目的:观察鸡娃草乙酸乙酯提取物通过NF-κB信号通路对脂多糖(LPS)诱导下RAW264.7 巨噬细胞的抗炎作用.方法:以不同浓度鸡娃草乙酸乙酯提取物作用RAW264.7细胞24 h,分析在LPS刺激下药物对细胞形态变化的影响;CCK-8法检测RAW264.7细胞活力;倒置显微镜观察RAW264.7细胞形态;NO试剂盒检测RAW264.7 细胞的NO 释放量;ELISA 检测细胞 TNF-α、IL-6、IL-10的分泌;RT-PCR 检测 iNOS、TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA表达;Western Blot检测细胞IκB-α、NF-KB(P65)蛋白表达.结果:与模型组比较,鸡娃草乙酸乙酯提取物高浓度组TNF-α、IL-10分泌显著降低,中、高浓度组NO、IL-6分泌及iNOS、TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA和p-IκB-α/IκB-α、p-P65/P65水平显著降低.结论:本研究初步证实了鸡娃草乙酸乙酯提取物可通过NF-κB信号通路减少LPS诱导的RAW264.7 巨噬细胞炎症相关因子的释放而发挥抗炎作用.

目的 研究毛相思子Abrusmollis去除荚果后的干燥全草(毛鸡骨草)的化学成分及其体外抗炎活性.方法 综合运用硅胶、ODS反相柱色谱和半制备高效液相色谱等方法进行分离纯化,根据高分辨质谱,核磁共振波谱数据以及与文献对比进行结构鉴定,通过电子圆二色谱(electronic circular dichroism,ECD)数据分析确定化合物1和2的绝对构型.采用Griess法测定化合物对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞产生一氧化氮(NO)的抑制活性.结果 从毛鸡骨草甲醇提取物中分离得到12个化合物,分别鉴定为(αR)-α,4,2',4'-四羟基-3-甲氧基二氢查耳酮(1)、(αR)-α,4,2',4'-tetrahydroxydihydrochalcone(2)、(+)-甘草素(3)、mucunoneC(4)、(+)-medicarpin(5)、abrusprecatin A(6)、7,4'-dihydroxy-8-methoxyisoflavone(7)、7,3'-dihydroxy-6,4'-dimethoxyisoflavone(8)、7,3'-dihydroxy-8,4'-dimethoxyisoflavone(9)、alopecuroides A(10)、hypaphorine(11)、7,8-二甲苯基蝶碇-2,4-(1 H,3H)-二酮(12).化合物 3、4、7 和 10 对 LPS 诱导的RAW264.7 细胞 NO 生成有抑制作用,半数抑制浓度(median inhibition concentration,IC50)值为 7.39～20.09 μmol/L,其中化合物7对NO生成的抑制活性相对较好,IC50值为7.39μmol/L.结论 化合物1为1个新的二氢查耳酮,命名为毛鸡骨草素;化合物2和10为首次从相思子属植物中分离得到.化合物3、4、7和10具有潜在的抗炎活性.

目的 探讨白术转腰汤(《辨证录》转腰汤加鸡血藤、苏木、牛膝)对腰椎黄韧带纤维化的影响及其免疫调控机制.方法 ①采用随机数字表法将 24 只雄性SD大鼠分为 4 组,即正常组、模型组、氯磷酸盐组和白术转腰汤组,每组6 只.除正常组外,其余各组均采用腰椎失稳法建立黄韧带纤维化模型.白术转腰汤组灌胃白术转腰汤(13.6 g/kg),其余各组给予等量生理盐水灌胃,每天1 次,持续30 d.氯磷酸盐组于造模手术后即刻及第 9、18、27 天沿原切口皮下注射氯磷酸二钠脂质体(5 g/L,0.5mL).30 d后过量麻醉处死大鼠,采用HE染色和Masson染色对大鼠黄韧带进行组织学评估,计算胶原容积分数(CVF);采用免疫组化染色法检测黄韧带中转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达,采用免疫荧光双标法检测M2 巨噬细胞中CD163 与TGF-β1 蛋白表达.②使用RT-qPCR法检测M2 巨噬细胞与成纤维细胞单独培养、共培养,及经过白术转腰汤含药血清预处理的M2 巨噬细胞与成纤维细胞共培养 3 种方式下,M2 巨噬细胞与成纤维细胞TGF-β1、TNF-α和IL-1β的mRNA表达.结果 ①与正常组比较,模型组大鼠可见黄韧带纤维致密、扭曲,免疫细胞浸润,CVF增加,黄韧带组织中TGF-β1、TNF-α、IL-1β蛋白表达增加(P<0.05);与模型组比较,氯磷盐酸组与白术转腰汤组细胞外基质堆积改善,黄韧带CVF降低,黄韧带组织中TGF-β1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达降低(P<0.05);与氯磷盐酸组比较,白术转腰汤组细胞外基质堆积增加,CVF升高,黄韧带组织中TGF-β1、IL-1β蛋白表达升高(P<0.05);免疫荧光结果提示,正常组与氯磷盐酸组未见CD163、TGF-β1 蛋白表达,模型组CD163和TGF-β1 蛋白大量表达并共定位,白术转腰汤组可见较多CD163 蛋白表达,但TGF-β1 蛋白表达极少.②与单独培养比较,共培养增加了M2 巨噬细胞中TGF-β1、IL-1β及成纤维细胞中TNF-α、IL-1β的mRNA表达,而经过白术转腰汤含药血清预处理后的共培养下,M2 巨噬细胞中TGF-β1、IL-1β和成纤维细胞中TNF-α、IL-1β的mRNA表达较未预处理的共培养降低(P<0.05).结论 白术转腰汤可抑制大鼠腰椎黄韧带纤维化进程,降低M2 巨噬细胞中TGF-β1 和IL-1β的表达,并影响成纤维细胞TNF-α和IL-1β的表达,从而抑制M2 巨噬细胞TGF-β1 介导的免疫炎症反应,发挥抑制黄韧带炎症-纤维化正反馈的作用.

[目的]探究加味当归补血汤对正常小鼠免疫功能的影响.[方法]将120只BALB/c小鼠随机分成3组,即免疫Ⅰ组、免疫Ⅱ组、免疫Ⅲ组,每个免疫组小鼠按体质量随机分为正常对照组、加味当归补血汤1.4 g·kg-1组、加味当归补血汤1.9 g·kg-1组、加味当归补血汤2.3 g·kg-1组.连续灌胃30 d后,检测免疫Ⅰ组小鼠行为学指标,脾脏和胸腺系数,脾脏T淋巴细胞增殖能力,NK细胞活性,血常规指标,血清免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)和免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)含量,外周血和脾脏中T、B淋巴细胞比例;检测免疫Ⅱ组小鼠溶血空斑数、半数溶血值;检测免疫Ⅲ组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬功能和脾脏中CD4、CD8表达量.[结果]与正常对照组比较,加味当归补血汤3个剂量均可明显升高小鼠自主活动次数和抓力,脾脏系数和胸腺系数(P<0.05,P<0.01);增强脾淋巴细胞增殖能力和NK细胞活性(P<0.01);增加溶血空斑数、半数溶血值、腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数(P<0.01);升高全血淋巴细胞(lymphocyte,LYMPH)、白细胞(white blood cell,WBC)、红细胞(red blood cell,RBC)数量,血清中IgM、IgG含量(P<0.05,P<0.01);降低外周血和脾脏CD3+T、CD8+T细胞占比,减少CD8阳性表达量(P<0.05,P<0.01);升高外周血CD19+B细胞占比,外周血和脾脏CD4+/CD8+比值,以及脾脏CD4/CD8阳性表达比值(P<0.05,P<0.01).[结论]加味当归补血汤能增强特异性免疫和非特异免疫,有助于增强免疫力.

目的 通过气道类器官培养研究哮喘中肝激酶B1(Lkb1)调控上皮再生的机制.方法 取Lkb1f/f(对照组,10只)和Scgb1a1CreER;Lkb1f/f小鼠(Lkb1敲除组,9只),采用雾化吸入鸡卵清蛋白(OVA)的方法建立过敏性哮喘模型,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织,统计BALF中炎性细胞数量,肺组织切片免疫荧光染色比较钙激活氯离子通道蛋白3(CLCA3)阳性细胞数量.通过流式细胞术分选出Club细胞进行类器官培养,统计类器官的平均直径和类器官形成率,回收细胞通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测高脚杯细胞标志物CLCA3、纤毛细胞标志物叉头框蛋白J1(FOXJ1)和Club细胞中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的表达水平.结果 与对照组相比,Lkb1敲除组BALF中巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数量变化差异无统计学意义;Lkb1敲除后CLCA3阳性细胞数量减少;类器官培养结果显示敲除Lkb1后Club细胞来源的类器官平均直径减小,类器官形成率降低,纤毛细胞分化标志物FOXJ1 mRNA表达水平降低,缺失Lkb1后Club细胞表达AMPKα水平降低,且Club细胞增殖受到抑制,激活Lkb1的下游信号通路AMPK可以减弱Lkb1缺失对Club细胞再生功能的影响.结论 Lkb1通过AMPK通路促进气道祖细胞增殖.

目的 探讨当归鸡血藤汤(DJD)对再生障碍性贫血(AA)模型大鼠骨髓造血功能的影响.方法 将SD大鼠随机分为空白组(0.9％NaCl)、模型组(0.9％NaCl)、阳性对照组(10.8 g·kg-1复方阿胶浆)和低、中、高剂量实验组(3.10、6.21和12.42 g·kg-1 DJD).用乙酰苯肼联合环磷酰胺建立AA大鼠模型,造模的同时给药,每天1次,连续15 d.测定大鼠体质量、血常规及骨髓中造血因子水平;观察大鼠骨髓涂片,进行骨髓有核细胞计数.结果 中、高剂量实验组和阳性对照组、模型组、空白组的血常规中白细胞数量分别为(2.44±0.46)× 109、(4.26±0.38)× 109、(4.57±1.43)× 109、(0.96±0.18)× 109和(9.83±0.87)× 109 ·L-1,红细胞计数分别为(3.14±0.61)× 1012、(3.44±0.35)× 1012、(4.06±0.86)×1012、(1.35±0.54)× 1012和(9.61±1.18)× 1012·L-1,血红蛋白数量分别为(87.83±7.25)、(108.17±8.93)、(99.50±13.81)、(22.33±7.63)和(153.92±19.42)g·L-1,血小板数量分别为(218.50±28.05)× 109、(291.83±32.32)× 109、(269.33±67.60)× 109、(37.50±12.21)× 109 和(507.83±181.01)x109·L-1,骨髓中粒细胞巨噬细胞集落刺激因子水平分别为(317.08±31.86)、(359.70±36.37)、(394.86±23.41)、(198.31±14.63)和(379.39±14.95)ng·L-1,血管内皮细胞黏附分子1水平分别为(765.98±60.32)、(877.96±24.75)、(812.74±66.40)、(588.25±58.15)和(929.01±35.50)μg·L-1,白细胞介素 3 水平分别为(129.42±6.19)、(121.31±12.65)、(124.24±2.50)、(83.24±11.05)和(135.67±7.66)ng·L-1,胱天蛋白酶 3 水平分别为(105.49±10.07)、(115.49±6.89)、(114.36±2.97)、(150.62±16.82)和(116.10±4.68)pmol·L-1,骨髓损伤评分分别为(1.31±0.18)、(1.96±0.09)、(1.49±20.42)、(3.76±0.19)和(0.05±0.04)分,有核细胞计数分别为(5.79±0.47)×106、(5.12±0.10)×106、(5.56±0.25)×106、(3.20±0.28)×106 和(8.49±0.56)× 106·L-1.空白组的上述指标与模型组比较,中、高剂量实验组及阳性对照组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 当归鸡血藤汤可能通过调控骨髓造血微环境,改善免疫功能和抑制细胞凋亡,改善AA模型大鼠骨髓造血功能.

目的 探讨鸦胆子苦醇调节环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激因子(STING)信号通路对肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响.方法 通过左前肢腋窝sc接种H22细胞建立荷瘤小鼠模型,随机分为模型组,鸦胆子苦醇低、中、高剂量(0.916、1.832、3.664mg·kg-1,ig给药)组,鸦胆子苦醇(3.664 mg·kg-1,ig给药)+RU.521(5 mg·kg-1,ip给药)组.干预结束后,取胸腺、脾脏、肿瘤称质量,测定小鼠胸腺和脾脏指数、抑瘤率;T淋巴细胞转化实验检测T淋巴细胞增殖指数;检测巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力;收集血清,试剂盒法检测白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Westernblotting法检测肿瘤组织中cGAS、STING蛋白表达水平.结果 与对照组相比,模型组小鼠胸腺和脾脏指数、吞噬指数、吞噬百分率、T淋巴细胞增殖指数、IL-2和TNF-α水平显著下降(P＜0.05);与模型组相比,鸦胆子苦醇低、中、高剂量组小鼠胸腺和脾脏指数、吞噬指数、吞噬百分率、T淋巴细胞增殖指数、IL-2和TNF-α水平、cGAS和STING蛋白表达显著增加(P＜0.05),瘤质量显著降低(P＜0.05),且作用均呈现剂量相关性;与鸦胆子苦醇高剂量组相比,鸦胆子苦醇+RU.521组胸腺和脾脏指数、吞噬指数、吞噬百分率、T淋巴细胞增殖指数、IL-2和TNF-α水平、cGAS和STING蛋白表达显著下降(P＜0.05),瘤质量显著增加(P＜0.05).结论 鸦胆子苦醇通过激活cGAS-STING信号通路抑制肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤生长,增强其免疫功能.

目的:探索白屈菜多糖对免疫低下小鼠免疫功能的调节作用.方法:通过腹腔注射环磷酰胺建立免疫低下小鼠模型,以灌服生理盐水小鼠为空白对照组,灌服香菇多糖小鼠为阳性对照组,灌服不同剂量的纯化后白屈菜多糖小鼠为实验组,分别灌服等体积上述溶液,观察腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数以及溶血素和溶血空斑的形成情况,探讨白屈菜多糖对免疫低下小鼠免疫功能的影响.结果:精制白屈菜多糖可显著提高免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数,促进溶血素和溶血空斑形成.结论:白屈菜多糖能显著提高免疫低下小鼠的免疫活性,有进一步研究的价值.

目的 初步探索细辛脑对哮喘小鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)表达方面干预的影响,为细辛脑临床治疗哮喘提供理论指导.方法 将30只BALB/C雌性小鼠按随机数字表法分为哮喘组、细辛脑组和对照组,每组各10只.哮喘组和细辛脑组采用鸡卵白蛋白(OVA)诱导建立哮喘模型,对照组采用生理盐水替代,细辛脑组额外给予细辛脑雾化吸入干预.苏木素-伊红染色观察3组小鼠的肺组织病理变化,ELISA法检测3组小鼠肺泡灌洗液(BALF)中TGF-β1及VEGF水平,显微镜下对BALF沉淀物进行细胞计数和分类.结果 与对照组小鼠相比,哮喘组小鼠肺组织有明显的气道周围炎症细胞浸润,气管管壁增厚和狭窄,细辛脑组小鼠也有前述哮喘组的病理特点,但程度轻于哮喘组.细辛脑组BALF中TGF-β1和VEGF水平均高于对照组、低于哮喘组(P均＜0.01).哮喘组的细胞总数及中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞计数均多于细辛脑组和对照组(P均＜0.05),细辛脑组的中性粒细胞、嗜酸性粒细胞计数均多于对照组(P均＜0.01).结论 TGF-β1和VEGF在哮喘小鼠BALF中表达,并可能参与哮喘早期气道重塑,细辛脑可降低哮喘小鼠TGF-β1和VEGF的水平,可能是其改善哮喘气道炎症和缓解气道重塑的机制之一.

目的 探讨甘草浸膏对小鼠免疫功能的影响.方法 测定刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力,二硝基氟苯(DNFB)诱导的小鼠迟发性变态反应(DTH),小鼠血清溶血素含量,小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能,小鼠碳廓清能力,抗体生成细胞能力,小鼠自然杀伤细胞活性指标.结果 高剂量甘草浸膏能明显增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞的增殖能力,DNFB诱导的小鼠DTH,小鼠血清溶血素水平,小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能,小鼠碳廓清能力,抗体生成细胞能力,但高剂量甘草浸膏不能明显增强小鼠自然杀伤细胞活性.结论 甘草浸膏具有增强免疫功能的作用.