背景 既往儿童消化系统疾病以感染性疾病为主,近年来遗传代谢性疾病的诊断率也逐渐升高.目的 总结常见的消化系统遗传代谢病的临床表型和基因型.设计 病例系列报告.方法 纳入在单中心 2015 年 1 月 1 日至 2019年 12 月 31 日因消化系统症状就诊且全外显子组基因检测结果异常的患儿.从病历系统中截取患儿的人口学资料、临床资料和基因检测结果.主要结局指标 临床表型和基因型.结果 320 例行基因检测的消化科患儿中结果异常 111 例(34.7%),诊断时年龄(2.4±2.8)岁,男 68 例(61.3%).主要疾病表型包括:遗传性肝病 70 例(63.1%),其中肝豆状核变性和糖原累积病各 15 例,Citrin缺乏症 13 例,Alagille综合征、进行性家族性肝内胆汁淤积症和胆红素代谢障碍各 9 例;极早发型炎症性肠病(VEO-IBD)8 例(7.2%);进行性肌营养不良 10 例(9.1%)等.肝豆状核变性多表现为无症状的持续性转氨酶升高(53.3%),ATP7B基因c.2333G＞T(p.R778L)是最常见的变异位点(53.3%).糖原累积病患儿的临床表现主要为低血糖、肝肿大、肝功能异常(均为 93.3%)以及TG升高(60.0%),亚型包括Ⅸa型6 例,Ⅲ型5 例,GSDⅠa、GSDⅡ、GSDⅥ和ⅩⅤ型各 1 例.9 例Alagille综合征患儿均有肝功能异常,8 例(88.9%)以"皮肤、巩膜黄染"就诊;8 例(88.9%)为JAG1基因变异(Alagille综合征 1 型),1 例为NOTCH2 基因变异(Alagille综合征2型).Citrin缺乏症患儿多因"皮肤黏膜黄染"入院(92.3%),多有肝酶异常、胆汁淤积和低血糖,13例均检出SLC25A13基因突变,以c.851_854del(38.5%)和c.852_855del(30.8%)位点最为常见.9 例进行性家族性肝内胆汁淤积症患儿均有肝脏肿大,ALT、AST和总胆汁酸升高,分型包括 2 型(ABCB11基因变异)6 例,3 型(ABCB4 基因变异)2 例,1 型(ATP8B1 基因变异)1 例.9 例胆红素代谢障碍患儿主诉均为"黄疸和/或肝功能异常",均检出UGT1A1 基因突变,c.211G＞A(p.G71R)(66.7%)和A(AT)6TAAinsTA(55.6%)是最常见的变异位点.8 例VEO-IBD患儿均以"慢性腹泻"为主诉,均有血WBC计数和CRP水平升高,消化道内镜均显示结肠黏膜出现鹅卵石样改变和深度溃疡;7 例为IL10-RA基因突变,最常见的为c.301C＞T(p.R101W)(62.5%)和c.537G＞A(p.T179T)(50%),1 例为IL10-RB基因的杂合突变.结论 基因检测在儿童消化系统遗传病的诊断及治疗中有重要作用.

2例散发性偏瘫性偏头痛患儿，例1，男，5岁10月龄，因“反复惊厥发作5年余，行为异常20 d”入院。例2，男，4岁6月龄，因“反复惊厥发作3年余，发热伴右侧肢体活动受限1 d”入院。2例患儿均无相关家族史，早期表现为热性惊厥，随年龄增长，在发热等诱因下出现先兆头痛伴急性脑病发作。基因检测均为ATP1A2基因错义变异，分别为c.2143G>A（p.Gly715Arg）、c.2563G>A（p.Gly855Arg）。

ATP1A3基因突变所致疾病构成了临床表型具有高度异质性的疾病谱系，近年来各类型重叠症状表型不断被报道。文中报道1例携带ATP1A3基因突变的非典型快速起病的肌张力障碍-帕金森症（RDP）重叠肌无力患儿的临床表型及基因突变特点。患儿男性，7岁，临床表现为发热后快速起病的全身肌张力障碍、构音障碍及发作性肌无力，基因检测发现患儿携带ATP1A3基因c.1838C>T（p.T613M）错义突变，结合患儿临床表现、基因检测结果和文献资料，患儿诊断为非典型RDP重叠肌无力。基因检测有助于ATP1A3谱系障碍非典型表型或重叠表型的诊断。

目的:探索新生儿高通量测序(HTS)基因筛查在新生儿筛查疾病早期诊断中的临床价值。方法:选取2021年3月至2021年9月于宁波市妇女儿童医院出生的2 060例新生儿为研究对象。对其采用传统串联质谱和荧光免疫分析筛查后，再应用HTS技术对135个筛查疾病相关致病基因的明确致病高频变异位点进行检测，可疑变异位点进行Sanger测序或多重连接探针扩增技术家系验证。结果:2 060例新生儿中，基因阳性31例，基因携带557例，基因阴性1 472例。31例基因阳性新生儿中， G6PD基因变异5例，遗传性非综合征型耳聋相关基因( GJB2、GJB3、MT-RNR1)变异19例， PAH基因变异2例， GAA基因变异1例， SMN1基因变异1例， MTTL1基因变异2例， GH1基因变异1例。结合基因结果和临床资料确诊脊髓性肌肉萎缩症(SMA)1例，糖原贮积症Ⅱ型1例，耳聋2例，G6PD缺乏症5例，额外诊断患儿母亲SMA 1例。2 060例新生儿经传统串联质谱检测未发现确诊患者；经传统荧光免疫分析筛查发现G6PD缺乏症5例(基因筛查阳性)，甲状腺功能减退症2例( DUOX2基因变异携带者)。宁波地区新生儿基因变异携带率前6位的基因分别为： DUOX2(3.93%)、 ATP7B(2.48%)、 SLC26A4(2.38%)、 GJB2(2.33%)、 PAH(2.09%)、 SLC22A5(2.09%)。 结论:新生儿基因筛查技术的疾病检测范围广泛，检出率高，与传统筛查联合可显著提高临床筛查效果，有助于患儿的二级预防、家系成员的疾病诊断和变异携带者的遗传咨询。

目的:探讨肝豆状核变性（WD）的基因型-表型关系，研究 ATP7B基因突变谱。 方法:回顾性分析2015年至2022年在郑州大学第一附属医院确诊的115例WD患者的临床资料和基因检测结果。计量资料比较采用秩和检验，计数资料比较采用 χ2检验；采用多因素logisitc回归法分析患者基因型和表型的相关性。 结果:以肝脏表现起病的（肝型）占60.9%，神经系统症状起病的（脑型）占13.0%，肝脑混合型占26.1%。症状前个体占肝型的62.9%。二代测序诊断WD的占87.8%，联合多重连接探针扩增技术诊断WD的占89.6%，仅检测到1个致病位点的占10.4%。基因检测结合临床资料对WD的诊断率为100%。共检出 ATP7B变异76种，突变频率最高前3位的为c.2333G>T(p.Arg778Leu，30.7%）、c.2975C>T(p.Pro992Leu，7.3%）和c.2621C>T(p.Ala874Val，6.4%）。变异主要分布在第8、11～13和15～18号外显子，占变异总数的90%以上。发现新变异8个，分别为c.3724G > A（p.Glu1242Lys）、c.3703G > C（p.Gly1235Arg）、c.3593T > C（p.Val1198Ala）、c.2494A > C（p.Lys832Gln）、c.1517T > A（p.Ile506Lys）、c.484G > T（p.Glu162Ter）、c.1870-49A > G和第10～21号外显子缺失。肝组织病理学示细胞水肿变性、炎性和坏死，铜染色阳性率仅为42.8%。基因型-表型分析显示，携带p.Arg778Leu变异者比携带其他变异者的丙氨酸转氨酶（ALT）水平更高（ P = 0.024），p.Arg778Leu纯合变异和脑型患者相关（ P = 0.027）。 结论:基因检测在WD确诊中发挥重要作用。p.Arg778Leu为中国人群第1高频变异，携带该变异的患者ALT水平较高；p.Arg778Leu纯合变异易导致脑型WD。该研究扩展了 ATP7B基因变异谱。

目的:应用腺相关病毒(AAV)-规律间隔成簇短回文重复序列及其相关核酸酶9(CRISPR/Cas9)系统体外实验研究基因治疗威尔森氏症(WD)。方法:选用2月龄雄性Toxic milk (TX)小鼠作WD模型，设计小向导RNA(sgRNA)并构建含有CRISPR元件的AAV载体质粒命名为pAAV-sgRNA1、2、3，制备AAV，病毒滴度达1～4×10 13 GC/ml；感染WD肝细胞，72 h后提取基因组DNA，聚合酶链反应(PCR)后测序检测基因编辑效率，筛选出其中活性最高者sgRNA1，构建相应的同源修复模板(HT)质粒命名为pAAV-HT，应用AAV-sgRNA1和AAV-HT共感染WD肝细胞，测序和T7E1酶切检测模板修复效率；用HT特异性引物行PCR，验证HT掺入。组间比较采用Student’s t检验。 结果:Sanger测序结果显示，sgRNA1在体外有最高的编辑效率[(20.2±2.3)%]，与sgRNA2、3比较[(3.1±1.3)%、(14.6±2.0)%]，差异有统计学意义( P<0.05)。进一步用HT进行基因修正，能检出特异性修正后的ATP7B基因；二代测序测序显示修复率为(7.9±2.7)%。 结论:AAV-CRISPR系统在体外可以达到较高编辑效率和修复效率。

目的:总结X连锁肾上腺脑白质营养不良（X-linked adrenoleukodystrophy, X-ALD）家系的基因变异及产前诊断特点，探讨产前诊断在预防X-ALD患儿出生中的应用价值。方法:回顾性纳入2012年11月至2019年3月在北京大学第一医院就诊的20个X-ALD家系。取先证者、家系成员的外周血标本及母亲再孕胎儿的羊水或绒毛标本，提取基因组DNA，应用聚合酶链反应-Sanger测序检测致病基因 ABCD1（ATP-binding cassette subfamily D member 1）的变异情况。同时选取 ABCD1基因附近的5个短串联重复序列位点进行连锁分析，以排除母源DNA污染。采用描述性统计分析总结X-ALD家系的基因变异及产前诊断特点。 结果:在20个X-ALD家系中，发现了20种 ABCD1基因变异。3例二代测序未检出 ABCD1基因变异的先证者均通过聚合酶链反应-Sanger测序检出变异。20例先证者的母亲中3例未发现携带变异，17例携带变异。20例母亲的24例次产前诊断（胎儿24例）中8例胎儿检出 ABCD1基因变异（引产终止妊娠），16例胎儿未检测到变异，均活产分娩。引产或者生后子代验证结果与产前诊断一致。 结论:致病基因 ABCD1无热点变异，变异大部分遗传自母亲，聚合酶链反应-Sanger测序是检测该基因变异的有效手段；对生育过X-ALD患者的母亲再孕时进行产前诊断，可以有效地预防患儿出生。

目的:探讨miRNA-511-3p（miR-511-3p）对肺癌细胞增殖和凋亡的影响，及ATP2A2、内质网应激在其中的可能作用。方法:回顾性收集2020年1月至2022年3月惠州市中心人民医院69例肺癌患者的肺癌组织和癌旁正常组织（距离肿瘤>2 cm）。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测癌和癌旁组织以及永生化肺上皮细胞株BEAS-2B、人肺细胞株CCD-19Lu、人肺癌细胞株A549、H1975、H1299中miR-511-3p转录水平相对表达量。选择miR-511-3p相对表达水平最低的肺癌细胞株A549进行后续实验。将细胞分为miR对照组（转染miR-511-3p无关序列）、miR-511-3p过表达组（转染miR-511-3p模拟物）、miR-511-3p敲低组（转染miR-511-3p抑制物）；另取A549细胞分为ATP2A2过表达对照组（转染空载质粒）、ATP2A2过表达组（转染ATP2A2过表达质粒），以及ATP2A2敲低对照组（转染载有小干扰RNA无关序列的质粒）和ATP2A2敲低组（转染载有ATP2A2小干扰RNA序列的质粒）。采用qRT-PCR法检测各组A549细胞miR-511-3p和ATP2A2转录水平相对表达量；蛋白质印迹法检测各组A549细胞ATP2A2蛋白及内质网应激标志蛋白的相对表达量；双荧光素酶报告基因实验验证miR-511-3p与ATP2A2 mRNA的靶向关系；CCK-8法检测各组A549细胞增殖能力（以吸光度值表示）；流式细胞术检测各组A549细胞中凋亡细胞占比；无机磷比色法检测各组A549细胞Ca 2+-ATP酶活性；荧光探针法检测各组A549细胞Ca 2+浓度。 结果:69例患者肺癌组织和癌旁组织miR-511-3p转录水平相对表达量分别为0.08±0.03、0.17±0.12，差异有统计学意义（ t=6.04， P<0.05）。miR-511-3p过表达组、miR-511-3p敲低组、miR对照组A549细胞中凋亡细胞占比分别为（58.1±6.1）%、（11.0±1.3）%、（22.0±2.1）%，miR-511-3p过表达组较miR对照组高，miR-511-3p敲低组较对照组低，差异均有统计学意义（ t值分别为9.70、7.64，均 P<0.05）。培养24、48、72 h后，miR-511-3p过表达组A549细胞增殖能力均较miR对照组低，miR-511-3p敲低组均较miR对照组高，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。ATP2A2敲低组、ATP2A2敲低对照组A549细胞中凋亡细胞占比分别为（58.2±1.5）%、（23.8±1.0）%，差异有统计学意义（ t=33.94， P<0.05）；ATP2A2过表达组、ATP2A2过表达对照组A549细胞中凋亡细胞占比分别为（13.8±2.0）%、（23.8±1.0）%，差异有统计学意义（ t=7.96，均 P<0.05）。miR-511-3p过表达组、miR-511-3p敲低组、miR对照组A549细胞ATP2A2转录水平相对表达量分别为0.11±0.01、1.34±0.19、0.51±0.12，miR-511-3p过表达组较miR对照组低，miR-511-3p敲低组较对照组高，差异均有统计学意义（ t值分别为5.76、6.40，均 P<0.05）；miR-511-3p过表达组A549细胞ATP2A2蛋白相对表达量较其对照组低，miR-511-3p敲低组较其对照组高，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验验证miR-511-3p与ATP2A2 mRNA存在靶向关系。对照组、miR-511-3p过表达组、ATP2A2过表达组、miR-511-3p过表达+ATP2A2过表达组A549细胞中凋亡细胞占比分别为（21.5±3.0）%、（58.1±5.0）%、（13.3±1.2）%、（20.5±4.0）%，差异有统计学意义（ F=73.28， P<0.001）；对照组、miR-511-3p敲低组、ATP2A2敲低组、miR-511-3p敲低+ATP2A2敲低组A549细胞中凋亡细胞占比分别为（23.5±3.0）%、（11.3±1.2）%、（60.1±7.0）%、（25.6±5.0）%，差异有统计学意义（ F=78.45， P<0.001）。ATP2A2过表达组A549细胞Ca 2+-ATP酶活性高于对照组，ATP2A2敲低组低于对照组，差异均有统计学意义（ t值分别为4.61、6.07，均 P<0.05）；ATP2A2过表达组A549细胞内Ca 2+浓度低于对照组，ATP2A2敲低组高于对照组，差异均有统计学意义（ t值分别为3.30、3.95，均 P< 0.05）。miR-511-3p过表达组A549细胞Ca 2+-ATP酶活性低于miR对照组，miR-511-3p敲低组高于miR对照组，差异均有统计学意义（ t值分别为6.54、4.16，均 P<0.05）；miR-511-3p过表达组A549细胞内Ca 2+浓度高于miR对照组，miR-511-3p敲低组低于miR对照组，差异均有统计学意义（ t值分别为3.60、6.23，均 P<0.05）。敲低ATP2A2或过表达miR-511-3p的A549细胞内质网应激标志GRP78、PERK、p-eIF2a、ATF4、CHOP蛋白相对表达量均较相应对照组高，差异均有统计学意义（均 P<0.05）；过表达ATP2A2或敲低miR-511-3p的A549细胞各蛋白相对表达量均较相应对照组低，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。 结论:miR-511-3p水平变化可能影响肺癌细胞的增殖和凋亡，机制可能是其靶向ATP2A2进而调控内质网应激而影响肺癌细胞凋亡。

目的:探讨肝豆状核变性（HLD）患者严重肝病表型的临床和遗传特征及其预测模型。方法:以1989年1月至2022年12月在上海交通大学医学院附属新华医院确诊的HLD住院患者为研究对象，根据受累器官进行临床分型，将有肝病表型者归于肝病组并进一步分为严重肝病组和普通肝病组。比较各组患者临床特征及基因变异，多元回归分析严重肝病患者的预测指标。据资料不同采用 t检验、Mann-Whitney U检验或 χ2检验进行统计学分析。 结果:159例HLD患者中肝病组142例（其中严重肝病组34例，普通肝病组108例），脑病组17例，肝病组和脑病组发病的中位数年龄差异有统计学意义[12.6（7.0，13.3）岁对16.9（11.0，21.5）岁， P<0.01]。83例有基因检测结果的患者累计发现156个 ATP7B基因突变位点，其中54例携带p.Arg778Leu基因突变（等位基因频率46.2%）。与其他类型基因突变患者（ n = 65）相比，p.Arg778Leu纯合突变患者（ n = 18）血液铜蓝蛋白和白蛋白水平更低，预后指数和Child-Pugh评分、国际标准化比值更高，凝血酶原时间更长（ P值均<0.05）。严重肝病组溶血性贫血、角膜K-F环、p.Arg778Leu纯合突变、以及多项实验室指标与普通肝病组相比差异有统计学意义（ P值均<0.05）。多因素logistic回归分析显示严重肝病的预测因素为p.Arg778Leu纯合突变、总胆红素、胆汁酸（ OR分别为16.512、1.022、1.021，95% CI分别为1.204～226.425、1.005～1.039、1.006～1.037， P值均<0.05），绘制受试者操作特征曲线的界值为0.215 3，曲线下面积为0.953 2，灵敏度为90.91%，特异度为92.42%。 结论:HLD患者肝病表型常见且起病早，总胆红素、胆汁酸、 ATP7B基因的p.Arg778Leu纯合突变与HLD患者肝病严重程度相关，有助于预测严重肝病发生风险。

目的:基于单细胞转录组测序(scRNA-seq)探讨小鼠脉络膜新生血管(CNV)中内皮细胞(EC)的分子表达与病理特征。方法:取6只6~8周龄C57BL/6小鼠按照随机数字表法随机分为2个组，每组3只，处死后摘取双眼眼球，分别采用剪碎脉络膜巩膜复合体法和刮取脉络膜法分离脉络膜组织，采用胰蛋白酶/Ⅰ型胶原酶37 ℃连续消化制得单细胞悬液，流式细胞术检测细胞活率及EC比例，确定单细胞悬液制备方法。选取6只小鼠随机分为正常对照组和CNV组，每组3只，其中CNV组小鼠建立激光诱导的CNV模型；于造模后7 d制备单细胞悬液，采用10xGenomics进行单细胞分离并构建测序文库，Illumina Novaseq6000进行高通量测序，获得基因表达矩阵；根据文献报道并参考Cellmarker数据库定义细胞亚群；选取EC亚群进行拟时序分析，生成各个细胞分化状态(State)的基因表达矩阵，筛选CNV-EC并初步分析表达特征。另选取6只小鼠建立CNV模型，于造模后7 d取小鼠眼球制备冰冻切片，免疫荧光染色检测EC标志物Pecam1与线粒体外膜蛋白Tomm20、mt-Co1和毛细血管标志物Kdr、Plvap的共定位及面积占比情况，并统计血管直径。结果:剪碎复合体和刮取脉络膜所制备单细胞悬液的细胞活率分别为99.4%和99.1%，符合测序要求；流式细胞术检测EC占比约为1.58%。scRNA-seq结果显示，正常对照组和CNV组小鼠脉络膜均包含13个细胞亚群，与正常对照组比较，CNV组视锥/视杆细胞、EC和造血系细胞比例增加，视网膜色素上皮(RPE)细胞和施万细胞比例相应减少。在所有细胞亚群中，EC比例为18.40%。EC拟时序分析显示，脉络膜EC可分为4个State，CNV组中位于State 2状态的EC比例为29.1%，较正常对照组的9.5%明显升高；差异基因分析显示，State 2 EC中线粒体相关基因 mt-Nd4和 mt-Atp6等表达上调而毛细血管基因 Kdr和 Esm1等表达显著下调。免疫荧光染色结果显示，CNV区域内Tomm20和mt-Co1在Pecam1阳性EC内表达分布面积比例分别为(19.50±4.68)%和(4.64±2.82)%，明显高于正常区域的(3.00±2.09)%和(0.18±0.34)%，差异均有统计学意义( t＝7.88、3.84，均 P<0.01)。CNV区域内Kdr和Plvap在Pecam1阳性EC内表达面积比例分别为(1.50±0.29)%和(0.79±0.97)%，明显低于正常区域的(31.30±5.44)%和(10.43±2.28)%，差异均有统计学意义( t＝13.40、9.48，均 P<0.01)。CNV区域血管直径为(5.52±1.85)μm，明显大于正常区域的(4.21±1.84)μm，差异有统计学意义( t＝9.57， P<0.001)。 结论:CNV发生时，脉络膜组织中EC比例增加，CNV-EC呈现线粒体代谢活化和毛细血管特性丢失的病理特征，提示EC线粒体活化可能在CNV生成中具有一定的作用。