Amyloid-β(Aβ)and tau,the two hallmark proteins associated with Alzheimer's disease(AD),exhibit distinct toxic effects but also interact synergistically within the disease pathology.The prevailing theory in AD pathology-the amyloid cascade hypothesis-highlights the pivotal role of increased processing of the amyloid precursor protein(APP).Initially cleaved by the major β-secretase(β-amyloid cleaving enzyme-1,BACE1)in the brain,then undergoes further cleavage by the y-secretase complex,resulting in the production of Aβ40-42 and a set of intracellular C-terminal peptides known as Aβ and APP intracellular domain(β-AICDs)and soluble amyloid precursor protein β(sAPPβ)(Orobets and Karamyshev,2023).

目的 探讨肠道菌群失调症与阿尔茨海默病(AD)的相关性及思连康对AD患者的改善作用.方法 选取2015年1月至2019年12月收治的100例老年AD患者为研究组,经肠道菌群涂片培养法计算双歧杆菌/肠杆菌(B/E)值,将其分为失调组(B/E<1)和未失调组(B/E>1),同期选取健康体检人群100例为对照组,所有研究对象取静脉血4 ml,同时经腰椎穿刺取脑脊液2 ml.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑脊液中β-淀粉样蛋白(Aβ)1～42、磷酸化Tau蛋白及血清C反应蛋白(CRP)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,检测所有研究对象肠道菌群,并分析老年AD患者肠道菌群分布与炎症指标的相关性.研究组口服思连康治疗,分析治疗效果.结果 研究组磷酸化Tau蛋白、CRP、IL-6、IL-1β、TNF-α水平显著高于对照组(P<0.05),且失调组明显高于未失调组(P<0.05);研究组B/E值和Aβ1～42明显低于对照组(P<0.05),且失调组明显低于未失调组(P<0.05);研究组双歧杆菌数显著低于对照组(P<0.05),失调组显著低于未失调组(P<0.05),肠球菌、肠杆菌数显著高于对照组(P<0.05),失调组显著高于未失调组(P<0.05);Pearson相关性分析显示,研究组肠道双歧杆菌数与磷酸化Tau蛋白、CRP、IL-6、IL-1β、TNF-α 水平呈负相关(P<0.05),与Aβ1～42水平呈正相关(P<0.05);肠球菌数与磷酸化Tau蛋白、CRP、TNF-α水平呈正相关(P<0.05),与Aβ1～42水平呈负相关(P<0.05);肠杆菌数与磷酸化Tau蛋白、IL-6、TNF-α水平呈正相关(P<0.05);与Aβ1～42水平呈负相关(P<0.05);治疗后失调组和未失调组AD评定量表-认知分量表(ADAS-cog)、简易精神状诚评价量表(MMSE)及日常生活能力量表(ADL)评分差异有统计学意义(P<0.05),且失调组ADAS-cog评分明显低于未失调组(P<0.05),MMSE、ADL评分明显高于未失调组(P<0.05).结论 肠道菌群失调可能会引起甚至加重AD患者临床症状,思连康对改善AD患者症状有一定的积极作用.

目的:研究氯化锂对β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)引起的星形胶质细胞(AS)谷氨酸释放的抑制作用,并探讨其对海马神经元损伤的保护作用及机制.方法:原代培养AS及海马神经元,AS分为对照组和Aβ1-42+不同剂量氯化锂组(分别加入0.25、0.50和1.00 mmol?L-1氯化锂作用2周,加入250 nmol?L-1 Aβ1-42刺激),采用荧光探针技术检测AS中Ca2+水平,采用高效液相色谱法检测AS谷氨酸的释放量,Western blotting法检测AS中瞬时受体电位通道蛋白1(TRPC1)、钠-钙交换蛋白1(NCX1)和电压门控钙离子通道(Cav1.2)蛋白表达水平.海马神经元成熟化后分为对照组、Aβ1-42组和Aβ1-42+不同剂量氯化锂组,加入Aβ1-42处理的含AS的条件培养基(ACM)培养并以不含AS的条件培养基为对照,倒置相差显微镜下观察海马神经元突起总长度(TDBL)、一级突起数(PDN)和最大分支级数(MBO),Griess法测定培养液中一氧化氮(NO)释放量.结果:与对照组比较,Aβ1-42+不同剂量氯化锂组AS中Ca2+水平明显降低(P<0.05),Ca2+再充功能降低(P<0.05),谷氨酸释放量明显减少(P<0.05),TRPC1蛋白表达水平明显降低(P<0.05),NCX1和Cav1.2蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05).与对照组比较,Aβ1-42组海马神经元NO释放量明显增加(P<0.05),TDBL、PDN和MBO明显减少(P<0.01);与Aβ1-42组比较,Aβ1-42+不同剂量氯化锂组海马神经元NO释放量明显减少(P<0.01),TDBL、PDN和MBO明显增加(P<0.05或P<0.01).加入Aβ1-42处理的不含AS的培养基培养,各组海马神经元NO释放量比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论:氯化锂对Aβ1-42引起的AS中Ca2+依赖的谷氨酸释放具有抑制作用,该作用机制可能与其下调TRPC1受体表达有关,氯化锂可通过抑制神经元中NO的释放减轻海马神经元的损伤.

目的:探讨丙泊酚对老年痴呆大鼠腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)自噬通路及认知功能的影响.方法:清洁级SD大鼠100只,随机分成5组:对照组、模型组、盐酸米诺环素组(50mg/kg)、丙泊酚低、高剂量组(50、100mg/kg).模型组、盐酸米诺环素组、丙泊酚低、高剂量组海马注射β 样淀粉蛋白1-42(Aβ1-42)建立老年痴呆模型,建模成功后,盐酸米诺环素组、丙泊酚低、高剂量组给予相应药物灌胃,对照组、模型组灌胃等体积的生理盐水,每天1次,试验周期为4周.试验结束后,Morris水迷宫试验测定大鼠神经认知功能,将大鼠海马神经元进行HE染色进而观察其病理结构,将大鼠海马神经元进行吖啶橙染色进而观察其自噬情况,实时荧光定量PCR(RT-PCR)法及蛋白质免疫印迹(Western-blot)法测定大鼠海马组织AMPK、N-甲基-D-天冬氨酸受体2B(NR2B)mRNA和蛋白水平.结果:对照组海马区神经元细胞较多,排列整齐;模型组海马区见片状神经元坏死,数目减少,核固缩明显;丙泊酚低剂量组坏死神经元细胞减少;盐酸米诺环素组、丙泊酚高剂量组海马区见少量坏死神经元细胞,神经元细胞结构完整.与对照组比较,模型组逃避潜伏期时间、AMPK、NR2B mRNA和蛋白表达水平明显升高,经过原平台位置的次数、原平台象限停留的时间、神经元自噬小体水平明显降低(P<0.05).与模型组比较,盐酸米诺环素组和丙泊酚低、高剂量组逃避潜伏期时间、AMPK、NR2B mRNA和蛋白表达水平明显降低,经过原平台位置的次数、原平台象限停留的时间、神经元自噬小体水平明显升高(P<0.05).与盐酸米诺环素组比较,丙泊酚低剂量组逃避潜伏期时间、AMPK、NR2B mRNA和蛋白表达水平明显升高,经过原平台位置的次数、原平台象限停留的时间、神经元自噬小体水平明显降低(P<0.05).丙泊酚高剂量组与盐酸米诺环素组逃避潜伏期时间、AMPK、NR2B mRNA和蛋白表达水平、经过原平台位置的次数、原平台象限停留的时间、神经元自噬小体水平相近(P>0.05).结论:丙泊酚能增加老年痴呆大鼠神经元自噬水平进而明显减轻海马神经元损伤程度,其机制与丙泊酚抑制AMP K信号通路有关.

目的 探讨早老素-1(PSEN-1)p.Met139Ile突变对早发性阿尔茨海默病(EOAD)人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)模型中相关蛋白及microRNA-34a(miR-34a)表达的影响.方法 分别将携带有阴性对照空载体的慢病毒(NC组)、野生型PSEN-1的慢病毒(WT组)以及突变型PSEN-1 p.Met139Ile(c.417G>C)的慢病毒(MT组)转染至SH-SY5Y细胞,以未感染慢病毒细胞作为正常组(N组).ELISA方法检测各组细胞β-淀粉样蛋白表达(Aβ42/Aβ40值),Western blot方法检测各组PSEN-1、淀粉样蛋白前体(APP)、NOTCH-1蛋白的表达,qRT-PCR方法检测各组miR-34a的表达.结果 与N组、NC组、WT组比较,MT组Aβ42/Aβ40值、PSEN-1蛋白、APP蛋白及miR-34a表达升高,而NOTCH-1蛋白表达下调,差异有显著性(F=28.540～425.600,q=7.349～30.180,P<0.05),N组、NC组、WT组各指标比较差异无显著性(P>0.05).结论 PSEN-1 p.Met139Ile为致病性突变位点,可引起SH-SY5Y细胞模型中相关蛋白及miR-34a的异常表达.

目的 探讨特征性生化指标提取主成分构建的回归模型对轻度认知功能障碍(Mild cognitive impairment,MCI)患者的病情评估价值.方法 2018年4月-2018年11月对长沙市某区35名健康居民、35例MCI患者、35例AD患者进行调查分析,检测3组促炎因子(IL-1,TNF-α,Cor)、趋化因子(MCP-1,CCL2,RANTES)、应激氧化指标(ROS,MDA,4-HNE)、免疫及受体(CD8,a7-nAchR,SRAGE,Slrp-1)、营养因子(TC,TG,FBG,BDNF,tHCY)、脑脊液蛋白(Aβ42,Tau)水平,对17项指标进行主成分分析,以MCI患者的病情变化为因变量,以主成分加权评分为自变量,拟合回归方程分析各变量的关联.结果 3组促炎因子(IL-1,TNF-α,Cor)、趋化因子(MCP-1,CCL2,RANTES)、氧化应激(ROS,MDA,4-HNE)、免疫及受体(SRAGE,Slrp-1)、营养指标(TC,TG,BDNF)、脑脊液蛋白(Aβ42,Tau)水平均有明显差异(P<0.01);35例MCI患者中11例好转(占31.43％)、20例维持(占57.14％)、4例恶化(占11.43％).各指标进行主成分分析,最终提取出4个主成分(脑蛋白代谢异常贡献率27.30％、受体活性受损贡献率24.38％、神经营养缺失贡献率23.99％、炎症应激水平激增贡献率18.75％);MCI患者病情与4项主成分组建回归方程,影响大小依次为脑蛋白代谢异常(OR=5.003)、受体活性受损(OR=3.781)、神经营养缺失(OR=3.669)、炎症应激水平激增(OR=3.561).结论 MCI患者的临床多项生化指标均有特征性变化,MCI患者的病情变化可能与脑蛋白代谢异常、受体活性受损、神经营养缺失、炎症应激反应有关,其中脑蛋白代谢异常为最主要的影响因素.

目的 探讨血浆β-淀粉样蛋白40(Aβ40)、Aβ42及磷酸化tau蛋白(p-tau)对老年广泛性脑萎缩(GBA)的诊断价值及与认知功能的相关性.方法 回顾性选取2018年5月至2019年1月湖北省荆门市第二人民医院神经内科收治的125例老年GBA患者,根据是否合并认知功能障碍(CFI)分为GBA-CFI组57例与GBA-NCFI组68例,另选取130名体检健康者为对照组,测定所有研究对象血浆Aβ40、Aβ42及p-tau水平,根据简易智力状态检查量表(MMSE)将GBA-CFI组分为重度CFI组(≤9分,n=14)、中度CFI组(10～20分,n=19)、轻度CFI组(≥21分,n=24),分析血浆Aβ40、Aβ42及p-tau水平与老年GBA患者CFI的关系及对老年GBA合并CFI的诊断价值.采用Pearson相关分析Aβ40、Aβ42与p-tau水平的相关性,采用多因素Logistic回归分析老年GBA患者CFI的影响因素.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Aβ40、Aβ42及p-tau水平对老年GBA合并CFI的诊断价值.结果 GBA-CFI组血浆Aβ40、Aβ42、p-tau水平明显高于GBA-NCFI组、对照组[分别为(910.33±275.76)μg/L比(798.28±272.73)、(667.10±240.63)μg/L,(89.81±18.32)μg/L比(69.39±14.39)、(47.84±14.88)μg/L,(80.21±18.89)ng/L比(58.84±16.20)、(21.52±10.53)ng/L;均P<0.05],GBA-NCFI组血浆Aβ40、Aβ42、p-tau水平明显高于对照组(均P<0.05).GBA-CFI组CFI患者血浆Aβ40、Aβ42、p-tau水平随着CFI加重而提升[重度、中度、轻度分别为:(1134.21±162.20)、(950.97±247.72)、(747.56±250.47)μg/L;(107.71±8.92)、(95.79±12.28)、(74.62±13.73)μg/L;(104.71±8.21)、(84.52±5.07)、(62.51±10.14)ng/L;均P<0.05].Pearson相关性分析显示,GBA-CFI组血浆Aβ40、Aβ42与p-tau水平呈正相关(r=0.715、0.655,均P<0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,高水平Aβ40(OR=1.653,95％CI:1.186～2.302)、Aβ42(OR=1.064,95％CI:1.027～1.103)、p-tau(OR=1.080,95％CI:1.040～1.121)为老年GBA患者CFI发生的危险因素(均P<0.05).ROC曲线分析结果显示,血浆Aβ40+Aβ42+p-tau水平诊断老年GBA的曲线下面积(AUC)明显大于Aβ40、Aβ42、p-tau单独诊断(均P<0.05),敏感度、特异度、准确度也较Aβ40、Aβ42、p-tau单独诊断增加.结论 老年GBA患者血浆Aβ40、Aβ42、p-tau水平明显提升,与CFI发生密切相关,联合检测能提升老年GBA诊断价值.

目的 探讨运动训练对轻度认知功能障碍(MCI)模型小鼠学习记忆能力减退及海马区病理学改变的影响.方法 选取健康雄性16月龄昆明小鼠90只,随机分为对照组、MCI模型组和运动干预组,每组30只.小鼠被给予颈背部皮下注射D-半乳糖(500 mg/kg)、亚硝酸钠(45 mg/kg)及三氯化铝(40 mg/kg)灌胃,连续3周,制作MCI小鼠模型.模型制作成功后,对运动干预组小鼠给予跑台运动干预3周.检测3组小鼠行为学变化、海马匀浆胆碱乙酰转移酶(ChAT)、乙酰胆碱酯酶(AchE)浓度、β-淀粉样蛋白42(Aβ42)含量,观察3组海马组织病理学改变.结果 与对照组比较,MCI模型组逃避潜伏期、第1次穿越原平台位置时间延长,在目标象限活动时间缩短(P<0.05);与MCI模型组比较,运动干预组逃避潜伏期、第1次穿越原平台位置时间缩短,在目标象限活动时间延长(P<0.05).与对照组比较,MCI模型组海马ChAT表达水平明显降低,AchE、Aβ42表达水平明显升高(P<0.05);与MCI模型组比较,运动干预组海马ChAT表达水平明显升高,AchE、Aβ42表达水平明显降低(P<0.05).MCI模型组海马CA1区锥体细胞密度下降,部分细胞核固缩、深染,可见少量细胞凋亡,神经纤维排列稍稀疏;银染示锥体细胞稍稀疏,细胞内神经元纤维稍增粗、模糊,细胞外未见Aβ斑.运动干预组海马CA1区锥体细胞密度增加,细胞结构及神经纤维清晰、有序,未见凋亡细胞;银染示CA1区锥体细胞排列有序,细胞内神经元纤维清晰.结论 运动训练可以明显改善 MCI 模型小鼠海马组织的病理学改变,提高其学习记忆能力.

建立基于质谱的受体结合分析方法 (MSBA),测定小分子探针与淀粉样蛋白-β(Aβ)聚集体的亲和力.针对阳性探针IMPY及其氘代产物IMPY-D6建立液相色谱-质谱(LC-MS)联用方法 和定量方法 ,随后进行基于质谱的饱和结合实验及竞争结合实验,最后将结果 与文献中放射性受体结合实验结果 进行比较.成功建立了IMPY的LC-MS方法 及基于质谱的受体结合测定方法 .其中,饱和结合实验中IM-PY与Aβ1-40及Aβ1-42的Kd分别为(3.80±0.39)nmol/L和(18.38±1.11)nmol/L.竞争结合实验中IMPY与Aβ1-40及Aβ1-42的Ki分别为(18.64±0.76)nmol/L和(25.44±2.38)nmol/L.均与文献中放射性受体结合实验结果 基本一致.MSBA作为一种非放射性结合实验方法 ,测定结果 与放射性受体结合实验基本一致,可用于小分子探针与Aβ的亲和力的测定,该技术平台可拓展至用于常规小分子配体与受体亲和力的测定.

目的 探讨乌灵胶囊联合奥拉西坦治疗阿尔茨海默病(AD)的临床疗效.方法 选取开滦精神卫生中心2018年7月至2019年1月收治的AD患者84例,按随机数字表法分为对照组和研究组,各42例.两组患者均予控血压、调血脂、降血糖等基础治疗,并予口服奥拉西坦胶囊,研究组患者加服乌灵胶囊,两组均持续治疗6个月.结果 研究组总有效率为90.48％,显著高于对照组的59.52％(P<0.05);治疗后,研究组患者治疗后的简易精神状态检查量表(MMSE)评分、Barthel指数量表评分和阿尔茨海默病生活质量量表(QOL-AD)评分及Aβ1-42水平均显著高于对照组(P<0.05),超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及Tau蛋白和P-tau181蛋白水平均显著低于对照组.两组治疗期间均未见严重不良反应.结论 乌灵胶囊联合奥拉西坦治疗AD,可改善患者的认知功能,提高日常生活能力和生活质量,减轻炎性反应,升高Aβ1-42水平,降低Tau蛋白和P-tau181蛋白水平.