14d.HE染色观察损伤后7、14 d各组大鼠腓肠肌的形态结构及新生肌细胞横截面积;免疫荧光检测损伤后7d各组腓肠肌结蛋白(desmin)阳性表达;免疫印迹法检测损伤后3、5d腓肠肌肌细胞生成素(myoG)和7、14 d腓肠肌快肌型骨骼肌肌球蛋白重链(Fast MyHC)的相对表达量.结果:正常组大鼠腓肠肌横截面的肌细胞大小均匀,排列规则,核位于细胞边缘.损伤后7d,模型组新生肌细胞较少、排列紊乱、大小不一,间质中可见胶原纤维;巨刺组新生肌细胞增多、排列较整齐、大小均一,新生肌细胞面积显著大于模型组(P＜0.05).损伤后14 d,模型组仍可见排列紊乱且大小不一的新生肌细胞,间质中仍可见胶原纤维;巨刺组可见大量排列整齐且大小均一的趋于成熟的新生肌细胞,新生肌细胞面积显著大于模型组(P＜0.001).免疫荧光结果显示:在正常组中,desmin表达于肌细胞膜上.损伤后7d,模型组desmin多数表达于新生肌细胞胞质内,阳性表达的细胞小且排列紊乱、大小不一,模型组desmin表达显著高于正常组(P＜0.001);巨刺组desmin多数表达于新生肌细胞膜上,接近正常组肌细胞状态,且新生肌细胞大小均一、排列整齐,巨刺组desmin表达量与模型组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).免疫印迹结果显示:损伤后3、5d,与正常组比较,模型组腓肠肌myoG的表达量明显升高(P＜0.001);与模型组比较,巨刺组腓肠肌myoG表达量明显升高(P＜0.001).损伤后7、14 d,与正常组比较,模型组腓肠肌Fast MyHC的表达量明显降低(P＜0.001);与模型组比较,巨刺组腓肠肌Fast MyHC的表达量明显升高(P＜0.01).结论:巨刺“足三里”和“阿是穴”可能通过正向调控急性骨骼肌钝挫伤大鼠腓肠肌myoG和Fast MyHC的表达,促进损伤骨骼肌的修复.

喉损伤是耳鼻喉科较少见的急危症之一.闭合性喉外伤因颈部外部损伤不明显,加上急性钝挫伤早期数小时内无明显喉部症状或合并全身多发伤,容易被忽略或漏诊,有可能造成严重的并发症甚至危及生命,因此,临床须引起高度重视.该文报告军事训练致闭合性喉外伤1例.患者因在军事训练过程中颈部甲状软骨处意外受到撞击,发生颈部畸形伴声音嘶哑13天就诊.电子喉镜检查双侧环杓关节及环甲关节未见脱位,双侧声带运动正常,声带闭合不全;CT检查示左侧甲状软骨板局部塌陷,右侧甲状软骨向右翘起,环状软骨未见损伤.诊断为闭合性喉外伤(Ⅲ度)及甲状软骨骨折.因患者要求采用非手术治疗,给予严密观察,辅以气道湿化及糖皮质激素等治疗.观察治疗1个月余,声嘶较受伤后稍有改善,颈前区畸形无改善,未出现喉狭窄表现.建议基层部队在日常训练中应加强意外伤防护;同时,提高基层医护人员对闭合性喉外伤的认识水平,及早诊治,避免或减少严重并发症的发生.

目的:探讨骨骼肌钝挫伤后线粒体自噬相关基因与自噬体变化的分子机制.方法:Wistar雄性大鼠64只,随机分为对照组、钝挫伤组(按照取材时间分为12h组、2d组、5d组、7d组、10d组、15d组、30 d组).采用重物下落装置导致右小腿内侧面(其皮下为腓肠肌中段)一次打击伤,建立急性骨骼肌钝挫伤模型,通过Western-Blotting和qRT-PCR技术分别检测钝挫伤后腓肠肌缺氧及自噬相关因子,包括低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、腺苷酸活化蛋白激酶α2亚基(AMPKα2)、Bcl-2腺病毒E1B19ku相关蛋白3(BNIP3)和Bcl-2家族的类NIP3蛋白(NIX)的蛋白和mRNA表达变化情况;透射电镜观察受损部位不同恢复时间的超微结构及自噬体形成情况.结果:(1)钝挫伤后,HIF-1α、AMPKα2蛋白表达在12 h、2 d达到峰值,至伤后10 d,HIF-1α表达均明显高于对照组(P<0.05);AMPKα2表达在伤后5 d仍显著高于对照组(P<0.05),至10 d回落至正常水平;BNIP3持续高表达至5 d后开始回落,但至10 d仍高于对照组;NIX表达峰值出现在伤后12 h、2 d,持续高表达至7 d.(2)钝挫伤后,相关基因表达水平,Hif-1α与Ampkα2 mRNA在2 d显著高于对照组(P<0.01),至5 d表达下降但仍高于对照组(P<0.05),随后回落至正常水平;Bnip3、Nix的mRNA变化情况与其蛋白表现基本一致.损伤后12 h在单个网孔视野中即可见到多个自噬体,至2～7d自噬体数量逐渐增多,10d后自噬体数量比钝挫伤后12h～7d组相比呈现减少趋势,至15 d后自噬体数量逐渐减少.结论:骨骼肌钝挫伤发生后,损伤早期代谢调控因子AMPKα2、缺氧敏感因子HIF-1α表达变化情况表明损伤后受损骨骼肌内部出现能量危机并形成缺氧环境;线粒体自噬、细胞凋亡相关因子BNIP3、NIX表达变化表明损伤后线粒体自噬被启动,缺氧诱导了骨骼肌钝挫伤早期的线粒体自噬;缺氧诱导的线粒体自噬可及时清除受损线粒体,维持线粒体质量、为新生线粒体提供原料,从而减小损伤程度,以利于受损骨骼肌的快速恢复,这可能是损伤发生后机体的一种代偿性机制.