目的:探讨miR-155通过调控巨噬细胞极化发挥清除病原菌的作用和机制。方法:使用脂多糖/干扰素-γ(lipopolysaccharide/interferon-γ，LPS/IFN-γ)或白细胞介素(interleukin，IL)-4分别处理RAW264.7细胞和骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophage，BMDM)，24 h后检测miR-155表达水平；将RAW264.7细胞和BMDM分别过表达、抑制miR-155后，检测巨噬细胞极化表型转化，以及活性氧、活性氮和细胞因子释放；将miR-155过表达的BMDM进行M1型诱导，取上清培养大肠杆菌不同时间后，检测大肠杆菌菌落形成能力。结果:LPS/IFN-γ的添加可以明显促进miR-155在RAW264.7细胞和BMDM中的表达，而IL-4的诱导降低BMDM中miR-155水平；进一步在RAW264.7细胞和BMDM中过表达miR-155后，可促进M1型极化分子转录、抑制M2型极化分子标志物的表达；反过来，通过反义寡核苷酸抑制miR-155后，可以抑制M1型极化而促进M2型极化；同时，过表达miR-155的巨噬细胞分泌的一氧化氮(nitric oxide，NO)、活性氧(reactive oxygen species，ROS)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)显著性被促进；过表达miR-155的M1型极化BMDM培养上清明显可以减少大肠杆菌菌落形成数量。结论:miR-155通过调控巨噬细胞极化，影响其ROS/NO和细胞因子的分泌，参与巨噬细胞清除、杀伤病原菌的过程。

目的:尿素酶B(UreB)是幽门螺杆菌疫苗设计的重点候选抗原，本研究拟探究UreB对巨噬细胞的免疫调控作用及潜在机制。方法:用重组UreB蛋白刺激小鼠骨髓来源M0型巨噬细胞，经流式细胞术和ELISA检测巨噬细胞凋亡、极化和抗原提呈分子表达；共培养试验、CFSE和流式细胞术检测CD4 +T细胞增殖及IFN-γ表达水平。构建UreB截短体，NanoBiT和免疫共沉淀检测UreB与TLR2结合表位。 结果:UreB可诱导巨噬细胞凋亡并逆转脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化，促进巨噬细胞向M2型极化。同时，UreB也能抑制巨噬细胞抗原提呈分子MHCⅡ和CD86的表达，并进而抑制CD4 +T细胞增殖和IFN-γ表达。分子机制研究表明UreB主要依赖于C端7个氨基酸残基与TLR2结合发挥以上调控作用。 结论:本研究证实UreB可通过C端7个氨基酸残基与TLR2结合发挥免疫负调控功能，有助于以UreB为基础的幽门螺杆菌疫苗设计及优化。

目的:研究结直肠癌荷瘤小鼠中广谱抗生素的使用及其诱导的抗生素耐药菌对氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)化疗疗效的影响及其中的抗肿瘤免疫相关机制。方法:结直肠癌细胞CT26皮下荷瘤小鼠随机分成4组：荷瘤对照组，氨苄青霉素、链霉素和多黏菌素处理的抗生素组，5-FU化疗组和抗生素+5-FU组。监测记录小鼠肿瘤体积、体重。末次化疗后第7天，流式细胞术检测脾脏中免疫细胞亚群比例和与CT26共培养后增殖的CD8 +T细胞比例；16S rRNA测序分析肠道菌群组成，并分离培养各组小鼠肠系膜淋巴结中的细菌。用分离的细菌刺激骨髓来源的巨噬细胞，定量PCR法检测M1型和M2型巨噬细胞标志分子的表达，流式细胞术检测与细菌处理的巨噬细胞进行共培养的CD8 +T细胞的增殖。将分离自抗生素+5-FU组的细菌和等体积PBS分别灌胃至进行5-FU化疗的CT26荷瘤小鼠，检测小鼠肿瘤大小、肠道菌群组成和与CT26共培养后增殖的CD8 +T细胞比例。 结果:抗生素+5-FU组小鼠的肿瘤体积大于5-FU组，小鼠体重显著低于5-FU组。抗生素的使用对脾脏CD4 +T细胞、CD8 +T细胞、中性粒细胞的比例影响不显著，但促进单核细胞比例升高；抗生素+5-FU组体外增殖的肿瘤特异性CD8 +T细胞比例下降，低于5-FU组。与对照组和5-FU组比较，抗生素的使用导致肠道菌群组成发生变化，菌群α多样性指数明显降低；从抗生素组、5-FU组和抗生素+5-FU组小鼠的淋巴结中分别培养出大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌。奇异变形杆菌处理的骨髓来源的巨噬细胞显著表达M2型巨噬细胞标志分子精氨酸酶，且与该组巨噬细胞共培养后增殖的CD8 +T细胞比例下降。奇异变形杆菌灌胃后小鼠肠道菌群中有变形杆菌属细菌富集，对肿瘤生长没有明显影响，但体外增殖的肿瘤特异性CD8 +T细胞比例下降。 结论:广谱抗生素抑制化疗疗效及肿瘤特异性CD8 +T细胞的增殖，抗生素耐药菌可能在其中发挥作用。

肺炎克雷伯菌是一种常见的有荚膜、不能活动的兼性厌氧革兰阴性菌，其广泛的表型和丰富的遗传特性使其成为公共卫生的严重威胁。此文首先介绍肺炎克雷伯菌感染的流行病学特征；其次探讨肺炎克雷伯菌如何通过产生大量的荚膜多糖以及利用宿主补体系统的差异来逃避宿主血清补体的攻击；最后讨论肺炎克雷伯菌与巨噬细胞、中性粒细胞和骨髓来源抑制细胞样细胞等先天性免疫细胞的相互作用。深入理解以上机制将有助于开发更准确的诊断工具和免疫治疗策略，以便更有效地应对肺炎克雷伯菌的感染。

目的:探讨骨髓来源树突状细胞(BMDCs)中微小RNA-338-3p(miR-338-3p)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)光感受器细胞间维生素A类结合蛋白1-20(IRBP 1-20)特异性Th17细胞的调控。 方法:分离野生型C57BL/6小鼠股骨和胫骨，冲洗骨髓腔得到骨髓细胞，利用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL)-4定向诱导分化为BMDCs。诱导培养第5天，将未成熟的BMDCs分为miR-338-3p拟似物转染组和拟似物阴性对照组，分别转染miR-338-3p拟似物和拟似物阴性对照。转染后24 h，加入100 ng/ml脂多糖刺激BMDCs成熟。采用实时荧光定量PCR检测BMDCs中miR-338-3p及IL-6、IL-23、IL-1β mRNA表达。采用IRBP 1-20、弗氏不完全佐剂(IFA)及结核分枝杆菌H37Ra主动免疫小鼠诱导EAU模型，免疫后第13天，分离EAU小鼠脾脏及淋巴结T细胞，分别将miR-338-3p拟似物转染组和拟似物阴性对照组BMDCs与T细胞在含有IRBP 1-20的培养基中共培养，Th17细胞条件诱导，酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测共培养上清液中IL-17质量浓度；实时荧光定量PCR检测共培养细胞中维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、IL-17 mRNA相对表达量；流式细胞仪检测共培养细胞中IL-17 +细胞比率。此外，为进一步验证BMDCs中miR-338-3p对Th17细胞的调控作用，分别将miR-338-3p抑制剂或抑制剂阴性对照转染的BMDCs与EAU小鼠脾脏及淋巴结T细胞共培养，ELISA法检测共培养上清液中IL-17质量浓度。 结果:miR-338-3p拟似物转染组BMDCs中miR-338-3p相对表达量较拟似物阴性对照组明显升高，差异有统计学意义( t＝6.861， P＝0.002)。miR-338-3p拟似物转染组共培养细胞中RORγt、IL-17 mRNA相对表达量分别为1.34±0.16和1.33±0.16，明显高于阴性对照组的1.00±0.01和1.00±0.01，差异均有统计学意义( t＝3.632， P＝0.022； t＝3.681， P＝0.021)；ELISA检测结果显示，miR-338-3p拟似物转染组共培养上清液中IL-17质量浓度为(5 941.00±452.40)pg/ml，明显高于拟似物阴性对照组的(4 299.00±348.30)pg/ml，差异有统计学意义( t＝4.979， P＝0.008)，miR-338-3p抑制剂转染组共培养上清液中IL-17质量浓度为(3 092.00±200.90)pg/ml，明显低于抑制剂阴性对照组的(4 063.00±131.50)pg/ml，差异有统计学意义( t＝7.005， P＝0.002)；流式细胞仪检测结果显示，miR-338-3p拟似物转染组共培养细胞中IL-17 +细胞比例为(8.03±1.35)%，明显高于拟似物阴性对照组的(4.52±0.73)%，差异有统计学意义( t＝3.968， P＝0.017)。miR-338-3p拟似物转染组BMDCs中IL-6、IL-23和IL-1β mRNA相对表达量分别为2.23±0.21、2.21±0.56和2.32±0.43，明显高于拟似物阴性对照组的1.00±0.06、1.00±0.07和1.01±0.15，差异均有统计学意义( t＝10.290， P＝0.001； t＝3.747， P＝0.020； t＝5.280， P＝0.006)。 结论:miR-338-3p过表达可以增强BMDCs中Th17细胞极化相关因子IL-6、IL-23和IL-1β的表达，促进IRBP 1-20特异性Th17细胞活化。

目的:探讨白念珠菌对小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）焦亡的影响。方法:通过活细胞工作站实时观察白念珠菌[感染复数（MOI）= 50，下同]体外诱导BMDM后是否发生焦亡；将BMDM分为对照组、白念珠菌组，分别用磷酸盐缓冲液和白念珠菌酵母诱导BMDM 6 h，实时荧光定量PCR检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、白细胞介素1β（IL-1β）、IL-18 mRNA表达水平，Western印迹法检测NLRP3、胱天蛋白酶1（Caspase-1）、Gasdermin D（GSDMD）的表达及剪切水平。用白念珠菌诱导BMDM不同时间（0、10、15、20及25 h）后，酶联免疫吸附试验检测IL-1β、IL-18分泌水平。白念珠菌体外诱导野生型（WT）BMDM及GSDMD敲除（KO）BMDM 15 min，采用流式细胞仪比较WT、GSDMD KO BMDM对白念珠菌的吞噬率；诱导6 h后，采用流式细胞仪及乳酸脱氢酶（LDH）释放法分别检测WT、GSDMD KO BMDM的死亡率。分别设置空白对照组、对照组、样品最大酶活性对照孔组、IL-1β组、白念珠菌组、IL-1β +白念珠菌组，用IL-1β和/或白念珠菌酵母诱导BMDM后用LDH释放法分析WT及GSDMD KO BMDM死亡率。采用非配对 t检验、Kruskal-Wallis检验、方差分析等统计学方法进行统计分析。 结果:白念珠菌体外诱导BMDM后细胞可出现气球样变及出泡现象，证实焦亡发生；与对照组相比，白念珠菌组诱导BMDM 6 h后NLRP3、IL-1β的mRNA表达水平明显升高（ t = 13.02、17.51， P =或<0.001），而IL-18 mRNA表达水平无明显变化（ P = 0.486），且白念珠菌诱导可引起炎症小体NLRP3表达增多及Caspase-1、GSDMD剪切。白念珠菌诱导BMDM不同时间（0、10、15、20及25 h）后IL-1β的分泌水平随时间逐渐升高（ H = 12.90， P = 0.012），而IL-18的分泌水平无明显变化（ F = 0.48， P = 0.753），且GSDMD KO组BMDM的IL-1β分泌水平低于WT BMDM组（ F = 24.22， P = 0.008）。白念珠菌体外诱导15 min后，GSDMD KO BMDM[（50.3 ± 1.10）%]对白念珠菌的吞噬率低于WT BMDM[（58.53 ± 1.19）%， t = 5.09， P = 0.007]；白念珠菌体外诱导6 h后，流式细胞仪检测显示GSDMD KO组BMDM的死亡率（38.40% ± 0.50%）高于WT组BMDM（34.37% ± 0.52%）， t = 4.72， P = 0.009；LDH检测同样显示GSDMD KO BMDM的死亡率（22.52% ± 0.18%）高于WT BMDM（12.48% ± 0.15%）， t = 42.36， P<0.001；IL-1β预处理后予白念珠菌体外诱导的WT BMDM及GSDMD KO BMDM的细胞死亡率均较单纯白念珠菌诱导组降低（均 P<0.001）。 结论:白念珠菌可诱导BMDM发生焦亡，焦亡的发生可促进IL-1β释放，并通过提高巨噬细胞的免疫活性，降低巨噬细胞死亡率。

目的:探索骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cell，BMMSC）来源凋亡囊泡对小鼠巨噬细胞系RAW264.7极化状态的影响及对牙龈卟啉单胞菌（ Porphyromonas gingivalis，Pg）诱导的促炎状态巨噬细胞的调控，为牙周炎治疗提供依据。 方法:使用Operetta CLS高内涵分析系统动态观察星形孢菌素（staurosporine，STS）诱导的BMMSC的凋亡过程；使用场发射扫描电镜、动态光散射技术、流动电势法测量凋亡囊泡相关表征；使用Operetta CLS高内涵分析系统动态观察小鼠巨噬细胞系RAW264.7对5-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯（5-carboxy-tetramethylrhodamine，succinimidyl ester，5-TAMRA-SE）标记的凋亡囊泡的吞噬作用；采用实时荧光定量PCR检测精氨酸合酶-1（arginase-1，Arg-1）mRNA相对表达量；采用细胞免疫荧光、蛋白质印迹法检测凋亡囊泡对Pg来源的脂多糖（lipopolysaccharide from Pg，Pg-LPS）诱导的RAW264.7中诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）表达的影响；采用酶联免疫吸附测定法检测Pg-LPS诱导的促炎状态RAW264.7培养上清液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factro-α，TNF-α）的分泌情况。结果:0.5 μmol/L STS处理12 h后小鼠BMMSC形态皱缩，周围有明显的凋亡囊泡产生；凋亡囊泡的粒径为100~1 000 nm，平均Zeta电势为-16.6 mV；RAW264.7可以通过伪足吞噬小鼠BMMSC来源的凋亡囊泡；小鼠BMMSC来源的凋亡囊泡联合白介素-4（interleukin4，IL-4）刺激的RAW 264.7 Arg-1 mRNA表达量（261.97±15.91）较单独IL-4刺激的 mRNA表达量（115.29±15.42）显著升高（ P<0.01）；凋亡囊泡与Pg-LPS共同作用下，RAW 264.7 iNOS阳性细胞数量［（39.33±4.70）个］显著低于Pg-LPS单独诱导的RAW 264.7 iNOS阳性细胞数量［（95.33±4.70）个］（ P=0.007），RAW264.7 iNOS蛋白相对表达量（5.84±1.05）显著低于Pg-LPS单独诱导的RAW 264.7 iNOS蛋白相对表达量（14.91±3.87）（ P<0.01），RAW264.7细胞培养上清液中TNF-α含量［（21 899.71±409.73） ng/L］显著低于Pg-LPS单独诱导下RAW264.7细胞培养上清液中TNF-α含量［（71 296.50±2 344.22） ng/L］（ P =0.003）。 结论:小鼠BMMSC来源的凋亡囊泡可以调控巨噬细胞极化状态，并可减轻Pg-LPS诱导下巨噬细胞的促炎状态。

目的:探讨烟曲霉对小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）自噬流的影响。方法:灭活烟曲霉体外诱导小鼠BMDM不同时间（0、0.5、4、12 h），提取细胞蛋白，Western印迹法检测自噬关键蛋白LC3-Ⅰ型/Ⅱ型的转换及磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）Ser2481的蛋白水平。用烟曲霉和溶酶体阻断剂[包括半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64d+胃蛋白酶抑制剂pepstatin、巴佛洛霉素-A1（BAF-A1）、氯化铵、氯喹]单独或联合体外诱导小鼠BMDM不同时间（4、12 h）后，Western印迹法检测烟曲霉对新生的LC3-Ⅱ、细胞基础自噬流的影响，并通过共聚焦荧光显微镜观察烟曲霉与LC3、Rubicon（RUN domain Beclin-1-interacting and cysteine-rich-domain-containing protein）的共定位关系。不同处理时间数据结果采用非匹配 t检验分析，烟曲霉孢子和自噬溶酶体阻断剂两因素处理数据结果采用2 × 2析因分析方法。 结果:Western印迹显示，与对照组（0 h组）比较，烟曲霉体外诱导小鼠BMDM 0.5、4、12 h后细胞内LC3-Ⅱ表达逐渐增加，差异均有统计学意义（ t值分别为6.58、3.28、3.02，均 P < 0.05），但各组p-mTOR蛋白水平差异无统计学意义（ t值分别为0.441、0.477、0.382， P值分别为0.682、0.660、0.722）。与单独氯喹处理BMDM 4 h和12 h相比，烟曲霉联合氯喹处理后LC3-Ⅱ进一步增高，差异均有统计学意义（ t = 2.13、2.78，均 P < 0.05）。与单独氯化铵处理BMDM 4 h和12 h相比，烟曲霉联合氯化铵处理后LC3-Ⅱ进一步增高，差异均有统计学意义（ t = 2.92、2.92，均 P < 0.05）。与单独BAF-A1处理BMDM 4 h和12 h相比，烟曲霉联合BAF-A1处理后LC3-Ⅱ进一步增高，差异有统计学意义（ t = 2.13、2.13，均 P < 0.05）。与单独E-64d + pepstatin处理BMDM 4 h和12 h相比，烟曲霉联合E-64d + pepstatin处理后LC3-Ⅱ进一步增高，差异有统计学意义（ t = 2.13、2.92，均 P < 0.05）。用钙荧光白荧光标记的烟曲霉孢子刺激BMDM 8 h后，共聚焦荧光显微镜显示LC3、Rubicon主要包绕于烟曲霉周围，与烟曲霉均有共定位关系。 结论:烟曲霉体外诱导可增加小鼠BMDM基础自噬流。

目的:探讨集落刺激因子1受体（colony-stimulating factor 1 receptor，CSF-1R）抑制剂培西达替尼（pexidartinib，PLX3397）对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激下的骨髓来源巨噬细胞（bone marrow-derived macrophages，BMDM）衰老的调节作用。方法:从10只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠（贵州医科大学实验动物中心获取）的股骨和胫骨分离、培养BMDM，将BMDM分为空白对照组、LPS组（1 μg/ml LPS处理24 h）和低、中、高浓度PLX3397预处理组（分别给予100、500和1 000 nmol/L PLX3397处理4 h后，再以1 μg/ml LPS处理24 h），采用细胞计数（cell counting kit-8，CCK-8）试剂盒检测细胞活力；通过衰老相关β-半乳糖苷酶（senescence-associated-β-galactosidase，SA-β-gal）染色检测细胞衰老；蛋白质印迹法检测细胞周期依赖性激酶抑制因子p16、p21和CSF-1R的蛋白表达；细胞免疫荧光法检测p16、p21在细胞内的表达；实时定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）检测衰老相关分泌表型（senescence-associated secretory phenotype，SASP）因子包括白细胞介素（interleukin，IL）、趋化因子1/10（chemokine-1/10，CXCL-1/10）、基质金属蛋白酶8（matrix metalloproteinase-8，MMP-8）、转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）的mRNA表达。结果:中、高浓度PLX3397预处理组SA-β-gal染色阳性细胞率［分别为（39.33±4.93）%、（36.33 ±3.06）%］均较LPS组［（52.00±3.00）%］显著下调（ P=0.020， P=0.005）；低、中、高浓度PLX3397预处理组CSF-1R的蛋白表达（分别为0.74±0.18、0.61±0.07、0.54±0.06）均较LPS组（1.16±0.08）显著下调（ P=0.013， P=0.002， P<0.001）；低、中、高浓度PLX3397预处理组CSF-1R的mRNA表达（分别为1.04±0.06、0.90±0.05、1.18±0.08）均较LPS组（2.90±0.25）显著下调（ P<0.001）；低、中、高浓度PLX3397预处理组p16平均荧光强度（分别为49.76±3.65、48.21±1.72、47.99±1.26）均显著低于LPS组（66.88±5.85）（ P=0.001， P<0.001， P<0.001）；中、高浓度PLX3397预处理组p21平均荧光强度（分别为34.43±3.62、30.13±0.86）均较LPS组（46.82±5.33）显著下调（ P=0.043， P=0.007）；低、中、高浓度PLX3397预处理组p16蛋白表达（分别为0.56 ±0.04、0.55 ±0.04、0.35 ±0.19）均较LPS组（0.98±0.10）显著下调（ P=0.003， P=0.002， P<0.001）。低、中、高浓度PLX3397预处理组p21蛋白表达（分别为0.69±0.20、0.42±0.08、0.26±0.14）均较于LPS组（1.16 ±0.24）显著降低（ P=0.032， P=0.002， P<0.001）。RT-qPCR结果显示，与LPS组相比，PLX3397预处理组IL-6、IL-1β、CXCL-1、CXCL-10、MMP-8的表达均显著降低（ P<0.001），TGF-β mRNA表达水平显著升高（ P<0.001）。 结论:LPS可通过激活BMDM表面CSF-1R诱发细胞衰老，分泌SASP因子，加重局部炎症反应；CSF-1R抑制剂PLX3397可减弱LPS关联的CSF-1R激活，抑制LPS诱导的BMDM衰老。

目的:探讨白念珠菌菌丝对小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）自噬流的影响。方法:白念珠菌菌丝分别体外诱导BMDM细胞0.5、4、12 h，以不加菌丝处理的0 h组作为对照，Western印迹法检测各时间点自噬关键蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转换及磷酸化雷帕霉素机制性靶蛋白（p-mTOR）的表达。白念珠菌菌丝分别联合4种溶酶体阻断剂，包括半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64d+胃蛋白酶抑制剂pepstatin、巴弗洛霉素-A1（BAF-A1）、氯化铵及氯喹，体外诱导小鼠BMDM细胞4、12 h，观察白念珠菌菌丝对BMDM细胞基础自噬流的影响。统计分析采用非配对 t检验、析因设计的方差分析及LSD- t检验。 结果:白念珠菌菌丝体外处理小鼠BMDM 0.5、4和12 h后，与0 h组（0.983±0.030）相比，LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转换均增加（1.254±0.118、1.629±0.391、1.598±0.379），差异有统计学意义（ t值分别为3.875、2.856、2.804，均 P< 0.05），但各组p-mTOR的蛋白表达无明显差异。白念珠菌菌丝联合E-64d + pepstatin体外处理BMDM细胞4和12 h后，LC3-Ⅱ的蓄积水平较E-64d + pepstatin单独处理组明显增高，差异均有统计学意义（ t值分别3.691、6.648，均 P< 0.05）。与相应溶酶体阻断剂组相比，白念珠菌菌丝联合BAF-A1、氯化铵或氯喹4和12 h后，LC3-Ⅱ的蓄积水平均显著升高（均 P< 0.05）。 结论:白念珠菌菌丝体外诱导可增加小鼠BMDM细胞基础自噬流中LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转换。