目的:平滑肌肉瘤(leiomyosarcoma,LMS)约占所有女性生殖系统恶性肿瘤的1%,由于该疾病相对少见,目前对其认识有限.LMS早期诊断困难,病理学检查是诊断的"金标准".本研究探讨女性生殖系统LMS的临床病理学特征、诊断及鉴别诊断.方法:收集首都医科大学附属北京妇产医院2019至2023年确诊的13例LMS,回顾性分析其临床病理特征.结果:患者年龄40～77岁,发生于子宫的10例,输卵管系膜1例,盆腔l例,阴道1例.大体观:肿瘤最大径为4～18 cm,1例为破碎肿瘤组织,其余肿物均呈巨大结节状,切面灰白或灰黄,实性,细腻,质软-中,部分病例呈典型的鱼肉样外观.镜下观:3例为上皮样LMS,10例为经典型(梭形细胞)LMS,大多数病例肿瘤细胞密集,核分裂象活跃.免疫表型:平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,SMA)、结蛋白(Desmin)、高分子量钙调素结合蛋白(h-caldesmon)均呈弥漫阳性,CD34、CD117、间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)均为阴性,细胞增殖指数Ki-67为15%～90%.术后随访1～32个月,5例局部复发.结论:LMS是女性生殖系统最常见的肉瘤类型,其临床表现缺乏特异性,影像学检查对术前诊断很重要,病理诊断需结合形态学特征和免疫表型.治疗以手术完整切除为主.该肿瘤侵袭性强,复发及转移率高,预后差.

目的 分析3例松果体区乳头状肿瘤(PTPR)患者的临床特征和病理诊断,并进行文献复习.方法 选择2012年1月-2021年3月新疆医科大学第一附属医院收治的3例PTPR患者,通过HE染色和免疫组化染色观察手术切除标本的组织学形态及免疫组化表型特点,结合文献复习了解该病的相关分子特征并寻找潜在的治疗靶点.结果 3例PTPR患者均以头痛及颅内压增高为首发症状.组织学形态为肿瘤细胞围绕血管形成单层或复层乳头状结构,且细胞呈极性分布(近血管侧胞质丰富).免疫组化检测显示3例广谱细胞角蛋白(AE1/AE3)、极低分子量角蛋白(CAM5.2)、角蛋白18(CK18)、配对盒蛋白8(PAX8)呈弥漫强阳性;波形蛋白(VIM)阳性,靠近血管端胞质浓染明显;2例神经胶质标志物酸性钙结合蛋白(S-100)呈弥漫阳性,1例呈灶状阳性;3例胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、少突胶质细胞转录因子2(OLIG-2)均呈阴性.3例PTEN表达缺失,p-Akt呈阳性表达.英文文献检索PTPR报道中涉及分子检测9篇,其中7篇运用基因组杂交比对检测29例(29/62)PTPR患者的染色体改变,发现96.6%(28/29)的患者10号染色体缺失、57.1%(16/28)的患者8号染色体增加.结论 PTPR呈特定的乳头状结构,免疫组化特征有助于诊断.PTEN蛋白缺失及p-Akt、PAX8阳性表达提示PAX8、PTEN和PI3K/Akt/mTOR信号通路在PTPR的发生发展中具有一定作用,可能成为潜在的治疗靶点.

浆膜腔积液是良恶性肿瘤最常见的临床并发症之一,良恶性浆膜腔积液细胞学诊断是临床的难点.在常规的细胞学检查中,鉴别诊断主要依赖浆膜腔积液细胞形态学特征,但往往由于增生的间皮细胞的存在或由于缺乏典型的肿瘤细胞而导致诊断错误[1].正确诊断浆膜腔积液的性质对临床治疗及预后判断都有重要意义.随着免疫细胞化学(immuno-cytochemistry,ICC)在这方面得到较多应用,成为辅助病理细胞学鉴别诊断浆膜腔积液中转移癌与增生间皮细胞的主要方法[2-5].我们选用表达上皮源性细胞有较高的敏感度和特异度的低分子量细胞角蛋白(CAM)5.2和广谱型细胞角蛋白(CK),表达间皮细胞和肿瘤性间皮细胞,其上皮源性细胞不表达的间皮细胞(MC)和肌钙蛋白C超家族的一种细胞间钙结合蛋白(CR)及在恶性肿瘤中常呈高表达状态,判断细胞增殖数Ki-67蛋白.经研究表明,选用上述5种抗体联合检测对浆膜腔积液性质的诊断和鉴别诊断具有重要的临床应用价值.

子宫内膜息肉样腺肌瘤又称腺肌瘤性息肉,占子宫内膜息肉的1.3% ~8.0%,属于混合性苗勒管肿瘤,根据腺上皮有无异型性,分为典型性息肉样腺肌瘤与非典型性息肉样腺肌瘤.非典型性息肉样腺肌瘤发病率逐年增高,且有恶变可能,因此越来越受到关注.

目的 制备钙调蛋白(CaM)突变体CaME141G的融合蛋白质粒,并进行蛋白表达、提取纯化和活性鉴定.方法 利用定点突变技术将野生型CaM的第141个氨基酸E(GAG)突变为G(GGG),再将突变体质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养后诱导其GST融合蛋白表达,GS-4B beads纯化,PreScission protease酶切GST标签,采用Bradford方法测定纯化后蛋白浓度,SDS-PAGE凝胶电泳检测CaME141G蛋白的相对分子量和纯度,pull-down实验鉴定纯化后蛋白的生物活性.结果 提取纯化后的CaME141G蛋白具有较高的浓度和纯度,且能与心肌CaV1. 2钙通道C末端的PreIQ蛋白片段结合,并具有CaME141G蛋白浓度依赖性,提示该蛋白具有与心肌CaV1. 2钙通道结合的能力.结论 成功构建了CaME141G融合蛋白质粒,并获得了纯化后的CaME141G蛋白,为深入研究CaM突变体在心肌CaV1. 2钙通道中的调节作用及其与心血管系统疾病的关系奠定了基础.

钙调磷酸酶B类似蛋白互作蛋白激酶(CBL-interacting protein kinase,CIPK)是一类植物中特有的丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)蛋白激酶,参与多种生物和非生物胁迫响应过程.该实验通过RT-PCR克隆了小桐子(Jatropha curcas L.)JcCIPK2基因cDNA全长序列,采用荧光定量qRT-PCR分析JcCIPK2基因在不同组织及不同处理(12℃和1℃低温、42℃高温、30％ PEG、250 mmol/L NaCl、150 μmol/L ABA)下的表达模式.结果 显示:(1)小桐子JcCIPK2基因开放阅读框全长1 398 bp,编码465个氨基酸,相对分子量为52.95 kD,等电点为8.89.(2)蛋白质结构分析表明,JcCIPK2的N端含有位于第11～265个氨基酸之间的丝氨酸/苏氨酸激酶蔗糖非发酵-1型相关蛋白激酶3催化域STKc_SnRK3,在激酶结构域内还具有激活环(Activation Loop);C端含有位于第316～430个氨基酸之间的CIPK蛋白激酶调控域CIPK C,其调控域中含有CIPK家族典型的能与CBL特异性结合的NAF结构域,位于第314～369个氨基酸之间.(3)系统进化分析显示,小桐子JcCIPK2蛋白与同属于大戟科的木薯(Manihot esculenta Crantz.)同源关系最近,序列一致性达87％.(4)qRT-PCR分析表明,JcCIPK2基因在小桐子根、茎、叶中均有表达,经12℃和1℃低温处理后,叶片中JcCIPK2基因的表达都呈现先上调后下调表达的趋势,且都在低温处理24 h的表达量最高,与对照相比分别上调了6.0倍和16.72倍;小桐子JcCIPK2基因在42℃高温、30％ PEG、150 μmol/L ABA、250 mmol/L NaCl处理下也受到不同程度的诱导表达.研究推测,JcCIPK2基因在小桐子对逆境的响应与适应中起重要作用.

调钙蛋白(Calmodulin,即CaM)是一种细胞内的钙结合蛋白质,分子量16700,具有调节钙在多种细胞内过程中的作用,CaM与钙结合可激活若干酶,包括磷酯酶A 2和鸟尿酸脱羧酶等,而这些酶的水平及其产物在银屑病性皮肤中增高。

CalA3是钙霉素生物合成途径中的大型聚酮合酶,生物信息学分析表明CalA3隶属Ⅰ型聚酮合酶(PKS-I).本研究通过构建、体外表达,建立了CalA3的纯化流程,获得了高纯度、稳定的巨大蛋白.通过无缝克隆方法,从柯斯质粒p16F9上扩增calA3基因片段,C端引入6His Tag,成功构建到表达质粒pET-28a(+)上,得到结果质粒pET-CalA3cH;通过探索不同的表达宿主、共表达分子伴侣和培养基的优化,获得最佳表达条件:在大肠杆菌BL21-Gold (DE3)中通过LBBS培养基与pGro7共表达,获得了该蛋白的最优可溶性高表达;通过Ni2+亲和层析、Heparin、离子交换和凝胶过滤层析多步纯化手段,对CalA3进行了有效分离纯化,获得了高纯度和稳定的蛋白;通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶过滤层析法测定了CalA3的表观分子量,并推测该蛋白为二聚体;凝胶迁移实验证明CalA3具有DNA结合能力.本研究探索了体外表达和纯化大型聚酮合酶CalA3蛋白的方法,成功获得了大蛋白在大肠杆菌中的异源表达和纯化,表征了CalA3的二聚体分子量为360 kD,并初步确定了CalA3具有体外结合DNA的能力,暗示其在钙霉素生物合成中具有转录调控功能.本研究为进一步研究CalA3的功能提供了理论依据.

1 病例简介男,57岁,主诉:无明显诱因咳嗽9个月,间歇性咯血7个月.于外院诊断为肺结核,行抗结核治疗效果不佳;转院诊断为肺动脉栓塞,行抗凝及抗结核治疗后咳嗽及咯血好转.实验室检查:红细胞计数3.98×1012/L,超敏C反应蛋白86.63 mg/L,D-二聚体195.0 ng/ml,细胞角蛋白-193.61 ng/ml.影像学表现:胸部CT平扫(图1A、B)示左下肺沿肺纹理走行管条状软组织影,增强扫描(图1C)示左下肺动脉主干及其分支明显增粗,内见软组织密度占位,呈斑驳样强化.左下肺胸膜下见明显强化的侧支血管(图1E).术后病理(图1F)诊断:肺动脉内膜肉瘤(pulmonary artery sarcoma,PAS).免疫组化染色示:CK(-)、EMA(-)、波形蛋白(+)、CD31(-)、CD34(-)、D2-40(-)、F8(局部弱+)、SMA (+)、Des(+)、高分子量钙结合(-)、S-100(-)、甲状腺转录因子-1(-)、Ki-67(30％～40％+).

肿瘤干细胞的存在被认为是肿瘤耐药和复发转移的根本原因,因此研发肿瘤干细胞的活体标记示踪技术动态监测该类细胞的存在具有重要的科学价值.实验室前期发现电压门控钙离子通道α2δ1亚基是肝细胞癌干细胞的特异表面标志物,文中研究探讨利用针对α2δ1的单克隆抗体1B50-1的单链可变域与新型荧光素酶NanoLuc形成融合蛋白1B50-1scFv-NanoLuc,在体外验证其对α2δ1阳性肝癌细胞结合的特性和荧光素酶活性.1B50-1scFv和NanoLuc序列通过重叠PCR技术扩增获得1B50-1scFv-NanoLuc的融合片段,并在C端添加Flag标签肽(命名为1B50-1scFv-NanoLucFlag),然后采用常规DNA克隆技术将融合片段克隆到真核表达载体.利用聚乙烯亚胺(Polyethyleneimine,PEI)将1B50-1scFv-NanoLucFlag真核表达载体转染至悬浮型人胚肾293细胞(FreeStyle 293F).蛋白免疫印记实验证明融合蛋白在FreeStyle 293F细胞培养上清中表达,其分子量约为50 kDa.融合蛋白经ANTI-FLAG(R) M2亲和层析柱纯化后,经流式细胞仪法测定融合蛋白1B50-1scFv-NanoLucFlag对高表达α2δl的Hep-12肝癌细胞具有高亲和活性.进一步,1B50-1scFv-NanoLucFlag与高表达α2δ1的肝癌细胞结合后显示出强的荧光素酶活性.这些结果表明融合蛋白1B50-1scFv-NanoLucFlag可用于α2δ1阳性肝癌干细胞的标记并可通过荧光素酶化学发光法进行示踪.