目的:本实验主要探究nesfatin-1对胃运动和胃酸分泌的影响, 以及弓状核 (ARC) -下丘脑外侧区 (LHA) nesfatin-1神经通路在该过程中的作用.方法:采用逆行追踪和免疫组织化学染色实验观察ARC-LHA nesfatin-1神经通路的构成;在体胃运动实验观察nesfatin-1对胃运动的影响以电刺激ARC对胃运动的影响;采用幽门结扎法测量胃液和胃酸分泌量.结果:LHA微量注射nesfatin-1抑制胃运动和胃酸分泌, 但是预先注射黑色素浓集激素 (MCH) 受体拮抗剂PMC-3881-PI减弱nesfatin-1对胃运动和胃酸分泌的抑制作用.电刺激ARC后, 胃收缩幅度和频率显著增强, 胃酸分泌明显增多.nesfatin-1抗体或PMC-3881-PI对电刺激ARC诱导的胃运动没有显著影响, 但是能够改变电刺激ARC诱导的胃酸分泌.结论:ARC-LHA间nesfafin-1通路可调控大鼠胃运动和胃酸分泌, 并且黑色素浓集激素也参与调节该过程.

目的:探究 Ghrelin 对大鼠摄食的影响及 orexins 信号通路的调控作用.方法:采用免疫组织化学染色的方法观察 Ghrelin 免疫阳性神经元轴突末梢与 orexin 神经元的突触联系以及下丘脑外侧区(LHA)内 c-fos 的表达.侧脑室注射抗-orexin-A IgG 和抗-orexin-B IgG 混合液、抗-黑色素浓集激素(MCH)IgG、NPY-1 受体拮抗剂后测量大鼠摄食量,观察其对 ghrelin 诱导摄食的影响.结果:Ghrelin 免疫阳性神经元轴突末梢与 orexin 神经元的突触相接触.侧脑室注射 ghrelin 可诱导 orexin 神经元内 c-fos 表达,但是没有引起 MCH 神经元内 c-fos 的表达.预先注射抗-NPY IgG 抗体,ghrelin 仍然可诱导 orexin 神经元内 c-fos 表达.侧脑室预先注射抗-orexin-A IgG 和抗-orexin-B IgG 抗体可减弱 ghrelin 促摄食作用,但是预先注射抗-MCH IgG 抗体对 ghrelin 诱导的摄食作用没有明显影响.注射 NPY 受体拮抗剂可进一步加强抗-orexin-A IgG 抗体和抗-orexin-B IgG 抗体对 ghrelin 诱导摄食的抑制效应.结论:ghrelin 可能与 orexin 系统相互作用共同参与摄食和能量平衡的调控.

目的:探究黑色素浓集激素(MCH)受体1(MCHR1)拮抗剂SNAP94847能否作用于腹侧被盖区至迷走神经背侧运动核(VTA-DMV)神经通路,进而参与调控大鼠应激性焦虑所致胃黏膜损伤及其潜在机制.方法:采用荧光金逆行追踪结合免疫荧光组织化学法检测VTA-DMV的MCHR神经通路(n=10);采用单细胞外放电记录法检测大鼠VTA微量注射MCH或SNAP94847对多巴胺(DA)神经元放电活动的影响(n=30);18只大鼠随机分为正常+生理盐水(NS)组、焦虑+NS组和焦虑+SNAP94847组,观察VTA微量注射SNAP94847后大鼠行为学变化、胃黏膜炎症损伤及相关炎症指标的变化(n=6);24只焦虑模型大鼠随机分为假损毁+NS组、假损毁+SNAP94847组、电损毁+NS组及电损毁+SNAP94847组,观察电损毁DMV后VTA微量注射SNAP94847对胃黏膜炎症损伤相关炎症指标的影响(n=6).结果:逆行追踪结合荧光免疫组织化学染色结果显示,VTA可见部分MCHR和荧光金双重标记神经元;MCH可改变大鼠VTA内DA神经元放电活动,且对焦虑模型大鼠的影响更显著(P＜0.05);高架十字迷宫实验中,与对照组相比,焦虑+SNAP94847组进入闭合臂次数和时间百分比显著增加(P＜0.05);焦虑模型大鼠炎症标志物过氧化氢酶(CAT)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量显著降低(P＜0.05),髓过氧化物酶(MPO)活性及丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)含量显著升高(P＜0.05),VTA微量注射SNAP94847可显著减轻焦虑模型大鼠胃黏膜炎症损伤(P＜0.05);与假损毁+SNAP94847组相比,电损毁+SNAP94847组焦虑模型大鼠CAT活性和GSH-Px含量显著降低(P＜0.05),而MPO活性及MDA、TNF-α和IL-6含量显著升高(P＜0.05).结论:VTA-DMV的MCHR信号通路可能参与应激所致焦虑大鼠胃黏膜炎症损伤及焦虑样行为的调控.

目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的高发病率和高病死率对人类健康构成了巨大威胁.环状RNA(circRNAs)和微RNA(microRNAs,miRNAs)作为相互竞争的内源性RNA(endogenous RNAs,ceRNAs),已被发现在致癌过程中发挥了重要作用.本文通过构建CRC中的circRNA/miRNA/mRNA调控网络,旨在探讨CRC发生过程中的具体分子机制.方法:从基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库获得CRC的circRNA测序数据,筛选差异circRNA并用癌症特异性circRNA数据库(Cancer-specific CircRNA Database,CSCD)鉴定其结构;采用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载miRNAs和mRNAs测序数据并筛选差异基因;应用CircInteractome数据库预测差异circRNA对应的miRNA;采用DIANA、miRanda、PicTar和TargetScan数据库预测差异miRNA对应靶基因;应用R语言进行靶基因的基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)的富集分析;采用蛋白质相互作用分析数据库String结合网络可视化分析软件Cytoscape3.7.2构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络图和筛选核心基因;验证前10位核心基因(Top10 hub基因)的mRNA表达量;采用Cytoscape3.7.2构建circRNAs/miRNAs/mRNAs和circRNAs/miRNAs/Top10 hub mRNAs网络图;采用real-time PCR检测hsa_circRNA_0065173、hsa-mir-450b、hsa-mir-582、腺苷酸环化酶5(adenylate cyclase 5,ADCY5)、毒蕈碱型乙酰胆碱受体M2(muscarinic acetylcholine receptor M2,CHRM2)、大麻素I型受体(cannabinoid receptor 1,CNR1)和溶血磷脂酸受体1(lysophosphatidic acid receptor 1,LPAR1)在CRC组织和癌旁组织中的表达水平.结果:共筛选出14个差异circRNAs,在CSCD上可查询到8个;获得circRNAs靶向miRNAs 34个;mRNA在进行PPI和Top10 hub基因筛选时,得到Top10 hub基因分别为CHRM2、黑色素浓集激素受体2(melanin concentrating hormone receptor 2,MCHR2)、G蛋白γ3亚单位(G-protein gamma 3 subunit,GNG3)、神经肽Y受体Y1(neuropeptide Y receptor Y1,NPY1R)、CNR1、LPAR1、ADCY5、腺苷酸环化酶2(adenylate cyclase 2,ADCY2)、G蛋白偶联受体γ7抗体G(gamma 7,GNG7)、趋化因子12(chemokine 12,CXCL12);Top10 hub基因的表达量验证显示:Top10 hub基因在CRC中均下调;构建的网络图表明hsa_circRNA_0065173可能通过调控hsa-mir-450b、hsa-mir-582而调控ADCY5、CHRM2、CNR1、LPAR1基因,这些基因可能可作为治疗CRC的潜在相关靶点.Real-time PCR结果显示:与癌旁正常组织比较,CRC组织中hsa_circRNA_0065173、ADCY5、CHRM2、CNR1和LPAR1的表达水平均显著降低(均P<0.05);hsa-mir-450b、hsa-mir-582的表达水平均显著升高(均P<0.05).结论:本研究构建了潜在的circRNAs/miRNAs/mRNAs网络,它可为circRNA通过ceRNA机制介导CRC的发生、发展提供新的见解.