目的:初步探讨白细胞介素（IL）-23受体（IL-23R）过表达对实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）模型小鼠辅助性T细胞17 （Th17细胞）/调节性T细胞（Treg细胞）平衡的影响。方法:8周龄雌性C57BL/6J小鼠12只，随机分为LV-Ctrl组、LV-IL-23R组，每组各6只。两组小鼠经尾静脉分别注射LV-Ctrl、LV-IL-23R慢病毒；注射后7 d采用光感受器间维生素A类结合蛋白 1-20主动免疫构建EAU小鼠模型。免疫后13 d开始，每2天使用间接检眼镜观察小鼠眼底并进行临床评分。免疫后30 d，苏木精-伊红染色观察小鼠视网膜组织病理学改变。酶联免疫吸附测定检测两组小鼠血清中IL-17水平；流式细胞仪检测Th17细胞和Treg细胞比例；实时荧光定量聚合酶链反应检测IL-23R、IL-17、维甲酸相关孤儿受体γt （RORγt）、IL-10和叉头状转录因子p3 (Foxp3） mRNA相对表达量。组间比较采用重复测量方差分析、独立样本Mann-Whitney U检验和独立样本 t检验。 结果:与LV-Ctrl组比较，LV-IL-23R组小鼠视网膜炎症反应更重。免疫后13 d，LV-IL-23R组、LV-Ctrl组小鼠眼底炎症评分差异无统计学意义（ t=-2.001， P=0.058 ）；免疫后15~ 29 d，LV-IL-23R组小鼠眼底炎症评分均高于LV-Ctrl组，差异有统计学意义（ t=-4.429、-6.578、-7.768、-10.183、-6.325、-7.304、-4.841、-6.872， P<0.001）。组织病理学检查显示，与LV-Ctrl组比较，LV-IL-23R组眼底炎性细胞浸润增多，视网膜结构破坏更为严重，组织病理学评分显著升高，差异有统计学意义（ t=-4.339， P=0.001）。与LV-Ctrl组比较、LV-IL-23R组小鼠脾脏中IL-23R mRNA相对表达量显著升高，差异有统计学意义（ Z=2.087， P=0.037）；T细胞中IL-17、RORγt mRNA相对表达量增加，IL-10、Foxp3 mRNA相对表达量降低，差异均有统计学意义（ t=-6.313、-5.922、4.844、7.572， P=0.003、0.004、0.008、0.002 ）。与LV-Ctrl组比较、LV-IL-23R组小鼠血清中IL-17水平明显升高，差异有统计学意义（ t=-5.423 ， P=0.002）；脾脏和淋巴结中Th17细胞比例明显升高，Treg细胞比例显著降低，差异有统计学意义（ t=-4.290、3.700， P=0.002、0.006）。 结论:IL-23R过表达可促使EAU小鼠的Th17/Treg失衡，加重EAU临床及病理表现。

非编码RNA(ncRNA)是一类具有多种生物学功能但不能翻译蛋白质的RNA。葡萄膜炎是常见的致盲眼病，易反复发作且治疗棘手，其发病机制尚不完全清楚。近年来研究表明，ncRNA在人类葡萄膜炎和实验性自身免疫性葡萄膜炎发病过程中有着重要的调控作用，可通过调节与免疫相关的重要信号通路、T淋巴细胞或抗原提呈细胞的免疫应答及炎性因子分泌等方式参与葡萄膜炎发病过程，靶向某些ncRNA对葡萄膜炎的治疗具有一定意义。此外，ncRNA的单核苷酸多态性及拷贝数变异与葡萄膜炎的遗传易感性高度相关。因此，ncRNA可能作为葡萄炎诊断、判断病情及预后的生物标志物，靶向ncRNA可能成为治疗葡萄膜炎的新策略。本文主要对微小RNA和长链非编码RNA在葡萄膜炎发病中的调控作用进行综述。

目的:探讨骨髓来源树突状细胞(BMDCs)中微小RNA-338-3p(miR-338-3p)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)光感受器细胞间维生素A类结合蛋白1-20(IRBP 1-20)特异性Th17细胞的调控。 方法:分离野生型C57BL/6小鼠股骨和胫骨，冲洗骨髓腔得到骨髓细胞，利用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL)-4定向诱导分化为BMDCs。诱导培养第5天，将未成熟的BMDCs分为miR-338-3p拟似物转染组和拟似物阴性对照组，分别转染miR-338-3p拟似物和拟似物阴性对照。转染后24 h，加入100 ng/ml脂多糖刺激BMDCs成熟。采用实时荧光定量PCR检测BMDCs中miR-338-3p及IL-6、IL-23、IL-1β mRNA表达。采用IRBP 1-20、弗氏不完全佐剂(IFA)及结核分枝杆菌H37Ra主动免疫小鼠诱导EAU模型，免疫后第13天，分离EAU小鼠脾脏及淋巴结T细胞，分别将miR-338-3p拟似物转染组和拟似物阴性对照组BMDCs与T细胞在含有IRBP 1-20的培养基中共培养，Th17细胞条件诱导，酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测共培养上清液中IL-17质量浓度；实时荧光定量PCR检测共培养细胞中维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、IL-17 mRNA相对表达量；流式细胞仪检测共培养细胞中IL-17 +细胞比率。此外，为进一步验证BMDCs中miR-338-3p对Th17细胞的调控作用，分别将miR-338-3p抑制剂或抑制剂阴性对照转染的BMDCs与EAU小鼠脾脏及淋巴结T细胞共培养，ELISA法检测共培养上清液中IL-17质量浓度。 结果:miR-338-3p拟似物转染组BMDCs中miR-338-3p相对表达量较拟似物阴性对照组明显升高，差异有统计学意义( t＝6.861， P＝0.002)。miR-338-3p拟似物转染组共培养细胞中RORγt、IL-17 mRNA相对表达量分别为1.34±0.16和1.33±0.16，明显高于阴性对照组的1.00±0.01和1.00±0.01，差异均有统计学意义( t＝3.632， P＝0.022； t＝3.681， P＝0.021)；ELISA检测结果显示，miR-338-3p拟似物转染组共培养上清液中IL-17质量浓度为(5 941.00±452.40)pg/ml，明显高于拟似物阴性对照组的(4 299.00±348.30)pg/ml，差异有统计学意义( t＝4.979， P＝0.008)，miR-338-3p抑制剂转染组共培养上清液中IL-17质量浓度为(3 092.00±200.90)pg/ml，明显低于抑制剂阴性对照组的(4 063.00±131.50)pg/ml，差异有统计学意义( t＝7.005， P＝0.002)；流式细胞仪检测结果显示，miR-338-3p拟似物转染组共培养细胞中IL-17 +细胞比例为(8.03±1.35)%，明显高于拟似物阴性对照组的(4.52±0.73)%，差异有统计学意义( t＝3.968， P＝0.017)。miR-338-3p拟似物转染组BMDCs中IL-6、IL-23和IL-1β mRNA相对表达量分别为2.23±0.21、2.21±0.56和2.32±0.43，明显高于拟似物阴性对照组的1.00±0.06、1.00±0.07和1.01±0.15，差异均有统计学意义( t＝10.290， P＝0.001； t＝3.747， P＝0.020； t＝5.280， P＝0.006)。 结论:miR-338-3p过表达可以增强BMDCs中Th17细胞极化相关因子IL-6、IL-23和IL-1β的表达，促进IRBP 1-20特异性Th17细胞活化。

目的:初步探讨MMP-9抑制剂阻断RPE细胞表面CD73脱落，防治实验性自身免疫葡萄膜炎（EAU）的机制。方法:体外培养分离自野生型C57BL/6小鼠及CD73基因敲除（CD73 -/-）小鼠的RPE细胞，以脂多糖及TNF-α共同干预，诱导RPE表面CD73脱落。依据是否同时加入MMP-9抑制剂CTK8G1150（终浓度5.0 μmol/L ），将两种小鼠培养的RPE细胞分别设为MMP-9抑制剂干预组及无干预对照组。每组细胞给予溶媒、1 μmol/L单磷酸腺苷（AMP）、1 μmol/L AMP及3 μmol/L 5'-α,β-亚甲基-二磷酸腺苷（APCP）（AMP+ APCP）进行干预。氚化胸苷掺入法检测不同组别RPE细胞对CD4 + T细胞增生的刺激作用。分别以野生型B6小鼠及CD73 -/-小鼠为受体，过继免疫诱发EAU。受体小鼠分别随机分为MMP-9抑制剂干预组及未干预对照组，于过继免疫后4、7、10 d视网膜下腔分别注射CTK8G1150或溶媒。实时定量PCR （RT-PCR）、Western blot法检测受体小鼠RPE细胞中CD73 mRNA及蛋白表达。组间比较采用单因素方差分析。 结果:刺激方式为AMP时，C57BL/6 MMP-9抑制剂干预组CD4 + T细胞的增生能力较无干预组显著下降，差异有统计学意义（ F=13.28， P<0.01）；溶媒、AMP + APCP时，两组CD4 + T细胞增生能力比较，差异无统计学意义（ F=7.78、6.58， P>0.05）。CD73 -/-MMP-9抑制剂干预组、无干预组不同刺激方式CD4 + T细胞增生能力比较，差异均无统计学意义（ F=5.24、6.12、7.04， P>0.05）。RT-PCR检测结果显示，B6受体小鼠MMP-9抑制剂组、无干预对照组RPE细胞中CD73 mRNA相对表达量比较，差异无统计学意义（ F=6.54， P>0.05）。Western blot检测结果显示，B6受体小鼠MMP-9抑制剂组RPE细胞中CD73蛋白表达较未干预对照组显著增加，差异有统计学意义（ F=15.24， P<0.01 ）。 结论:MMP-9抑制剂阻断RPE细胞表面CD73的脱落对EAU具有保护作用。

目的:观察实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）模型大鼠CD4 +T细胞中miR-142- 5p及叉头转录蛋白O亚族3（FOXO3）的表达，初步探讨两者靶向关系以及对EAU的影响。 方法:健康雄性Lewis大鼠10只随机分为模型组、对照组。模型组大鼠以过继免疫方式诱导EAU动物模型。免疫后20 d，取对照组、模型组大鼠眼球和引流淋巴结提取CD4 +T细胞，并分为对照组、模型组、mimic-阴性对照（NC）组、miR-142-5p-mimic组、小干扰（si）-NC组、si-FOXO3组进行体外实验。miR-142-5p-mimic组、si-FOXO3组分别转染miR- 142-5p-mimic、si-FOXO3。健康雄性Lewis大鼠25只随机分为模型组、转染mimic-NC组、转染miR-142-5p-mimic组、转染si-NC组、转染si-FOXO3组，分别注射上述体外实验组细胞。免疫后4、8、12、16、20 d行裂隙灯显微镜检查并进行EAU评分；免疫后20 d，苏木精-伊红染色行组织病理学分级。实时荧光定量聚合酶链反应检测各组大鼠CD4 +T细胞和眼组织中miR-142-5p、FOXO3 mRNA相对表达量及细胞培养上清液中辅助性T细胞17（Th17）标志物白细胞介素（IL）-17、IL-22、维甲酸相关孤儿受体γ（RORγ）mRNA相对表达量。生物信息学网站及双荧光素酶预测miR-142-5p与FOXO3的靶向关系。组间比较采用单因素方差分析或 t检验。 结果:模型组大鼠均出现不同程度EAU症状，随时间延长，其症状加重。与对照组比较，模型组大鼠CD4 +T细胞中miR-142-5p mRNA相对表达量升高，FOXO3 mRNA相对表达量下降，差异均有统计学意义（ t=7.374、10.423， P=0.002、0.001）。与mimic-NC组比较，miR-142-5p-mimic组大鼠CD4 +T细胞中miR-142-5p mRNA相对表达量上升，差异有统计学意义（ t=6.540， P=0.003 ）。与模型组、mimic-NC组、si-NC组比较，miR-142- 5p-mimic组、si-FOXO3组大鼠CD4 +T细胞培养上清液中IL-17、IL-22、RORγ mRNA相对表达量均显著增加，差异有统计学意义（ F=26.110、6.292、5.269、55.660、10.490、11.430， P<0.05）。与转染mimic-NC组比较，转染miR-142-5p-mimic组大鼠眼组织中miR-142-5p mRNA相对表达量显著上升，差异有统计学意义（ t=6.690， P<0.05 ）；与转染si-NC组比较，转染si-FOXO3组大鼠眼组织中FOXO3 mRNA相对表达量显著下降，差异有统计学意义（ t=17.751， P<0.05）。转染mimic-NC组、转染miR-142-5p-mimic组、转染si-NC组、转染si-FOXO3组大鼠免疫后随时间延长，EAU评分均呈上升趋势。转染miR-142-5p-mimic组大鼠EAU评分与组织病理学分级均较转染mimic-NC组升高，差异有统计学意义（ t=5.633、6.286， P<0.05）。转染si- FOXO3组大鼠EAU评分与组织病理学分级均较转染si-NC组升高，差异有统计学意义（ t=6.852、6.635， P<0.05）。FOXO3与miR-142-5p具有靶向关系。 结论:EAU大鼠CD4 +T细胞中，miR-142- 5p表达上调，FOXO3表达下调；miR-142-5p靶向调控FOXO3表达促进Th17细胞相关炎性因子发展。

目的:探讨静脉注射人脐带间充质干细胞(MSCs)源性小细胞外囊泡(sEVs)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)小鼠的治疗作用。方法:分离并培养人脐带MSCs，收集细胞培养上清液，采用超速离心法分离MSCs源性sEVs。采用Nanosight分析sEVs粒径，透射电子显微镜下鉴定sEVs形态；采用Western blot法检测sEVs表面标志物CD9、CD81和CD63蛋白的表达。取48只SPF级7周龄C57BL/6雌性小鼠，采用光感受器间维生素A类结合蛋白651-670 (IRBP 651-670)注射法制备EAU模型。采用随机数字表法将模型小鼠随机分为sEVs治疗组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组，每组24只。sEVs治疗组小鼠于EAU造模后第11天尾静脉注射MSCs源性sEVs 50 μg，PBS对照组以同样方法注射同体积PBS。造模后第8天各组分别随机选取6只小鼠扩瞳后检眼镜下观察眼底炎症情况，隔日1次，并进行炎症评分。造模后第18天采用颈椎脱臼法各组处死6只小鼠，立即摘取双眼眼球制作眼球石蜡切片并行苏木精-伊红染色，进行眼底病理炎症评分。各组分别随机选取6只小鼠，于造模后第18天颈椎脱臼法处死，立即摘取双眼眼球，采用流式细胞术检测小鼠眼球组织中辅助性T细胞1 (Th1细胞)、Th17细胞浸润情况；于造模后第14天各组分别颈椎脱臼法处死6只小鼠，立即分离脾脏及引流淋巴结中的T细胞，采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)法检测终质量浓度为0、1、10和20 μg/ml IRBP 651-670条件下T细胞增生情况。另选取3只正常小鼠，采用磁珠阴选法分离脾脏初始T细胞，分为sEVs处理组和PBS对照组，根据分组加入10 μg/ml的MSCs源性sEVs或等体积PBS进行共孵育，分别在Th1/Th17细胞分化条件下培养，采用流式细胞术检测各组初始T细胞向Th1/Th17细胞分化情况。 结果:分离的人脐带MSCs源性sEVs直径平均为(102.4±33.6) nm，透射电子显微镜下sEVs呈双层膜囊泡结构，sEVs中CD9、CD63和CD81蛋白呈高表达。造模后14、16、18、20和22 d，sEVs治疗组眼底炎症评分均低于PBS对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。造模后18 d，sEVs治疗组小鼠眼球组织病理评分明显低于PBS对照组，差异有统计学意义( P<0.05)。造模后18 d，sEVs治疗组小鼠眼球组织中Th1、Th17细胞百分比分别为(15.55±2.03)%和(15.67±2.15)%，明显低于PBS对照组的(21.35±0.72)%和(20.90±1.10)%，差异均有统计学意义( t＝6.58、5.31，均 P<0.01)。在IRBP 651-670质量浓度为20 μg/ml条件下，sEVs治疗组T细胞体外增生能力显著低于PBS对照组，差异有统计学意义( P<0.05)。sEVs处理组初始T细胞分化为Th1细胞和Th17细胞的百分比分别为(28.15±1.32)%和(11.60±2.23)%，明显低于PBS对照组的(31.58±1.75)%和(23.52±1.76)%，差异均有统计学意义( t＝3.93、10.26，均 P<0.05)。 结论:尾静脉注射人脐带MSCs源性sEVs可明显减轻EAU小鼠眼底炎性反应，其机制与抑制初始T细胞向Th1和Th17细胞的分化，减少眼球中Th1和Th17细胞浸润有关。

目的:探讨Anti-白细胞介素(IL)-12/IL-23 p40抗体对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)的抑制作用及其机制。方法:选取SPF级健康无眼疾6~8周龄雌性C57BL/6N小鼠66只，其中24只采用光感受器维生素A类结合蛋白(IRBP)651-670诱导小鼠EAU模型，分别在免疫前及免疫后第3、12、18天各取6只小鼠，流式细胞术检测各时间点小鼠脾脏、淋巴结和眼球中IL-17A + γ干扰素(IFN-γ) + CD4 + T细胞比例。取6只小鼠制作EAU模型，免疫后18 d采用小动物成像仪进行眼底拍照并行光相干断层扫描(OCT)检查。检查完成后处死小鼠，摘取眼球，采用苏木精－伊红染色法检测小鼠视网膜炎症反应和组织结构形态学改变；取淋巴结行流式细胞术检测IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞比例，按照表达数量不同分为IL-17A + IFN-γ +细胞高表达组和IL-17A + IFN-γ +细胞低表达组，比较2个组小鼠视网膜损伤情况。取36只小鼠制作EAU模型，采用随机数字表法分成Anti-IL-12/IL-23 p40组和IgG组，每组18只，分别尾静脉注射Anti-IL-12/IL-23 p40和IgG，每3天1次。免疫后第12天和第18天每组各取6只小鼠，分别取淋巴结和眼球组织，采用流式细胞仪检测T细胞亚群比例。免疫后第24天，每组各取6只小鼠，摘取眼球，采用苏木精－伊红染色法观察视网膜损害情况；采用流式细胞仪检测CD4 + T细胞体外诱导分化情况；采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞诱导分化后IL-17和IFN-γ表达情况；采用实时荧光定量PCR法检测IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞诱导分化后Th1细胞转录因子T-bet和Th17细胞转录因子维甲酸相关孤核受体γt(ROR-γt)相对表达量。 结果:免疫前和免疫后第3、12、18天，淋巴结、脾脏、眼球中IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞比例总体比较差异均有统计学意义( H＝9.642、16.531、10.385，均 P<0.05)，其中与免疫前相比，EAU小鼠免疫后第12天淋巴结IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞比例明显升高；免疫后第18天脾脏、眼球中IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞比例明显升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。IL-17A + IFN-γ +细胞高表达组小鼠视网膜严重水肿、视网膜脱离、重度炎性细胞浸润和广泛视网膜褶皱；IL-17A + IFN-γ +细胞低表达组小鼠视网膜轻度水肿、局灶性炎性细胞浸润、轻度视网膜褶皱。Anti-IL-12/IL-23 p40组免疫后18 d，眼球中CD3和IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞比例低于IgG组，差异均有统计学意义( t＝15.304、8.080，均 P<0.05)；免疫后12 d，Anti-IL-12/IL-23 p40组淋巴结中IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞比例为(0.33±0.18)%，明显低于IgG组的(4.83±0.45)%，差异有统计学意义( t＝15.974， P<0.001)。与IgG组相比，Anti-IL-12/IL-23 p40组Th1、Th17、IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞百分比及IL-17、IFN-γ、T-bet、ROR-γt表达量明显降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:Anti-IL-12/IL-23 p40可通过抑制IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞发挥对EAU的治疗作用。

目的 探讨母体葡萄膜炎暴露对子代小鼠受光感受器间视黄醇结合蛋白(interphotoreceptor retinoid-binding protein,IRBP)诱导的实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)免疫效应的影响.方法 从本课题组前期获得的受双亲EAU暴露的子代C57BL/6J小鼠眼球的RNA测序转录组数据中,筛选免疫相关差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs).利用基因本体论(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)的富集分析,确定这些免疫相关的差异表达基因生物学途径.通过蛋白质互作网络(protein-protein interaction networks,PPI)分析交集基因以此鉴定出枢纽基因.进一步通过荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qPCR)确定筛选出的异常表达的枢纽基因是否也在受母体葡萄膜炎影响的子代小鼠中差异表达,最后通过视网膜抗原IRBP651-670 诱导受母体活动期炎症影响的子代以评价母体葡萄膜炎对子代患葡萄膜炎的易感性以及相关免疫效应的影响.结果 从受双亲葡萄膜炎影响的子代小鼠眼球组织中鉴定出 72 个免疫相关差异基因.这些基因主要富集参与Toll样受体信号通路、MAPK信号通路以及B细胞受体信号通路等.进一步进行PPI网络互作分析,筛选出proteasome 26S subunit,ATPase 5(Psmc5)、proteasome 26S subunit,ATPase 3(Psmc3)、proteasome 26S subunit ubiquitin receptor,non-ATPase 4(Psmd4)和proteasome 26S subunit,non-ATPase 8(Psmd8)这4 个枢纽基因.qPCR检测证实受母体葡萄膜炎影响的子代小鼠中也上调表达这 4 个枢纽基因.而且与健康子代相比,150 μg IRBP 抗原诱导可增加受活动期炎症影响的子代EAU临床表现的严重程度和病理组织学损伤(P=0.0087,P=0.0410);另外,受母体活动期炎症影响的子代在IRBP诱导的 EAU 中脾 T 细胞增殖功能增强,其血清中产生的细胞因子 IL-17 和 IL-6 增加(P=0.0450,P=0.0300).结论 母体活动性炎症暴露加剧子代小鼠受IRBP诱导的EAU疾病的严重性,增强抗原特异性T细胞增殖以及血清中IL-17、IL-6的产生,可能与受影响的子代上调表达的4个枢纽基因Psmc5、Psmc3、Psmd4、Psmd8相关.

目的 探究衣康酸二甲酯(DMI)对树突状细胞(DCs)分泌促炎因子的作用,并初步研究其对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)小鼠光感受器间维生素A类结合蛋白1-20(IRBP1-20)特异性辅助性T细胞17(Th17)的影响.方法 分离C57BL/6J小鼠双侧股骨和胫骨得到骨髓细胞,利用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL)-4将其定向诱导分化为骨髓来源的DCs.诱导分化6 d,将细胞分为DMI组和PBS组,分别用250 μmol·L-1 DMI及等量的磷酸盐缓冲液(PBS)预处理3 h后,每组加入100 μg·L-1脂多糖(LPS)刺激24 h.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组DCs中促炎因子IL-6、IL-1β和IL-23 mRNA相对表达量.采用IRBP1.20、弗氏不完全佐剂及结核分枝杆菌H37RA主动免疫小鼠构建EAU模型,免疫后13 d,将分离的EAU小鼠脾脏及淋巴结T细胞与PBS或DMI处理的DCs在含有IRBP1-20的培养基中共培养,并向Th17方向极化.流式细胞仪检测共培养细胞中Th17细胞比例.ELISA检测共培养上清液中IL-17水平.qRT-PCR检测共培养细胞中维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、IL-17、IL-23R和GM-CSF mRNA相对表达量.结果 qRT-PCR检测结果显示,DMI组DCs中IL-6、IL-1β和IL-23 mRNA相对表达量均明显低于PBS组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,DMI组共培养细胞中Th17细胞比例明显低于PBS组,差异有统计学意义(P＜0.05).ELISA检测结果显示,DMI组共培养上清液中IL-17水平明显低于PBS组,差异有统计学意义(P＜0.05).DMI组共培养细胞中IL-17、RORγt、IL-23R和GM-CSF mRNA相对表达量均明显低于PBS组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 DMI能够抑制DCs中促炎因子IL-6、IL-1β和IL-23的表达,进而负向调控IRBP1.20特异性Th17细胞反应.

目的 探讨雷公藤红素在实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)小鼠眼组织中的抗炎作用及其对小胶质细胞极化的影响.方法 取健康6～8周龄B10.RⅢ小鼠36只,随机分为正常对照组、EAU溶剂对照组、雷公藤红素干预组,每组12只.将光感受器间维生素A类结合蛋白161-180和完全弗氏佐剂充分乳化混合后,注射于EAU溶剂对照组和雷公藤红素干预组小鼠双侧大腿和尾部皮下,总体积200 μL,每只小鼠注射光感受器间维生素A类结合蛋白161-180的量为50 μg.免疫后第7-14天,雷公藤红素干预组小鼠每天接受0.5 mg·kg-1雷公藤红素腹腔注射治疗,EAU溶剂对照组小鼠注射同等剂量的无菌PBS缓冲溶液.免疫后第14天,通过裂隙灯显微镜观察各组小鼠眼前节表现及行组织切片HE染色,并参照Caspi分级标准对各组小鼠进行临床评分及组织病理学评分;免疫荧光染色观察小鼠眼内小胶质细胞活化情况;Western blot检测小鼠视网膜中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶-1(Arg1)蛋白表达水平;qRT-PCR检测小鼠视网膜中炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6 mRNA相对表达量.采用Graphpad Prism 9.0统计软件进行数据分析.结果 免疫后第14天,通过裂隙灯显微镜观察发现,EAU溶剂对照组小鼠眼前节可见虹膜血管扩张充血明显、角膜水肿、前房渗出;而雷公藤红素干预组小鼠眼前节炎症明显减轻,可见虹膜血管轻度充血.与正常对照组相比,EAU溶剂对照组与雷公藤红素干预组小鼠临床评分均升高,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).雷公藤红素干预组小鼠临床评分低于EAU溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).HE染色结果显示,免疫后第14天,EAU溶剂对照组小鼠出现严重的视网膜皱褶和脱离,炎症细胞弥漫浸润;而雷公藤红素干预组小鼠视网膜结构破坏轻微,可见少量炎症细胞浸润.与正常对照组相比,EAU溶剂对照组与雷公藤红素干预组小鼠组织病理学评分均升高,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).雷公藤红素干预组小鼠组织病理学评分低于EAU溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).正常对照组、EAU溶剂对照组、雷公藤红素干预组小鼠眼内Iba1+细胞密度分别为(1.00±0.12)％、(36.07±4.57)％、(1.83±0.36)％,与正常对照组相比,EAU溶剂对照组及雷公藤红素干预组小鼠眼内Iba1+细胞数增加,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);与EAU溶剂对照组相比,雷公藤红素干预组小鼠眼内Iba1+细胞数明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).与正常对照组相比,EAU溶剂对照组小鼠视网膜中iNOS、Arg1蛋白表达水平均升高,差异均有统计学意义(均为P＜0.01);与EAU溶剂对照组相比,雷公藤红素干预组小鼠视网膜中iNOS蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.01).与正常对照组相比,EAU溶剂对照组小鼠视网膜中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA相对表达量均升高,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);与EAU溶剂对照组相比,雷公藤红素干预组小鼠视网膜中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA相对表达量均下降,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 雷公藤红素可抑制M1型小胶质细胞活化,减少EAU小鼠视网膜炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的产生,减轻炎症反应.